GP73與sGP73：結(jié)腸癌診療新視角下的生物標(biāo)志物探索一、引言1.1研究背景與意義結(jié)腸癌作為消化系統(tǒng)常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，其發(fā)病率和死亡率在全球范圍內(nèi)呈上升趨勢(shì)。據(jù)國(guó)際癌癥研究機(jī)構(gòu)（IARC）發(fā)布的數(shù)據(jù)顯示，2020年全球結(jié)直腸癌新發(fā)病例達(dá)193萬(wàn)，死亡病例93.5萬(wàn)，嚴(yán)重威脅人類的生命健康。在中國(guó)，隨著人們生活方式和飲食習(xí)慣的改變，結(jié)腸癌的發(fā)病率也逐年攀升，2020年新發(fā)病例已超55萬(wàn)，且發(fā)病年齡趨于年輕化，給患者家庭和社會(huì)帶來(lái)沉重的負(fù)擔(dān)。目前，結(jié)腸癌的診斷主要依靠結(jié)腸鏡檢查、影像學(xué)檢查（如CT、MRI）以及腫瘤標(biāo)志物檢測(cè)等方法。結(jié)腸鏡檢查雖能直接觀察腸道病變并進(jìn)行活檢，但屬于侵入性檢查，患者依從性較差，且存在一定的漏診率；影像學(xué)檢查對(duì)早期結(jié)腸癌的診斷敏感性有限；腫瘤標(biāo)志物如癌胚抗原（CEA）和糖類抗原19-9（CA19-9），其在早期結(jié)腸癌中的陽(yáng)性率較低，對(duì)早期診斷的價(jià)值有限。因此，尋找一種準(zhǔn)確、便捷、無(wú)創(chuàng)的新型生物標(biāo)志物，對(duì)于提高結(jié)腸癌的早期診斷率和改善患者預(yù)后具有重要意義。高爾基體膜蛋白73（GP73）最初被發(fā)現(xiàn)是一種在肝癌組織中高表達(dá)的蛋白，與肝癌的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)。近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn)，GP73在多種惡性腫瘤中均有異常表達(dá)，包括結(jié)腸癌。血清可溶性GP73（sGP73）是GP73的一種剪切形式，可存在于血液中，更易于檢測(cè)。已有研究表明，GP73和sGP73在結(jié)腸癌患者中的表達(dá)水平可能與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展及預(yù)后相關(guān)，但目前相關(guān)研究較少，其具體作用機(jī)制尚不明確。深入研究GP73和sGP73在結(jié)腸癌患者中的表達(dá)及其意義，有望為結(jié)腸癌的早期診斷、病情監(jiān)測(cè)和預(yù)后評(píng)估提供新的思路和方法，具有重要的臨床應(yīng)用價(jià)值和理論研究意義。1.2研究目的本研究旨在深入探究GP73和sGP73在結(jié)腸癌患者中的表達(dá)情況，系統(tǒng)分析其與結(jié)腸癌臨床病理特征之間的內(nèi)在聯(lián)系，進(jìn)而挖掘它們?cè)诮Y(jié)腸癌早期診斷、病情監(jiān)測(cè)以及預(yù)后評(píng)估等方面的潛在應(yīng)用價(jià)值。具體而言，擬達(dá)成以下目標(biāo)：精確檢測(cè)GP73和sGP73在結(jié)腸癌組織、癌旁組織以及血清中的表達(dá)水平，并與正常結(jié)腸組織和健康人群血清進(jìn)行對(duì)比分析，明確其在結(jié)腸癌發(fā)生發(fā)展過(guò)程中的表達(dá)變化規(guī)律。全面剖析GP73和sGP73的表達(dá)水平與結(jié)腸癌患者的年齡、性別、腫瘤大小、病理分型、TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等臨床病理特征之間的相關(guān)性，為深入理解結(jié)腸癌的生物學(xué)行為提供理論依據(jù)。探索將GP73和sGP73作為新型生物標(biāo)志物應(yīng)用于結(jié)腸癌早期診斷的可行性，評(píng)估其對(duì)提高結(jié)腸癌早期診斷率的潛在貢獻(xiàn)，以期為臨床提供更有效的早期診斷指標(biāo)。分析GP73和sGP73的表達(dá)與結(jié)腸癌患者預(yù)后的關(guān)系，如無(wú)病生存期、總生存期等，為臨床醫(yī)生制定個(gè)性化的治療方案和預(yù)后評(píng)估提供參考依據(jù)，從而改善患者的生存質(zhì)量和預(yù)后情況。1.3國(guó)內(nèi)外研究現(xiàn)狀在國(guó)外，關(guān)于GP73和sGP73在結(jié)腸癌方面的研究雖有開展，但整體數(shù)量有限。早期研究初步揭示了GP73在腫瘤細(xì)胞高爾基體中的定位，為后續(xù)研究其在腫瘤發(fā)生發(fā)展中的作用奠定了基礎(chǔ)。有學(xué)者通過(guò)對(duì)不同腫瘤類型的研究，發(fā)現(xiàn)GP73在多種消化系統(tǒng)腫瘤中呈現(xiàn)異常表達(dá)，其中包括結(jié)腸癌，但其在結(jié)腸癌中的具體表達(dá)模式和調(diào)控機(jī)制尚未完全明確。對(duì)于sGP73，部分研究關(guān)注了其作為潛在腫瘤標(biāo)志物的可能性，通過(guò)對(duì)血清樣本的檢測(cè)分析，發(fā)現(xiàn)結(jié)腸癌患者血清sGP73水平與健康人群存在差異，但這些研究樣本量較小，研究結(jié)果的普適性有待進(jìn)一步驗(yàn)證。國(guó)內(nèi)在該領(lǐng)域的研究也逐步展開。南昌大學(xué)第一附屬醫(yī)院的一項(xiàng)研究收集了38例結(jié)腸癌患者的結(jié)腸癌組織及癌旁組織，13例非結(jié)腸癌患者的正常結(jié)腸組織及相應(yīng)血標(biāo)本，采用免疫組化和Westernblot技術(shù)檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，結(jié)腸癌組織中GP73表達(dá)顯著高于癌旁組織和正常結(jié)腸組織，結(jié)腸癌患者sGP73水平顯著高于非結(jié)腸癌患者。低分化結(jié)腸癌患者sGP73、GP73顯著高于中、高分化結(jié)腸癌患者，但該研究未深入探討GP73和sGP73與患者長(zhǎng)期生存結(jié)局以及腫瘤復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移等方面的關(guān)系。總體來(lái)看，目前國(guó)內(nèi)外關(guān)于GP73和sGP73在結(jié)腸癌患者中的表達(dá)及其意義的研究仍存在諸多不足。多數(shù)研究樣本量較小，導(dǎo)致研究結(jié)果的可靠性和推廣性受限；在研究?jī)?nèi)容上，對(duì)GP73和sGP73與結(jié)腸癌臨床病理特征的全面關(guān)聯(lián)分析不夠深入，尤其是在腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移、血管生成等關(guān)鍵生物學(xué)行為方面的研究較少；此外，對(duì)于GP73和sGP73在結(jié)腸癌發(fā)生發(fā)展中的分子機(jī)制研究還處于起步階段，尚未明確其上下游調(diào)控通路及相關(guān)作用靶點(diǎn)，這在一定程度上限制了其作為新型生物標(biāo)志物在臨床診斷、治療和預(yù)后評(píng)估中的應(yīng)用。二、相關(guān)理論基礎(chǔ)2.1結(jié)腸癌概述結(jié)腸癌是一種常見(jiàn)的消化系統(tǒng)惡性腫瘤，起源于結(jié)腸黏膜上皮細(xì)胞。其發(fā)病機(jī)制是一個(gè)復(fù)雜的、多步驟的過(guò)程，涉及遺傳因素、環(huán)境因素以及生活方式等多個(gè)方面。從遺傳角度來(lái)看，一些遺傳性疾病如家族性腺瘤性息肉病（FAP）和遺傳性非息肉病性結(jié)直腸癌（HNPCC），顯著增加了結(jié)腸癌的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)。在FAP患者中，由于APC基因的突變，腸道內(nèi)會(huì)出現(xiàn)大量腺瘤性息肉，這些息肉若不及時(shí)處理，極易發(fā)生惡變，進(jìn)而發(fā)展為結(jié)腸癌。環(huán)境因素和生活方式同樣在結(jié)腸癌的發(fā)病中扮演重要角色。長(zhǎng)期的高脂肪、低纖維飲食習(xí)慣被認(rèn)為是重要的危險(xiǎn)因素。高脂肪食物會(huì)增加腸道中膽汁酸的分泌，膽汁酸在腸道細(xì)菌的作用下可轉(zhuǎn)化為次級(jí)膽汁酸，這些次級(jí)膽汁酸具有細(xì)胞毒性，能夠損傷結(jié)腸黏膜上皮細(xì)胞的DNA，從而促進(jìn)癌變過(guò)程。低纖維飲食則會(huì)導(dǎo)致腸道蠕動(dòng)減慢，使得致癌物質(zhì)在腸道內(nèi)停留時(shí)間延長(zhǎng)，增加了其與腸黏膜的接觸機(jī)會(huì)，進(jìn)一步提高了癌變風(fēng)險(xiǎn)。此外，缺乏體育鍛煉、吸煙、過(guò)量飲酒等不良生活方式，也與結(jié)腸癌的發(fā)生密切相關(guān)。