一、引言1.1研究背景膽管癌（Cholangiocarcinoma，CCA）是一種起源于膽管上皮細胞的惡性腫瘤，可發生于膽道系統的各級膽管。根據腫瘤的發生部位，膽管癌主要分為肝內膽管癌（IntrahepaticCholangiocarcinoma，iCCA）和肝外膽管癌（ExtrahepaticCholangiocarcinoma，eCCA），其中肝外膽管癌又可細分為肝門部膽管癌和遠端膽管癌。肝內膽管癌起源于肝內膽管二級分支以下膽管樹上皮，約占膽管癌的5%-10%；而肝外膽管癌則是指發生在左右肝管至膽總管下端的膽管癌，約占膽管癌的90%。從腫瘤病理角度分類，膽管癌還可分為乳頭型、結節型、硬化型和彌漫型，不同的病理類型在生物學行為、治療反應和預后等方面存在差異。近年來，膽管癌的發病率在全球范圍內呈逐漸上升的趨勢。膽管癌的發病率存在明顯的地區差異，亞洲地區的發病率相對歐美國家更高，如美國肝門部膽管細胞癌的總體發病率約為每年1/10萬，而日本等一些亞洲區域的發病率則更高。在中國，臨床資料顯示肝外膽管癌的發病率已高于膽囊癌，患者年齡大多集中在50-70歲，男性與女性的發病比例約為1.4:1。膽管癌的病因目前仍不十分明確，一般認為，慢性炎癥在膽管癌的起始和發展階段的分子水平改變中起重要作用。一些會增加局限性發病的因素，如膽道系統感染、寄生蟲（如華支睪吸蟲）和肝內結石；以及全球范圍內發病率較低的致病因素，像自身免疫性疾病（如原發性硬化性膽管炎）、膽道系統的先天性囊性疾病等，都與膽管癌的發病相關。此外，二氧化釷、氡、亞硝胺、石棉等化學物質也可能與膽管癌發病率增高有關，但仍需進一步研究證實。膽管癌的惡性程度高，預后較差，給患者的生命健康帶來了嚴重威脅。手術切除是膽管癌最有效的治療方式，也是目前可能實現治愈的唯一選擇。然而，由于膽管癌起病隱匿，早期通常沒有典型的臨床癥狀，多數患者在出現明顯癥狀，如黃疸、腹痛、乏力、食欲減退和體重減輕等而就診時，往往已處于中晚期。此時，腫瘤多已侵犯瘤周組織，易造成周圍器官的擴散轉移，導致約65％的患者失去了根治性手術的機會，其一年生存率僅為10％-20％。對于那些能夠實施手術切除的患者，膽管癌的復發率也非常高，尤其是肝內膽管癌，復發率甚至可達80%。在化療方面，目前NCCN指南推薦以吉西他濱聯合順鉑為主的系統性化療方案用于晚期膽管癌的治療，但該方案的療效有限，晚期膽管癌患者應用此方案的五年生存率低于5％。而且，部分患者對化療沒有反應，另一些患者在初始反應后也會出現病情進展。對于進展期的膽管癌，目前尚無標準化和公認的能夠有效延長生存時間的化療方案。除了手術和化療，放療、靶向治療和免疫治療等手段也逐漸應用于膽管癌的治療。然而，這些治療方法同樣面臨諸多挑戰。例如，靶向治療中，雖然針對某些特定基因突變（如IDH突變和FGFR2融合）的藥物已取得一定進展，但由于膽管癌基因突變類型復雜，且突變率較低，導致靶向藥物的適用人群有限。免疫治療方面，免疫檢查點抑制劑在膽管癌中的療效尚不理想，除了微衛星不穩定高（MSI-H）/錯配修復缺陷（dMMR）腫瘤患者外，目前缺乏有效的生物標志物來預測免疫治療的效果。由于膽管癌早期診斷困難，多數患者確診時已處于晚期，失去了最佳的手術治療時機，且現有的治療手段療效有限，導致膽管癌患者的總體預后幾乎停滯不前。尋找新的有效的治療靶點和生物標志物，對于提高膽管癌的早期診斷率、優化治療方案、改善患者預后具有重要意義。WDR5（WDRepeatDomain5，WD重復膜蛋白5）是一種廣泛參與細胞生物學過程的蛋白質，在多種腫瘤中的表達水平與預后密切相關。在膽管癌中，WDR5可能通過影響c-myc活性和通過MLL（MixedLineageLeukemia）影響細胞中某些蛋白的表達來促進膽管癌的進展。