缺乏運(yùn)動(dòng)可導(dǎo)致肥胖，肥胖會(huì)引起體內(nèi)激素水平失衡和慢性炎癥反應(yīng)，這些因素都可能促進(jìn)腫瘤的發(fā)生發(fā)展；吸煙和飲酒會(huì)增加體內(nèi)自由基和致癌物質(zhì)的含量，對(duì)細(xì)胞的DNA造成損傷，進(jìn)而引發(fā)基因突變，為結(jié)腸癌的發(fā)生埋下隱患。在臨床癥狀方面，早期結(jié)腸癌患者往往無(wú)明顯癥狀，或僅表現(xiàn)出一些非特異性癥狀，如消化不良、腹脹、腹痛等，這些癥狀容易被忽視。隨著病情的進(jìn)展，患者會(huì)逐漸出現(xiàn)排便習(xí)慣與糞便性狀的改變，這是結(jié)腸癌最常見(jiàn)的早期癥狀之一，多表現(xiàn)為排便次數(shù)增加、腹瀉、便秘交替出現(xiàn)，糞便中可帶有血液、膿液或黏液。腹痛也是常見(jiàn)癥狀，通常為定位不確切的持續(xù)性隱痛，或僅表現(xiàn)為腹部不適、腹脹感。當(dāng)腫瘤進(jìn)一步生長(zhǎng)，患者可能會(huì)觸及腹部腫塊，腫塊大多堅(jiān)硬，呈結(jié)節(jié)狀，若癌腫穿透腸壁并發(fā)感染，腫塊則會(huì)固定，且有明顯壓痛。到了中晚期，患者還可能出現(xiàn)腸梗阻癥狀，表現(xiàn)為腹脹、腹痛、便秘等，這是由于腫瘤堵塞腸腔，導(dǎo)致腸內(nèi)容物通過(guò)受阻所致。此外，由于長(zhǎng)期慢性失血、癌腫潰爛、感染以及毒素吸收等原因，患者還會(huì)出現(xiàn)貧血、消瘦、乏力、低熱等全身癥狀。病程晚期，當(dāng)腫瘤發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移時(shí)，還會(huì)出現(xiàn)相應(yīng)轉(zhuǎn)移部位的癥狀，如肝轉(zhuǎn)移可出現(xiàn)黃疸、腹水，肺轉(zhuǎn)移可出現(xiàn)咳嗽、咯血等。結(jié)腸癌的診斷方法主要包括腸鏡檢查、影像學(xué)檢查以及腫瘤標(biāo)志物檢測(cè)等。腸鏡檢查是診斷結(jié)腸癌的重要手段，它能夠直接觀察腸道黏膜的病變情況，并可在直視下取組織進(jìn)行病理活檢，從而明確病變的性質(zhì)和類型，是診斷結(jié)腸癌的金標(biāo)準(zhǔn)。然而，腸鏡檢查屬于侵入性操作，部分患者難以接受，且存在一定的漏診率，尤其是對(duì)于較小的病變或位于腸道彎曲部位的病變，容易漏診。影像學(xué)檢查如CT、MRI等，可清晰顯示腫瘤的位置、大小、形態(tài)以及與周圍組織的關(guān)系，對(duì)于判斷腫瘤的侵犯范圍和轉(zhuǎn)移情況具有重要價(jià)值，但這些檢查對(duì)早期結(jié)腸癌的診斷敏感性有限，難以發(fā)現(xiàn)直徑較小的腫瘤。腫瘤標(biāo)志物檢測(cè)是一種簡(jiǎn)便、無(wú)創(chuàng)的輔助診斷方法，常用的腫瘤標(biāo)志物有癌胚抗原（CEA）、糖類抗原19-9（CA19-9）等。CEA在結(jié)腸癌患者中的陽(yáng)性率約為30%-70%，其水平與腫瘤的分期、大小以及轉(zhuǎn)移情況相關(guān)，在結(jié)腸癌的病情監(jiān)測(cè)和預(yù)后評(píng)估方面有一定的參考價(jià)值；CA19-9在結(jié)腸癌患者中的陽(yáng)性率相對(duì)較低，但在伴有肝轉(zhuǎn)移或腸梗阻的患者中，其水平可能會(huì)顯著升高。然而，這些傳統(tǒng)腫瘤標(biāo)志物在早期結(jié)腸癌中的陽(yáng)性率較低，對(duì)早期診斷的價(jià)值有限。目前，結(jié)腸癌的治療手段主要以手術(shù)治療為主，結(jié)合化療、放療、靶向治療以及免疫治療等綜合治療方法。手術(shù)治療是根治結(jié)腸癌的主要方法，根據(jù)腫瘤的部位和分期，可選擇不同的手術(shù)方式，如右半結(jié)腸切除術(shù)、橫結(jié)腸切除術(shù)、左半結(jié)腸切除術(shù)、乙狀結(jié)腸癌根治切除術(shù)等。對(duì)于早期結(jié)腸癌患者，手術(shù)切除腫瘤后，治愈率較高；對(duì)于中晚期患者，手術(shù)切除腫瘤可減輕腫瘤負(fù)荷，緩解癥狀，提高患者的生活質(zhì)量，并為后續(xù)的綜合治療創(chuàng)造條件。化療是結(jié)腸癌綜合治療的重要組成部分，可分為輔助化療、新輔助化療和姑息化療。輔助化療是在手術(shù)后進(jìn)行，目的是殺滅殘留的癌細(xì)胞，降低腫瘤復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移的風(fēng)險(xiǎn)；新輔助化療是在手術(shù)前進(jìn)行，可使腫瘤縮小，降低腫瘤分期，提高手術(shù)切除率；姑息化療則用于晚期無(wú)法手術(shù)切除或復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的患者，旨在緩解癥狀，延長(zhǎng)生存期。化療藥物主要包括氟尿嘧啶、奧沙利鉑、伊立替康等，這些藥物通過(guò)不同的作用機(jī)制抑制癌細(xì)胞的增殖和分裂。放療主要用于局部晚期結(jié)腸癌患者，可在手術(shù)前或手術(shù)后進(jìn)行，通過(guò)高能射線照射腫瘤部位，殺死癌細(xì)胞，降低局部復(fù)發(fā)率。靶向治療是近年來(lái)發(fā)展起來(lái)的一種新型治療方法，它針對(duì)腫瘤細(xì)胞的特定分子靶點(diǎn)進(jìn)行作用，具有特異性強(qiáng)、療效好、副作用小等優(yōu)點(diǎn)。常用的靶向藥物有貝伐珠單抗、西妥昔單抗等，貝伐珠單抗通過(guò)抑制血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF）的活性，阻斷腫瘤血管生成，從而抑制腫瘤的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移；西妥昔單抗則通過(guò)與表皮生長(zhǎng)因子受體（EGFR）結(jié)合，抑制腫瘤細(xì)胞的增殖和信號(hào)傳導(dǎo)。免疫治療是利用人體自身的免疫系統(tǒng)來(lái)對(duì)抗腫瘤，通過(guò)激活免疫細(xì)胞，增強(qiáng)機(jī)體對(duì)腫瘤細(xì)胞的識(shí)別和殺傷能力。目前在結(jié)腸癌治療中應(yīng)用較多的免疫治療藥物是免疫檢查點(diǎn)抑制劑，如帕博利珠單抗、納武利尤單抗等，這些藥物主要用于微衛(wèi)星高度不穩(wěn)定（MSI-H）或錯(cuò)配修復(fù)缺陷（dMMR）的結(jié)腸癌患者，可顯著提高患者的生存率。2.2GP73與sGP73概述GP73，全稱為高爾基體膜蛋白73，是一種II型跨膜糖蛋白，其基因定位于人類染色體9q22.33。GP73蛋白由409個(gè)氨基酸組成，相對(duì)分子質(zhì)量約為73kDa。從結(jié)構(gòu)上看，GP73包含一個(gè)短的N端細(xì)胞質(zhì)結(jié)構(gòu)域、一個(gè)跨膜結(jié)構(gòu)域以及一個(gè)長(zhǎng)的C端高爾基腔結(jié)構(gòu)域。在正常生理狀態(tài)下，GP73主要表達(dá)于膽管上皮細(xì)胞，在肝細(xì)胞、腎小管上皮細(xì)胞、小腸上皮細(xì)胞等多種上皮細(xì)胞中也有少量表達(dá)。其在細(xì)胞內(nèi)的主要功能與高爾基體的正常生理活動(dòng)密切相關(guān)，參與蛋白質(zhì)的糖基化修飾、加工和運(yùn)輸過(guò)程。例如，GP73能夠協(xié)助某些糖蛋白在高爾基體中的正確折疊和組裝，確保這些蛋白具備正常的生物學(xué)功能，從而維持細(xì)胞內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定和正常生理代謝。當(dāng)機(jī)體處于疾病狀態(tài)時(shí)，尤其是在腫瘤發(fā)生發(fā)展過(guò)程中，GP73的表達(dá)會(huì)發(fā)生顯著變化。大量研究表明，在肝癌、肺癌、胰腺癌等多種惡性腫瘤組織中，GP73呈現(xiàn)高表達(dá)狀態(tài)。在肝癌的研究中發(fā)現(xiàn)，GP73在肝癌組織中的表達(dá)水平明顯高于癌旁組織和正常肝組織，且其表達(dá)水平與肝癌的分化程度、腫瘤大小、TNM分期等臨床病理特征密切相關(guān)。進(jìn)一步的研究揭示，GP73可能通過(guò)參與多條信號(hào)通路，如Wnt/β-catenin信號(hào)通路、PI3K/Akt信號(hào)通路等，來(lái)影響腫瘤細(xì)胞的增殖、凋亡、遷移和侵襲能力。在Wnt/β-catenin信號(hào)通路中，GP73可能通過(guò)與某些關(guān)鍵蛋白相互作用，促進(jìn)β-catenin的核轉(zhuǎn)位，進(jìn)而激活下游靶基因的表達(dá)，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖和遷移；在PI3K/Akt信號(hào)通路中，GP73可能通過(guò)調(diào)節(jié)PI3K的活性，激活A(yù)kt蛋白的磷酸化，從而抑制腫瘤細(xì)胞的凋亡，增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞的存活能力。sGP73是GP73的一種可溶性剪切形式，它主要是由GP73在特定的酶切作用下，從細(xì)胞膜表面剪切釋放到細(xì)胞外，進(jìn)而進(jìn)入血液循環(huán)系統(tǒng)。sGP73的產(chǎn)生機(jī)制目前尚未完全明確，但研究推測(cè)可能與腫瘤微環(huán)境中的一些蛋白酶活性改變有關(guān)。在腫瘤組織中，由于腫瘤細(xì)胞的異常增殖和代謝，會(huì)導(dǎo)致腫瘤微環(huán)境發(fā)生一系列變化，其中包括一些蛋白酶的表達(dá)和活性升高。這些蛋白酶可能作用于GP73，使其在特定的位點(diǎn)被剪切，從而產(chǎn)生sGP73。例如，基質(zhì)金屬蛋白酶（MMPs）家族中的某些成員，如MMP-2和MMP-9，在腫瘤組織中高表達(dá)，它們可能參與了GP73的剪切過(guò)程，促進(jìn)sGP73的生成。與GP73類似，sGP73在多種疾病狀態(tài)下也發(fā)揮著重要作用，尤其是在腫瘤的診斷和病情監(jiān)測(cè)方面具有潛在價(jià)值。由于sGP73存在于血液中，通過(guò)簡(jiǎn)單的血液檢測(cè)即可獲取，這為臨床檢測(cè)提供了極大的便利。眾多研究顯示，在肝癌、胃癌、結(jié)直腸癌等多種消化系統(tǒng)腫瘤患者的血清中，sGP73水平顯著高于健康人群。在肝癌患者中，血清sGP73水平不僅與腫瘤的大小、分期相關(guān)，還與患者的預(yù)后密切相關(guān)，高水平的sGP73往往提示患者預(yù)后不良。在結(jié)直腸癌的研究中，雖然相關(guān)研究相對(duì)較少，但已有研究表明，結(jié)腸癌患者血清sGP73水平高于正常人群，且與腫瘤的病理分級(jí)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等因素有關(guān)。sGP73可能通過(guò)與腫瘤細(xì)胞表面的某些受體結(jié)合，或者參與細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶（ERK）等信號(hào)通路，來(lái)影響腫瘤細(xì)胞的生物學(xué)行為。當(dāng)sGP73與腫瘤細(xì)胞表面的受體結(jié)合后，可能會(huì)激活下游的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖和轉(zhuǎn)移；在ERK信號(hào)通路中，sGP73可能通過(guò)調(diào)節(jié)ERK的磷酸化水平，影響腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)、存活和遷移能力。三、研究設(shè)計(jì)與方法3.1研究對(duì)象本研究的病例組為[具體時(shí)間段]在[醫(yī)院名稱]就診并經(jīng)病理組織學(xué)確診為結(jié)腸癌的患者，共納入100例。納入標(biāo)準(zhǔn)如下：具有明確的結(jié)腸癌診斷，經(jīng)手術(shù)切除或活檢獲取的組織標(biāo)本，病理診斷為結(jié)腸癌；患者病歷資料完整，包括詳細(xì)的臨床癥狀、體征記錄，以及影像學(xué)檢查（如CT、MRI等）和實(shí)驗(yàn)室檢查結(jié)果；患者年齡在18周歲及以上，無(wú)嚴(yán)重心、肝、腎等重要臟器功能障礙，無(wú)其他惡性腫瘤病史，且未接受過(guò)抗腫瘤治療（如化療、放療、靶向治療等）。排除標(biāo)準(zhǔn)包括：合并其他部位惡性腫瘤的患者，以免其他腫瘤對(duì)研究指標(biāo)產(chǎn)生干擾；患有嚴(yán)重心腦血管疾病、自身免疫性疾病、感染性疾病等，可能影響患者機(jī)體代謝和免疫功能，進(jìn)而干擾研究結(jié)果的準(zhǔn)確性；妊娠或哺乳期女性，考慮到妊娠和哺乳期女性體內(nèi)激素水平和生理狀態(tài)的特殊性，可能對(duì)GP73和sGP73的表達(dá)產(chǎn)生影響。對(duì)照組選取同期在該醫(yī)院進(jìn)行健康體檢的人群，共計(jì)100例。入選標(biāo)準(zhǔn)為：年齡、性別與病例組相匹配，年齡相差不超過(guò)5歲，性別比例保持一致，以減少年齡和性別因素對(duì)研究結(jié)果的干擾；無(wú)惡性腫瘤病史，通過(guò)詳細(xì)詢問(wèn)病史、體格檢查以及必要的影像學(xué)檢查（如胸部X線、腹部超聲等）進(jìn)行排查；無(wú)嚴(yán)重心腦血管疾病、糖尿病、高血壓等慢性疾病，通過(guò)詢問(wèn)病史、測(cè)量血壓、血糖檢測(cè)以及相關(guān)生化指標(biāo)檢測(cè)（如肝腎功能、血脂等）進(jìn)行評(píng)估；無(wú)胃腸道疾病癥狀，如腹痛、腹瀉、便秘等，且糞便潛血試驗(yàn)陰性，以確保腸道處于健康狀態(tài)。在樣本采集過(guò)程中，詳細(xì)記錄所有研究對(duì)象的基本信息，包括姓名、性別、年齡、聯(lián)系方式、家庭住址等，同時(shí)收集患者的臨床資料，如家族病史、既往疾病史、生活習(xí)慣（如吸煙、飲酒、飲食習(xí)慣等）、腫瘤相關(guān)癥狀、手術(shù)記錄、病理報(bào)告、影像學(xué)檢查報(bào)告以及實(shí)驗(yàn)室檢查結(jié)果等。對(duì)于結(jié)腸癌患者，還需記錄腫瘤的部位（如升結(jié)腸、橫結(jié)腸、降結(jié)腸、乙狀結(jié)腸等）、大小、病理類型（如腺癌、黏液腺癌、未分化癌等）、TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況等詳細(xì)的臨床病理信息。所有研究對(duì)象在參與本研究前均簽署知情同意書，本研究方案經(jīng)過(guò)醫(yī)院倫理委員會(huì)的審核批準(zhǔn)，嚴(yán)格遵循醫(yī)學(xué)倫理原則，保障研究對(duì)象的合法權(quán)益。3.2實(shí)驗(yàn)材料與儀器本實(shí)驗(yàn)所需的材料與儀器如下：實(shí)驗(yàn)材料：病例組100例結(jié)腸癌患者的手術(shù)切除組織標(biāo)本（包括結(jié)腸癌組織和距離腫瘤邊緣5cm以上的癌旁組織），以及術(shù)前清晨空腹采集的靜脈血5ml；對(duì)照組100例健康體檢者的正常結(jié)腸組織活檢標(biāo)本（取自腸鏡檢查時(shí)距肛門10-15cm處的結(jié)腸黏膜），和同樣條件下采集的靜脈血5ml。所有組織標(biāo)本采集后，立即用預(yù)冷的生理鹽水沖洗，去除表面血跡和雜質(zhì)，然后將一部分組織切成約1cm×1cm×1cm大小的小塊，放入10%中性福爾馬林溶液中固定，用于后續(xù)的免疫組化實(shí)驗(yàn)；另一部分組織迅速放入液氮中速凍，然后轉(zhuǎn)移至-80℃冰箱保存，用于提取RNA和蛋白質(zhì)。血液標(biāo)本采集后，立即以3000rpm離心15分鐘，分離血清，將血清轉(zhuǎn)移至無(wú)菌EP管中，-80℃冰箱保存?zhèn)溆谩Ｖ饕噭篢RIzol試劑（Invitrogen公司），用于提取組織和細(xì)胞中的RNA；逆轉(zhuǎn)錄試劑盒（TaKaRa公司），將RNA逆轉(zhuǎn)錄為cDNA；SYBRGreen熒光定量PCR試劑盒（Roche公司），用于實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)GP73和sGP73的mRNA表達(dá)水平；兔抗人GP73多克隆抗體（Abcam公司）、鼠抗人sGP73單克隆抗體（SantaCruz公司），分別用于檢測(cè)GP73和sGP73蛋白的表達(dá)；HRP標(biāo)記的山羊抗兔IgG和山羊抗鼠IgG（北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司），作為二抗用于Westernblot和免疫組化實(shí)驗(yàn)；BCA蛋白定量試劑盒（ThermoFisherScientific公司），用于測(cè)定蛋白質(zhì)濃度；PVDF膜（Millipore公司），用于Westernblot轉(zhuǎn)膜；ECL化學(xué)發(fā)光試劑盒（ThermoFisherScientific公司），用于Westernblot結(jié)果的顯色；DAB顯色試劑盒（北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司），用于免疫組化結(jié)果的顯色；蘇木精-伊紅（HE）染色試劑盒（上海碧云天生物技術(shù)有限公司），用于組織切片的常規(guī)染色；其他試劑如無(wú)水乙醇、二甲苯、甲醇、TritonX-100、BSA、TBST緩沖液等均為國(guó)產(chǎn)分析純?cè)噭x器設(shè)備：高速冷凍離心機(jī)（Eppendorf公司），用于分離血清和細(xì)胞；低溫冰箱（ThermoFisherScientific公司），保存組織標(biāo)本、血清和試劑；PCR儀（Bio-Rad公司），進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄和PCR反應(yīng)；實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀（Roche公司），檢測(cè)GP73和sGP73的mRNA表達(dá)水平；電泳儀（Bio-Rad公司）和垂直電泳槽，用于蛋白質(zhì)電泳；半干轉(zhuǎn)膜儀（Bio-Rad公司），將蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移到PVDF膜上；化學(xué)發(fā)光成像系統(tǒng)（Bio-Rad公司），檢測(cè)Westernblot結(jié)果；石蠟切片機(jī)（Leica公司），制作組織切片；光學(xué)顯微鏡（Olympus公司），觀察組織切片和免疫組化結(jié)果；移液器（Eppendorf公司），準(zhǔn)確移取試劑和樣品；渦旋振蕩器、微量離心機(jī)、水浴鍋等常規(guī)實(shí)驗(yàn)室儀器。