然而，目前關于WDR5在膽管癌中的作用機制及預后價值的研究仍相對較少，其具體的分子機制和臨床意義尚未完全明確。因此，深入研究WDR5在膽管癌中的作用機制及預后意義，有望為膽管癌的治療提供新的思路和靶點，具有重要的理論和臨床價值。1.2研究目的與意義本研究旨在深入探討WDR5在膽管癌中的作用機制及預后價值，為膽管癌的治療提供新的理論依據和潛在的治療靶點。具體而言，研究目的主要包括以下幾個方面：首先，通過體內外實驗，明確WDR5在膽管癌發生發展中的具體作用，探究其是否通過影響細胞增殖、遷移、侵襲和凋亡等生物學行為來促進膽管癌的進展；其次，揭示WDR5在膽管癌中的作用機制，分析其是否通過調控相關信號通路或與其他蛋白相互作用來影響膽管癌細胞的生物學特性；最后，通過臨床樣本分析，評估WDR5表達水平與膽管癌患者臨床病理特征及預后的相關性，確定WDR5是否可作為預測膽管癌患者預后的生物標志物。研究WDR5在膽管癌中的作用機制及預后具有重要的理論和臨床意義。在理論方面，深入研究WDR5在膽管癌中的作用機制，有助于進一步揭示膽管癌的發病機制，豐富對膽管癌生物學行為的認識，為膽管癌的基礎研究提供新的方向和思路。在臨床方面，確定WDR5作為膽管癌的潛在治療靶點，有望開發出針對WDR5的靶向治療藥物，為膽管癌患者提供更有效的治療手段，提高患者的生存率和生活質量。此外，WDR5作為預測膽管癌患者預后的生物標志物，有助于臨床醫生更準確地評估患者的預后風險，制定個性化的治療方案，實現精準醫療。1.3研究方法與創新點本研究將綜合運用細胞實驗、動物實驗和臨床樣本分析等多種研究方法，全面深入地探究WDR5在膽管癌中的作用機制及預后價值。在細胞實驗方面，將選取多種膽管癌細胞系，如RBE、HuCCT1等，通過基因編輯技術構建WDR5過表達和敲低的細胞模型。運用CCK-8、EdU等實驗檢測細胞增殖能力，Transwell實驗檢測細胞遷移和侵襲能力，流式細胞術檢測細胞凋亡情況，從而明確WDR5對膽管癌細胞生物學行為的影響。同時，通過Westernblot、qRT-PCR等技術檢測相關信號通路蛋白和基因的表達水平，初步探索WDR5作用的分子機制。動物實驗則選用免疫缺陷小鼠，構建膽管癌皮下移植瘤模型和原位移植瘤模型。將過表達或敲低WDR5的膽管癌細胞接種到小鼠體內，觀察腫瘤的生長情況，測量腫瘤體積和重量，繪制腫瘤生長曲線。通過免疫組化、TUNEL等實驗分析腫瘤組織中WDR5的表達、細胞增殖、凋亡等指標，進一步驗證WDR5在體內對膽管癌生長的影響。此外，還將利用動物模型進行藥物干預實驗，探討針對WDR5的靶向治療策略的可行性。臨床樣本分析方面，將收集山東大學齊魯醫院等多家醫院的膽管癌患者的手術切除標本和臨床資料，包括患者的年齡、性別、腫瘤分期、病理類型、治療方式及生存隨訪信息等。運用免疫組化、Westernblot等方法檢測腫瘤組織中WDR5的表達水平，分析WDR5表達與患者臨床病理特征的相關性。通過生存分析，如Kaplan-Meier法和Cox比例風險模型，評估WDR5表達對膽管癌患者預后的影響，確定WDR5是否可作為獨立的預后預測指標。本研究的創新點主要體現在以下幾個方面：一是深入探究WDR5在膽管癌中的全新作用機制，不僅關注其對c-myc活性和MLL相關蛋白表達的影響，還將從細胞周期調控、代謝重編程等多個角度進行研究，有望發現新的分子調控網絡。二是首次系統地將WDR5作為預測膽管癌患者預后及新型靶向藥物培美替尼治療效果的生物標志物進行研究，為臨床精準治療提供新的思路和方法。