3.3實(shí)驗(yàn)方法3.3.1樣本采集與處理血樣采集方面，對(duì)于病例組的100例結(jié)腸癌患者，在術(shù)前清晨空腹?fàn)顟B(tài)下，使用一次性真空采血管采集肘靜脈血5ml。對(duì)于對(duì)照組的100例健康體檢者，同樣在清晨空腹時(shí)采集肘靜脈血5ml。采集后的血樣立即以3000rpm的轉(zhuǎn)速離心15分鐘，將上層血清小心轉(zhuǎn)移至無(wú)菌的EP管中，并標(biāo)記好樣本信息，隨后放置于-80℃的低溫冰箱中保存，以防止血清中的蛋白等成分發(fā)生降解或變性，確保后續(xù)檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。組織樣本采集時(shí)，在結(jié)腸癌患者進(jìn)行手術(shù)切除腫瘤的過(guò)程中，獲取結(jié)腸癌組織以及距離腫瘤邊緣5cm以上的癌旁組織。對(duì)于對(duì)照組的正常結(jié)腸組織，取自腸鏡檢查時(shí)距肛門10-15cm處的結(jié)腸黏膜活檢標(biāo)本。所有組織標(biāo)本采集后，迅速用預(yù)冷的生理鹽水輕柔沖洗，以去除表面附著的血跡和雜質(zhì)，避免對(duì)后續(xù)實(shí)驗(yàn)造成干擾。將一部分組織切成約1cm×1cm×1cm大小的小塊，放入裝有10%中性福爾馬林溶液的容器中固定，用于后續(xù)的免疫組化實(shí)驗(yàn)，以確定GP73和sGP73在組織中的具體定位和表達(dá)情況。另一部分組織則迅速放入液氮中速凍，使組織中的水分瞬間凍結(jié)，減少細(xì)胞內(nèi)物質(zhì)的降解，之后轉(zhuǎn)移至-80℃冰箱保存，用于提取RNA和蛋白質(zhì)，以便進(jìn)行基因和蛋白水平的檢測(cè)分析。DNA提取采用酚-氯仿抽提法。將冷凍的組織樣本取出，放入預(yù)冷的研缽中，加入液氮，迅速研磨成粉末狀，使組織細(xì)胞充分破碎。將研磨后的粉末轉(zhuǎn)移至離心管中，加入適量的DNA提取緩沖液，充分混勻，使細(xì)胞裂解，釋放出DNA。加入等體積的酚-氯仿-異戊醇混合液（體積比為25:24:1），輕輕顛倒離心管，使溶液充分混合，此時(shí)蛋白質(zhì)和DNA會(huì)分別溶解在有機(jī)相和水相中。以12000rpm的轉(zhuǎn)速離心15分鐘，溶液會(huì)分層，上層水相含有DNA，下層有機(jī)相含有蛋白質(zhì)和其他雜質(zhì)。小心吸取上層水相轉(zhuǎn)移至新的離心管中，加入1/10體積的3mol/L醋酸鈉溶液和2倍體積的無(wú)水乙醇，輕輕混勻，DNA會(huì)沉淀析出。以12000rpm的轉(zhuǎn)速離心10分鐘，棄去上清液，用70%乙醇洗滌沉淀2-3次，去除殘留的雜質(zhì)和鹽分。將沉淀在室溫下晾干，加入適量的TE緩沖液溶解DNA，得到的DNA溶液保存于-20℃?zhèn)溆谩NA提取使用TRIzol試劑法。從-80℃冰箱中取出冷凍的組織樣本，加入TRIzol試劑，用勻漿器充分勻漿，使組織細(xì)胞完全裂解，釋放出RNA。每1mlTRIzol試劑裂解的樣品中加入0.2ml的氯仿，蓋緊管蓋后手動(dòng)劇烈振蕩管體15秒，使溶液充分混合，之后在15-30℃孵育2-3分鐘，促進(jìn)相分離。在4℃下以12000rpm的轉(zhuǎn)速離心15分鐘，此時(shí)混合液體將分為下層的紅色酚氯仿相、中間層以及無(wú)色水相上層，RNA全部被分配于水相中。小心將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無(wú)RNA酶的離心管中，加入等體積異丙醇，混勻后在15-30℃孵育10分鐘，使RNA沉淀。于4℃下以12000rpm的轉(zhuǎn)速離心10分鐘，離心前不可見(jiàn)的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊。移去上清液，每1mlTRIzol試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇（75%乙醇用DEPC處理過(guò)的水配制），清洗RNA沉淀，混勻后在4℃下以7000rpm的轉(zhuǎn)速離心5分鐘。小心吸去大部分乙醇溶液，使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘，避免RNA過(guò)度干燥導(dǎo)致難以溶解。最后加入無(wú)RNA酶的水40μl，用槍反復(fù)吹打幾次，使其完全溶解，獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。提取后的RNA通過(guò)紫外分光光度計(jì)測(cè)定其在260nm和280nm處的吸光度，計(jì)算A260/A280的比值，評(píng)估RNA的純度，比值范圍在1.8-2.1之間表明RNA純度較高；同時(shí)通過(guò)變性瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)RNA的完整性，觀察是否有明顯的條帶，以確保RNA質(zhì)量符合后續(xù)實(shí)驗(yàn)要求。蛋白質(zhì)提取采用RIPA裂解液法。將冷凍的組織樣本置于冰上解凍，加入適量預(yù)冷的RIPA裂解液（含蛋白酶抑制劑），用勻漿器充分勻漿，使組織細(xì)胞裂解，釋放出蛋白質(zhì)。在冰上孵育30分鐘，期間不時(shí)振蕩，使蛋白質(zhì)充分溶解。以12000rpm的轉(zhuǎn)速在4℃下離心15分鐘，去除細(xì)胞碎片和不溶性雜質(zhì)，將上清液轉(zhuǎn)移至新的離心管中，即為提取的蛋白質(zhì)溶液。使用BCA蛋白定量試劑盒測(cè)定蛋白質(zhì)濃度，具體操作如下：將標(biāo)準(zhǔn)品（牛血清白蛋白）用PBS稀釋成不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液，如0μg/ml、25μg/ml、50μg/ml、100μg/ml、200μg/ml、400μg/ml、800μg/ml、1600μg/ml。取96孔板，分別加入20μl不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液和20μl待測(cè)蛋白質(zhì)樣品，每個(gè)樣品設(shè)置3個(gè)復(fù)孔。向各孔中加入200μlBCA工作液（由BCA試劑A和試劑B按50:1的比例混合而成），輕輕混勻，避免產(chǎn)生氣泡。將96孔板在37℃孵育30分鐘，使反應(yīng)充分進(jìn)行。使用酶標(biāo)儀測(cè)定各孔在562nm處的吸光度值，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出待測(cè)蛋白質(zhì)樣品的濃度。將蛋白質(zhì)溶液分裝后保存于-80℃冰箱備用。3.3.2GP73和sGP73表達(dá)水平檢測(cè)實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)mRNA表達(dá)水平：首先進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)，將提取的RNA逆轉(zhuǎn)錄為cDNA。使用逆轉(zhuǎn)錄試劑盒（TaKaRa公司），按照說(shuō)明書操作。在冰上配制逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)體系，總體積為20μl，包括5×PrimeScriptBuffer4μl、PrimeScriptRTEnzymeMixI1μl、Oligo(dT)Primer1μl、Random6mers1μl、總RNA1μg，最后用RNaseFreedH?O補(bǔ)齊至20μl。輕輕混勻后，短暫離心，將反應(yīng)管放入PCR儀中進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)，條件為37℃15分鐘，85℃5秒，4℃保存。逆轉(zhuǎn)錄完成后，得到的cDNA可用于后續(xù)的實(shí)時(shí)熒光定量PCR反應(yīng)。實(shí)時(shí)熒光定量PCR反應(yīng)體系為20μl，包括SYBRGreen熒光定量PCRMasterMix10μl、上下游引物（10μM）各0.8μl、cDNA模板2μl，用ddH?O補(bǔ)齊至20μl。GP73上游引物序列為：5'-[具體序列1]-3'，下游引物序列為：5'-[具體序列2]-3'；sGP73上游引物序列為：5'-[具體序列3]-3'，下游引物序列為：5'-[具體序列4]-3'；內(nèi)參基因GAPDH上游引物序列為：5'-[具體序列5]-3'，下游引物序列為：5'-[具體序列6]-3'。將反應(yīng)體系加入到96孔板中，每個(gè)樣品設(shè)置3個(gè)復(fù)孔，使用實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀（Roche公司）進(jìn)行擴(kuò)增反應(yīng)。反應(yīng)條件為：95℃預(yù)變性30秒，然后進(jìn)行40個(gè)循環(huán)，每個(gè)循環(huán)包括95℃變性5秒，60℃退火30秒，在退火階段采集熒光信號(hào)。擴(kuò)增結(jié)束后，通過(guò)儀器自帶的軟件分析數(shù)據(jù)，采用2?ΔΔCt法計(jì)算GP73和sGP73mRNA的相對(duì)表達(dá)量，ΔCt=Ct（目的基因）-Ct（內(nèi)參基因），ΔΔCt=ΔCt（實(shí)驗(yàn)組）-ΔCt（對(duì)照組）。Westernblotting檢測(cè)蛋白表達(dá)水平：取適量提取的蛋白質(zhì)樣品，加入5×SDS-PAGE上樣緩沖液，按照4:1的比例混合，在100℃金屬浴中煮5-10分鐘，使蛋白質(zhì)充分變性。根據(jù)蛋白質(zhì)的分子量選擇合適的分離膠和濃縮膠濃度，一般分離膠濃度為10%-12%，濃縮膠濃度為5%。將變性后的蛋白質(zhì)樣品加入到上樣孔中，同時(shí)加入蛋白Marker，用于指示蛋白質(zhì)的分子量大小。在電泳儀中進(jìn)行電泳，濃縮膠電壓設(shè)置為80V，待樣品進(jìn)入分離膠后，將電壓調(diào)整為120V，電泳至溴酚藍(lán)指示劑到達(dá)膠底部時(shí)結(jié)束。電泳結(jié)束后，使用半干轉(zhuǎn)膜儀將凝膠上的蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移到PVDF膜上。轉(zhuǎn)膜前，先將PVDF膜在甲醇中浸泡1-2分鐘，使其活化，然后放入轉(zhuǎn)膜緩沖液中平衡。將凝膠、PVDF膜和濾紙按照從下到上的順序依次放入轉(zhuǎn)膜夾中，注意避免產(chǎn)生氣泡。轉(zhuǎn)膜條件為15V，轉(zhuǎn)膜時(shí)間根據(jù)蛋白質(zhì)分子量大小調(diào)整，一般為30-60分鐘。轉(zhuǎn)膜結(jié)束后，將PVDF膜取出，放入含有5%脫脂奶粉的TBST緩沖液中，在搖床上室溫封閉1-2小時(shí)，以封閉膜上的非特異性結(jié)合位點(diǎn)。封閉結(jié)束后，將PVDF膜放入兔抗人GP73多克隆抗體（1:1000稀釋）或鼠抗人sGP73單克隆抗體（1:1000稀釋）中，4℃孵育過(guò)夜，使抗體與膜上的目的蛋白特異性結(jié)合。第二天，將膜取出，用TBST緩沖液洗滌3次，每次10分鐘，以去除未結(jié)合的抗體。然后將膜放入HRP標(biāo)記的山羊抗兔IgG（1:5000稀釋）或山羊抗鼠IgG（1:5000稀釋）中，室溫孵育1-2小時(shí)，使二抗與一抗特異性結(jié)合。再次用TBST緩沖液洗滌3次，每次10分鐘。最后，將ECL化學(xué)發(fā)光試劑A液和B液按照1:1的比例混合，滴加到PVDF膜上，在化學(xué)發(fā)光成像系統(tǒng)（Bio-Rad公司）中曝光成像，分析目的蛋白條帶的灰度值，以內(nèi)參蛋白GAPDH作為對(duì)照，計(jì)算GP73和sGP73蛋白的相對(duì)表達(dá)量。3.3.3免疫組化實(shí)驗(yàn)免疫組化用于定位GP73和sGP73在結(jié)腸癌組織中的位置。將10%中性福爾馬林固定的組織標(biāo)本進(jìn)行常規(guī)石蠟包埋，使用石蠟切片機(jī)切成4μm厚的切片。將切片置于60℃烤箱中烘烤1-2小時(shí)，使切片牢固附著在載玻片上。脫蠟和水化：將切片依次放入二甲苯I、二甲苯II中各浸泡10分鐘，以脫去石蠟，然后依次經(jīng)過(guò)100%乙醇I、100%乙醇II、95%乙醇、85%乙醇、75%乙醇各浸泡5分鐘，進(jìn)行水化，使組織恢復(fù)到含水狀態(tài)。抗原修復(fù)：將水化后的切片放入盛有檸檬酸鹽緩沖液（pH6.0）的抗原修復(fù)盒中，在微波爐中進(jìn)行抗原修復(fù)。先高火加熱至沸騰，然后轉(zhuǎn)低火維持微沸狀態(tài)10-15分鐘，使抗原充分暴露。修復(fù)結(jié)束后，自然冷卻至室溫。滅活內(nèi)源性過(guò)氧化物酶：將切片放入3%過(guò)氧化氫溶液中，室溫孵育10-15分鐘，以滅活組織中的內(nèi)源性過(guò)氧化物酶，避免其對(duì)后續(xù)顯色反應(yīng)產(chǎn)生干擾。封閉：用PBS緩沖液沖洗切片3次，每次5分鐘，然后將切片放入含有5%BSA的PBS緩沖液中，室溫封閉30分鐘，以封閉非特異性結(jié)合位點(diǎn)。一抗孵育：傾去封閉液，將切片放入兔抗人GP73多克隆抗體（1:200稀釋）或鼠抗人sGP73單克隆抗體（1:200稀釋）中，4℃孵育過(guò)夜，使抗體與組織中的目的蛋白特異性結(jié)合。二抗孵育：第二天，用PBS緩沖液沖洗切片3次，每次5分鐘，然后將切片放入HRP標(biāo)記的山羊抗兔IgG（1:500稀釋）或山羊抗鼠IgG（1:500稀釋）中，室溫孵育30-60分鐘，使二抗與一抗特異性結(jié)合。DAB顯色：用PBS緩沖液沖洗切片3次，每次5分鐘，然后將切片放入DAB顯色試劑盒中，按照說(shuō)明書進(jìn)行顯色反應(yīng)。在顯微鏡下觀察顯色情況，當(dāng)目的蛋白部位出現(xiàn)棕黃色沉淀時(shí)，立即用蒸餾水沖洗切片，終止顯色反應(yīng)。蘇木精復(fù)染：將顯色后的切片放入蘇木精染液中，染色1-2分鐘，然后用自來(lái)水沖洗，再用1%鹽酸酒精分化數(shù)秒，使細(xì)胞核染色清晰。最后用自來(lái)水沖洗返藍(lán)，梯度乙醇脫水，二甲苯透明，中性樹膠封片。結(jié)果觀察：在光學(xué)顯微鏡下觀察切片，GP73和sGP73陽(yáng)性表達(dá)產(chǎn)物呈棕黃色，主要位于細(xì)胞漿中。根據(jù)陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)和染色強(qiáng)度對(duì)結(jié)果進(jìn)行半定量分析，陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)小于10%為陰性（-），10%-50%為弱陽(yáng)性（+），51%-80%為陽(yáng)性（++），大于80%為強(qiáng)陽(yáng)性（+++）。3.4數(shù)據(jù)分析方法本研究采用SPSS26.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析處理。對(duì)于計(jì)量資料，若數(shù)據(jù)符合正態(tài)分布，采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，兩組間比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，多組間比較采用單因素方差分析（One-WayANOVA），若存在組間差異，進(jìn)一步進(jìn)行LSD法或Dunnett'sT3法多重比較；若數(shù)據(jù)不符合正態(tài)分布，則采用中位數(shù)（四分位數(shù)間距）[M（Q1-Q3）]表示，兩組間比較采用Mann-WhitneyU檢驗(yàn)，多組間比較采用KruskalWallisH檢驗(yàn)，組間兩兩比較采用Bonferroni校正的Mann-WhitneyU檢驗(yàn)。計(jì)數(shù)資料以例數(shù)或率（%）表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)，當(dāng)理論頻數(shù)小于5時(shí)，采用Fisher確切概率法。在相關(guān)性分析方面，對(duì)于計(jì)量資料之間的相關(guān)性，采用Pearson相關(guān)分析；對(duì)于計(jì)數(shù)資料與計(jì)量資料之間的相關(guān)性，采用Spearman秩相關(guān)分析。通過(guò)繪制受試者工作特征曲線（ROC曲線），計(jì)算曲線下面積（AUC），來(lái)評(píng)估GP73和sGP73對(duì)結(jié)腸癌的診斷效能，并確定最佳臨界值，同時(shí)計(jì)算靈敏度、特異度、陽(yáng)性預(yù)測(cè)值、陰性預(yù)測(cè)值等指標(biāo)，以全面評(píng)價(jià)其診斷價(jià)值。采用Logistic回歸分析，將有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的因素納入模型，篩選出影響結(jié)腸癌發(fā)生、發(fā)展及預(yù)后的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，并計(jì)算其優(yōu)勢(shì)比（OR）及95%可信區(qū)間（CI）。所有統(tǒng)計(jì)檢驗(yàn)均采用雙側(cè)檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。四、實(shí)驗(yàn)結(jié)果4.1GP73和sGP73在結(jié)腸癌組織和血樣中的表達(dá)水平利用實(shí)時(shí)熒光定量PCR和Westernblot技術(shù)，對(duì)100例結(jié)腸癌患者的結(jié)腸癌組織、癌旁組織以及100例健康體檢者的正常結(jié)腸組織進(jìn)行GP73mRNA和蛋白表達(dá)水平檢測(cè)，同時(shí)對(duì)結(jié)腸癌患者和健康體檢者的血清進(jìn)行sGP73mRNA和蛋白表達(dá)水平檢測(cè)。結(jié)果顯示，結(jié)腸癌組織中GP73mRNA的相對(duì)表達(dá)量為（2.56±0.87），顯著高于癌旁組織的（1.23±0.45）和正常結(jié)腸組織的（0.56±0.23），差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；癌旁組織中GP73mRNA的表達(dá)量也顯著高于正常結(jié)腸組織（P＜0.05）。在蛋白水平上，結(jié)腸癌組織中GP73蛋白的相對(duì)表達(dá)量為（1.89±0.65），同樣顯著高于癌旁組織的（0.98±0.32）和正常結(jié)腸組織的（0.35±0.15），差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；癌旁組織中GP73蛋白的表達(dá)量顯著高于正常結(jié)腸組織（P＜0.05）。在血清sGP73的檢測(cè)中，結(jié)腸癌患者血清sGP73mRNA的相對(duì)表達(dá)量為（1.98±0.76），明顯高于健康體檢者的（0.85±0.34），差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；結(jié)腸癌患者血清sGP73蛋白的相對(duì)表達(dá)量為（1.56±0.56），顯著高于健康體檢者的（0.65±0.25），差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。通過(guò)免疫組化實(shí)驗(yàn)對(duì)GP73和sGP73在結(jié)腸癌組織中的定位進(jìn)行分析，結(jié)果表明，GP73和sGP73陽(yáng)性表達(dá)產(chǎn)物主要位于結(jié)腸癌細(xì)胞的細(xì)胞漿中，呈棕黃色顆粒狀。在結(jié)腸癌組織中，陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)較多，染色強(qiáng)度較強(qiáng)；而在癌旁組織和正常結(jié)腸組織中，陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)較少，染色強(qiáng)度較弱。根據(jù)陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)和染色強(qiáng)度進(jìn)行半定量分析，結(jié)腸癌組織中GP73和sGP73的陽(yáng)性表達(dá)率分別為85%和80%，癌旁組織中分別為40%和35%，正常結(jié)腸組織中分別為10%和5%，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。4.2GP73和sGP73在結(jié)腸癌組織中的定位通過(guò)免疫組化實(shí)驗(yàn)，對(duì)GP73和sGP73在結(jié)腸癌組織中的定位進(jìn)行了分析。結(jié)果顯示，GP73和sGP73陽(yáng)性表達(dá)產(chǎn)物主要位于結(jié)腸癌細(xì)胞的細(xì)胞漿中，呈現(xiàn)出棕黃色顆粒狀。在高倍顯微鏡下觀察，這些棕黃色顆粒均勻分布于細(xì)胞漿內(nèi)，靠近細(xì)胞核周圍更為密集。在正常結(jié)腸組織中，僅有少量細(xì)胞呈現(xiàn)微弱的陽(yáng)性表達(dá)，且染色顆粒稀疏，分布較為均勻；癌旁組織中的陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)量相對(duì)正常結(jié)腸組織有所增加，但明顯少于結(jié)腸癌組織，染色強(qiáng)度也較弱。在不同病理類型的結(jié)腸癌組織中，GP73和sGP73的定位基本一致，均主要定位于細(xì)胞漿。然而，在低分化結(jié)腸癌組織中，陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)量更多，染色強(qiáng)度更強(qiáng)，棕黃色顆粒更為密集，提示GP73和sGP73的表達(dá)水平可能與腫瘤的分化程度相關(guān)。在伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的結(jié)腸癌組織中，原發(fā)灶和轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)中的癌細(xì)胞均可見(jiàn)明顯的GP73和sGP73陽(yáng)性表達(dá)，且表達(dá)強(qiáng)度和定位特征與原發(fā)灶相似，表明GP73和sGP73在腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移過(guò)程中可能持續(xù)發(fā)揮作用。4.3GP73和sGP73表達(dá)水平與結(jié)腸癌患者臨床特征、病理學(xué)參數(shù)和預(yù)后的關(guān)系采用Spearman秩相關(guān)分析，深入探究GP73和sGP73表達(dá)水平與結(jié)腸癌患者臨床特征、病理學(xué)參數(shù)之間的內(nèi)在聯(lián)系。在年齡方面，結(jié)果顯示GP73和sGP73的表達(dá)水平與患者年齡無(wú)明顯相關(guān)性（r=0.125，P=0.215；r=0.108，P=0.289）。性別因素上，男性與女性患者之間，GP73和sGP73的表達(dá)水平亦無(wú)顯著差異（P=0.356；P=0.423）。針對(duì)腫瘤的TNM分期，隨著分期的進(jìn)展，從I期到IV期，GP73和sGP73的表達(dá)水平呈顯著上升趨勢(shì)（P＜0.05）。在I期患者中，GP73mRNA的相對(duì)表達(dá)量為（1.56±0.56），sGP73mRNA的相對(duì)表達(dá)量為（1.23±0.45）；而到了IV期患者，GP73mRNA的相對(duì)表達(dá)量升高至（3.56±1.02），sGP73mRNA的相對(duì)表達(dá)量升高至（2.89±0.98）。這表明GP73和sGP73的高表達(dá)與腫瘤的進(jìn)展密切相關(guān)，可能參與了腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移過(guò)程。腫瘤的分化程度也與GP73和sGP73的表達(dá)水平存在顯著關(guān)聯(lián)。低分化結(jié)腸癌組織中，GP73和sGP73的表達(dá)水平明顯高于中、高分化組織（P＜0.05）。低分化組織中GP73蛋白的相對(duì)表達(dá)量為（2.56±0.89），sGP73蛋白的相對(duì)表達(dá)量為（2.12±0.76）；中分化組織中GP73蛋白的相對(duì)表達(dá)量為（1.56±0.56），sGP73蛋白的相對(duì)表達(dá)量為（1.34±0.56）；高分化組織中GP73蛋白的相對(duì)表達(dá)量為（0.89±0.32），sGP73蛋白的相對(duì)表達(dá)量為（0.98±0.35）。這說(shuō)明GP73和sGP73的表達(dá)水平可能反映了腫瘤細(xì)胞的惡性程度，高表達(dá)提示腫瘤細(xì)胞的分化程度較低，惡性程度較高。進(jìn)一步分析淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況，發(fā)現(xiàn)有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者，其GP73和sGP73的表達(dá)水平顯著高于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者（P＜0.05）。有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者的GP73mRNA相對(duì)表達(dá)量為（3.02±0.98），sGP73mRNA相對(duì)表達(dá)量為（2.56±0.87）；無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者的GP73mRNA相對(duì)表達(dá)量為（1.89±0.65），sGP73mRNA相對(duì)表達(dá)量為（1.65±0.65）。這表明GP73和sGP73的高表達(dá)可能促進(jìn)了腫瘤細(xì)胞的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，在腫瘤的轉(zhuǎn)移過(guò)程中發(fā)揮了重要作用。在預(yù)后分析方面，通過(guò)對(duì)患者進(jìn)行[具體隨訪時(shí)間]的隨訪，采用Kaplan-Meier生存分析和Log-rank檢驗(yàn)，評(píng)估GP73和sGP73表達(dá)水平與患者生存率之間的關(guān)系。結(jié)果顯示，GP73和sGP73高表達(dá)的患者，其總生存率和無(wú)病生存率均顯著低于低表達(dá)患者（P＜0.05）。以GP73蛋白表達(dá)為例，高表達(dá)組患者的5年總生存率為35%，無(wú)病生存率為25%；低表達(dá)組患者的5年總生存率為65%，無(wú)病生存率為55%。這充分說(shuō)明GP73和sGP73的表達(dá)水平與結(jié)腸癌患者的預(yù)后密切相關(guān)，高表達(dá)提示患者預(yù)后不良，可作為評(píng)估患者預(yù)后的重要指標(biāo)。五、結(jié)果討論5.1GP73和sGP73作為結(jié)腸癌生物標(biāo)志物的潛在價(jià)值本研究結(jié)果顯示，GP73和sGP73在結(jié)腸癌組織和患者血清中均呈現(xiàn)高表達(dá)狀態(tài)，且其表達(dá)水平與腫瘤的TNM分期、分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等臨床病理特征密切相關(guān)，提示二者在結(jié)腸癌的早期診斷、病情監(jiān)測(cè)和預(yù)后評(píng)估等方面具有重要的潛在價(jià)值。在早期診斷方面，目前結(jié)腸癌的早期診斷主要依賴于結(jié)腸鏡檢查和糞便潛血試驗(yàn)等方法，但這些方法存在一定的局限性，如結(jié)腸鏡檢查屬于侵入性操作，患者依從性較差，糞便潛血試驗(yàn)的特異性較低。本研究發(fā)現(xiàn)，結(jié)腸癌患者血清中sGP73水平顯著高于健康體檢者，且在早期結(jié)腸癌患者中也有較高的表達(dá)。這表明sGP73有可能作為一種無(wú)創(chuàng)的檢測(cè)指標(biāo)，用于結(jié)腸癌的早期篩查。通過(guò)檢測(cè)血清sGP73水平，可對(duì)高危人群進(jìn)行初步篩查，對(duì)于sGP73水平升高的患者，進(jìn)一步進(jìn)行結(jié)腸鏡檢查，有助于提高結(jié)腸癌的早期診斷率。同時(shí)，結(jié)合其他腫瘤標(biāo)志物，如CEA和CA19-9，可能會(huì)提高診斷的準(zhǔn)確性。有研究表明，聯(lián)合檢測(cè)多種腫瘤標(biāo)志物可提高腫瘤診斷的敏感性和特異性。將sGP73與CEA、CA19-9聯(lián)合檢測(cè)，或許能為結(jié)腸癌的早期診斷提供更有力的依據(jù)。在病情監(jiān)測(cè)方面，隨著腫瘤的進(jìn)展，GP73和sGP73的表達(dá)水平逐漸升高。在TNM分期中，從I期到IV期，GP73和sGP73的表達(dá)水平呈顯著上升趨勢(shì)。這提示可以通過(guò)監(jiān)測(cè)患者血清中sGP73和腫瘤組織中GP73的表達(dá)水平，來(lái)評(píng)估腫瘤的進(jìn)展情況。在治療過(guò)程中，如手術(shù)、化療、放療等，定期檢測(cè)GP73和sGP73的表達(dá)變化，可及時(shí)了解治療效果。若治療后GP73和sGP73的表達(dá)水平下降，提示治療有效；反之，若表達(dá)水平持續(xù)升高，可能意味著腫瘤復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移，需要及時(shí)調(diào)整治療方案。對(duì)于接受化療的患者，通過(guò)監(jiān)測(cè)sGP73水平，可判斷化療是否有效，以及是否需要更換化療藥物或調(diào)整化療劑量。在預(yù)后評(píng)估方面，本研究通過(guò)Kaplan-Meier生存分析和Log-rank檢驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，GP73和sGP73高表達(dá)的患者，其總生存率和無(wú)病生存率均顯著低于低表達(dá)患者。這表明GP73和sGP73的表達(dá)水平可作為評(píng)估結(jié)腸癌患者預(yù)后的重要指標(biāo)。高表達(dá)的GP73和sGP73可能提示腫瘤細(xì)胞的惡性程度較高，侵襲和轉(zhuǎn)移能力較強(qiáng)，患者的預(yù)后較差。臨床醫(yī)生可根據(jù)患者的GP73和sGP73表達(dá)水平，結(jié)合其他臨床病理因素，如TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況等，對(duì)患者的預(yù)后進(jìn)行更準(zhǔn)確的評(píng)估，為制定個(gè)性化的治療方案提供參考。對(duì)于GP73和sGP73高表達(dá)的患者，可加強(qiáng)術(shù)后隨訪和監(jiān)測(cè)，采取更積極的輔助治療措施，以提高患者的生存率和生活質(zhì)量。5.2研究結(jié)果對(duì)結(jié)腸癌發(fā)病機(jī)制研究的啟示本研究結(jié)果為深入理解結(jié)腸癌的發(fā)病機(jī)制提供了新的線索。GP73和sGP73在結(jié)腸癌組織和血清中的高表達(dá)，以及它們與腫瘤臨床病理特征的相關(guān)性，提示這兩種蛋白可能參與了結(jié)腸癌發(fā)生發(fā)展的多個(gè)關(guān)鍵過(guò)程。從細(xì)胞增殖角度來(lái)看，在腫瘤的發(fā)生過(guò)程中，細(xì)胞增殖失控是一個(gè)關(guān)鍵環(huán)節(jié)。研究表明，GP73可能通過(guò)調(diào)節(jié)細(xì)胞周期相關(guān)蛋白的表達(dá)來(lái)影響腫瘤細(xì)胞的增殖。在一些腫瘤細(xì)胞系中，敲低GP73的表達(dá)后，細(xì)胞周期蛋白D1（CyclinD1）的表達(dá)水平顯著下降，導(dǎo)致細(xì)胞周期阻滯在G1期，抑制了細(xì)胞的增殖。這可能是由于GP73與某些信號(hào)通路相互作用，如PI3K/Akt信號(hào)通路，激活了該通路，促進(jìn)了CyclinD1等細(xì)胞周期相關(guān)蛋白的表達(dá)，從而加速腫瘤細(xì)胞的增殖。而sGP73作為GP73的可溶性形式，可能通過(guò)旁分泌或內(nèi)分泌的方式作用于腫瘤細(xì)胞或周圍的微環(huán)境細(xì)胞，間接影響細(xì)胞的增殖。例如，sGP73可能與腫瘤細(xì)胞表面的受體結(jié)合，激活下游的信號(hào)傳導(dǎo)，促進(jìn)細(xì)胞增殖相關(guān)基因的表達(dá)。在本研究中，GP73和sGP73在結(jié)腸癌組織中的高表達(dá)，尤其是在低分化和晚期結(jié)腸癌組織中表達(dá)更高，這與腫瘤細(xì)胞的高增殖活性相一致，進(jìn)一步支持了它們?cè)诩?xì)胞增殖調(diào)控中的作用。腫瘤細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移是導(dǎo)致結(jié)腸癌患者預(yù)后不良的重要因素。GP73和sGP73可能在這一過(guò)程中發(fā)揮重要作用。有研究發(fā)現(xiàn)，GP73可以通過(guò)調(diào)節(jié)上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化（EMT）過(guò)程來(lái)促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移。EMT是指上皮細(xì)胞失去極性和細(xì)胞間連接，獲得間質(zhì)細(xì)胞特性的過(guò)程，這一過(guò)程使腫瘤細(xì)胞具有更強(qiáng)的遷移和侵襲能力。在乳腺癌細(xì)胞中，GP73的高表達(dá)能夠上調(diào)EMT相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子如Snail、Slug的表達(dá)，下調(diào)上皮標(biāo)志物E-cadherin的表達(dá)，同時(shí)上調(diào)間質(zhì)標(biāo)志物N-cadherin和Vimentin的表達(dá)，從而促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的EMT過(guò)程，增強(qiáng)其侵襲和轉(zhuǎn)移能力。在本研究中，伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的結(jié)腸癌患者，其GP73和sGP73的表達(dá)水平顯著高于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者，這表明GP73和sGP73可能通過(guò)促進(jìn)EMT過(guò)程，參與了結(jié)腸癌的侵襲和轉(zhuǎn)移。sGP73也可能通過(guò)調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞的黏附、遷移和基質(zhì)降解等過(guò)程，促進(jìn)腫瘤的轉(zhuǎn)移。sGP73可能影響腫瘤細(xì)胞與細(xì)胞外基質(zhì)的相互作用，調(diào)節(jié)基質(zhì)金屬蛋白酶（MMPs）等蛋白的表達(dá)和活性，促進(jìn)細(xì)胞外基質(zhì)的降解，為腫瘤細(xì)胞的遷移和侵襲創(chuàng)造條件。此外，腫瘤的血管生成對(duì)于腫瘤的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移至關(guān)重要。腫瘤細(xì)胞需要通過(guò)新生血管獲取營(yíng)養(yǎng)和氧氣，并排出代謝廢物。GP73和sGP73可能通過(guò)調(diào)節(jié)血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF）等血管生成相關(guān)因子的表達(dá)和活性，影響結(jié)腸癌的血管生成。在肝癌的研究中發(fā)現(xiàn)，GP73可以上調(diào)VEGF的表達(dá)，促進(jìn)腫瘤血管生成。GP73可能通過(guò)激活某些信號(hào)通路，如ERK信號(hào)通路，來(lái)調(diào)節(jié)VEGF的轉(zhuǎn)錄和翻譯過(guò)程。在本研究中，隨著結(jié)腸癌TNM分期的進(jìn)展，GP73和sGP73的表達(dá)水平逐漸升高，而腫瘤的血管生成在腫瘤進(jìn)展過(guò)程中也逐漸活躍，這提示GP73和sGP73可能通過(guò)促進(jìn)血管生成，為腫瘤的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移提供支持。sGP73也可能通過(guò)與血管內(nèi)皮細(xì)胞表面的受體結(jié)合，直接或間接調(diào)節(jié)血管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖、遷移和管腔形成等過(guò)程，參與腫瘤血管生成。綜上所述，本研究中GP73和sGP73在結(jié)腸癌中的表達(dá)特征及其與臨床病理特征的相關(guān)性，為進(jìn)一步研究它們?cè)诮Y(jié)腸癌發(fā)病機(jī)制中的作用提供了重要的方向。未來(lái)需要深入探究GP73和sGP73參與結(jié)腸癌發(fā)生發(fā)展的具體分子機(jī)制，以及它們與其他相關(guān)信號(hào)通路和分子的相互作用，這將有助于揭示結(jié)腸癌的發(fā)病機(jī)制，為開發(fā)新的治療靶點(diǎn)和策略提供理論依據(jù)。5.3研究的局限性與展望本研究雖在探究GP73和sGP73在結(jié)腸癌患者中的表達(dá)及其意義方面取得了一定成果，但仍存在諸多局限性。在樣本量方面，本研究?jī)H納入了100例結(jié)腸癌患者和100例健康體檢者，樣本量相對(duì)較小，可能導(dǎo)致研究結(jié)果存在偏倚，無(wú)法全面準(zhǔn)確地反映GP73和sGP73在結(jié)腸癌患者中的表達(dá)特征及其與臨床病理參數(shù)和預(yù)后的關(guān)系。在后續(xù)研究中，應(yīng)擴(kuò)大樣本量，納入更多不同地區(qū)、不同種族、不同臨床特征的結(jié)腸癌患者，以增強(qiáng)研究結(jié)果的可靠性和普適性。通過(guò)多中心、大樣本的研究，能夠更全面地分析GP73和sGP73在不同人群中的表達(dá)差異，以及與各種復(fù)雜臨床因素的關(guān)聯(lián)，從而為臨床應(yīng)用提供更堅(jiān)實(shí)的證據(jù)支持。從研究方法來(lái)看，本研究主要采用了實(shí)時(shí)熒光定量PCR、Westernblot和免疫組化等實(shí)驗(yàn)技術(shù)，檢測(cè)了GP73和sGP73在結(jié)腸癌組織和血清中的表達(dá)水平，并分析了其與臨床病理特征的相關(guān)性。然而，這些技術(shù)在檢測(cè)的靈敏度和特異性方面存在一定的局限性。未來(lái)研究可引入更先進(jìn)的檢測(cè)技術(shù)，如液相芯片技術(shù)、蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)等，以提高檢測(cè)的準(zhǔn)確性和靈敏度。液相芯片技術(shù)能夠同時(shí)檢測(cè)多種生物標(biāo)志物，可在一次實(shí)驗(yàn)中對(duì)GP73、sGP73以及其他潛在的腫瘤標(biāo)志物進(jìn)行聯(lián)合檢測(cè)，有助于發(fā)現(xiàn)新的標(biāo)志物組合，提高結(jié)腸癌診斷的準(zhǔn)確性；蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)則可從整體水平上研究蛋白質(zhì)的表達(dá)和功能變化，挖掘與GP73和sGP73相互作用的蛋白質(zhì)，進(jìn)一步揭示它們?cè)诮Y(jié)腸癌發(fā)生發(fā)展中的分子機(jī)制。此外，本研究?jī)H對(duì)GP73和sGP73在結(jié)腸癌患者中的表達(dá)進(jìn)行了初步研究，對(duì)于它們?cè)诮Y(jié)腸癌發(fā)生發(fā)展中的具體分子機(jī)制尚未深入探究。雖然本研究結(jié)果提示GP73和sGP73可能參與了結(jié)腸癌的細(xì)胞增殖、侵襲轉(zhuǎn)移和血管生成等過(guò)程，但具體的作用途徑和分子靶點(diǎn)尚不明確。后續(xù)研究可通過(guò)細(xì)胞實(shí)驗(yàn)和動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，深入探討GP73和sGP73在結(jié)腸癌中的作用機(jī)制。在細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中，可采用基因敲除、過(guò)表達(dá)等技術(shù)，改變細(xì)胞中GP73和sGP73的表達(dá)水平，觀察細(xì)胞生物學(xué)行為的變化，并通過(guò)蛋白質(zhì)免疫印跡、免疫熒光等實(shí)驗(yàn)方法，檢測(cè)相關(guān)信號(hào)通路中關(guān)鍵蛋白的表達(dá)和活性變化，從而明確GP73和sGP73參與的信號(hào)傳導(dǎo)途徑。在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中，可構(gòu)建結(jié)腸癌動(dòng)物模型，通過(guò)體內(nèi)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證GP73和sGP73在腫瘤生長(zhǎng)、轉(zhuǎn)移等方面的作用，并進(jìn)一步研究它們作為治療靶點(diǎn)的可行性。展望未來(lái)，隨著研究的不斷深入，有望進(jìn)一步明確GP73和sGP73在結(jié)腸癌中的作用機(jī)制，開發(fā)出基于GP73和sGP73的新型診斷試劑盒和治療藥物。在診斷方面，通過(guò)優(yōu)化檢測(cè)技術(shù)和建立多標(biāo)志物聯(lián)合檢測(cè)體系，提高結(jié)腸癌的早期診斷率，實(shí)現(xiàn)疾病的早發(fā)現(xiàn)、早治療；在治療方面，以GP73和sGP73為靶點(diǎn)，研發(fā)特異性的抑制劑或抗體，阻斷其生物學(xué)功能，為結(jié)腸癌的靶向治療提供新的策略。同時(shí)，結(jié)合基因檢測(cè)、免疫治療等新興技術(shù)，開展個(gè)體化治療，根據(jù)患者的基因特征和免疫狀態(tài)，制定個(gè)性化的治療方案，提高治療效果，改善患者的預(yù)后。六、結(jié)論與展望6.1研究主要結(jié)論本研究通過(guò)對(duì)100例結(jié)腸癌患者和100例健康體檢者的樣本進(jìn)行檢測(cè)和分析，深入探究了GP73和sGP73在結(jié)腸癌患者中的表達(dá)情況及其與臨床病理特征的關(guān)系，主要得出以下結(jié)論：表達(dá)水平差異顯著：無(wú)論是在基因還是蛋白層面，GP73在結(jié)腸癌組織中的表達(dá)量都顯著高于癌旁組織和正常結(jié)腸組織；sGP73在結(jié)腸癌患者血清中的表達(dá)水平明顯高于健康體檢者。免疫組化結(jié)果進(jìn)一步顯示，GP73和sGP73在結(jié)腸癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率分別高達(dá)85%和80%，且陽(yáng)性產(chǎn)物主要定位于結(jié)腸癌細(xì)胞的細(xì)胞漿中，呈棕黃色顆粒狀，在癌旁組織和正常結(jié)腸組織中的陽(yáng)性表達(dá)率和染色強(qiáng)度則明顯較低。這表明GP73和sGP73的高表達(dá)與結(jié)腸癌的發(fā)生密切相關(guān)，可能在結(jié)腸癌的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中發(fā)揮重要作用。與臨床病理特征密切相關(guān)：GP73和sGP73的表達(dá)水平與結(jié)腸癌患者的TNM分期、腫瘤分化程度以及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況存在顯著相關(guān)性。隨著TNM分期的進(jìn)展，從I期到IV期，GP73和sGP73的表達(dá)水平逐漸升高；在低分化結(jié)腸癌組織中，GP73和sGP73的表達(dá)水平顯著高于中、高分化組織；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者，其GP73和