三是綜合運用多種先進的研究技術和方法，從細胞、動物和臨床樣本三個層面進行全方位研究，使研究結果更具說服力和臨床應用價值。二、膽管癌概述2.1膽管癌的定義與分類膽管癌是一種起源于膽管上皮細胞的惡性腫瘤，可發生于膽道系統的各級膽管。膽道系統作為人體消化系統的重要組成部分，承擔著運輸、儲存和調節膽汁的關鍵功能，而膽管則是膽汁從肝臟流向十二指腸的重要通道。當膽管上皮細胞發生異常增殖和分化，就會導致膽管癌的發生。膽管癌的發病機制較為復雜，涉及多個基因和信號通路的異常改變，目前尚未完全明確。根據腫瘤的發生部位，膽管癌主要分為肝內膽管癌和肝外膽管癌。肝內膽管癌起源于肝內膽管二級分支以下膽管樹上皮，約占膽管癌的5%-10%。肝內膽管癌又可進一步分為腫塊型、管周浸潤型和管內生長型。腫塊型肝內膽管癌表現為肝實質內的孤立性腫塊，邊界相對清晰，腫瘤細胞呈巢狀或條索狀排列，周圍常伴有纖維組織增生；管周浸潤型則主要沿膽管壁浸潤生長，導致膽管壁增厚、管腔狹窄，容易侵犯周圍的血管和肝組織，早期診斷較為困難；管內生長型腫瘤則向膽管腔內生長，呈乳頭狀或息肉樣，可阻塞膽管引起膽汁淤積。肝外膽管癌是指發生在左右肝管至膽總管下端的膽管癌，約占膽管癌的90%。根據腫瘤發生的具體部位，肝外膽管癌又可細分為肝門部膽管癌和遠端膽管癌。肝門部膽管癌是指位于膽囊管開口以上的肝總管、左右肝管匯合部和左右肝管的膽管黏膜上皮癌，約占肝外膽管癌的60%-70%。由于肝門部特殊的解剖學位置，其周圍血管、神經、淋巴結組織豐富，且與鄰近肝組織關系密切，使得肝門部膽管癌極易早期侵犯這些結構，手術難度極大，患者預后較差。臨床上，肝門部膽管癌最常見的癥狀是梗阻性黃疸，且多為無痛性黃疸，黃疸通常進行性加深，伴有皮膚瘙癢、小便呈茶色、排陶土樣大便。在疾病早期，患者可能僅有上腹部隱痛不適、厭油膩、乏力、納差、體重減輕等非特異性癥狀，容易被忽視。隨著病情進展，黃疸逐漸加重，還可能出現肝功能損害、腹水等表現。遠端膽管癌是指發生在膽囊管開口以下至膽總管下端的膽管癌，約占肝外膽管癌的30%-40%。遠端膽管癌的癥狀與腫瘤阻塞膽管的程度和部位有關，主要表現為黃疸、腹痛、惡心、嘔吐等。黃疸多為進行性加重，腹痛可呈隱痛、脹痛或絞痛，部分患者還可能伴有發熱、寒戰等膽管炎癥狀。與肝門部膽管癌相比，遠端膽管癌的手術切除率相對較高，但總體預后仍不理想。除了根據腫瘤發生部位進行分類外，膽管癌還可從腫瘤病理角度分為乳頭型、結節型、硬化型和彌漫型。乳頭型膽管癌腫瘤呈乳頭狀生長，突入膽管腔內，通常分化較好，惡性程度相對較低，預后相對較好；結節型膽管癌表現為邊界相對清晰的結節狀腫塊，腫瘤細胞相對集中，生長較為局限，但也具有一定的侵襲性；硬化型膽管癌以纖維組織增生明顯為特征，腫瘤質地堅硬，與周圍組織分界不清，容易侵犯周圍血管、神經和淋巴管，導致手術切除困難，預后較差；彌漫型膽管癌腫瘤沿膽管壁廣泛浸潤生長，累及范圍廣，膽管壁明顯增厚，管腔狹窄或閉塞，常伴有肝內外膽管擴張，惡性程度高，預后最差。不同病理類型的膽管癌在生物學行為、治療反應和預后等方面存在顯著差異，準確的病理診斷對于制定合理的治療方案和評估患者預后具有重要意義。2.2膽管癌的發病機制與危險因素膽管癌的發病機制是一個復雜的多步驟過程，涉及多個基因和信號通路的異常改變，目前尚未完全明確。一般認為，慢性炎癥在膽管癌的起始和發展階段的分子水平改變中起重要作用。在膽管癌的發生發展過程中，細胞周期調控、DNA損傷修復、細胞凋亡等生物學過程出現異常，導致膽管上皮細胞的異常增殖和分化。從分子層面來看，膽管癌中存在多種基因突變，這些基因突變可能導致細胞的生長、分化和凋亡等過程失控，從而促進腫瘤的發生和發展。例如，KRAS基因是一種重要的原癌基因，在膽管癌中，KRAS基因的突變率約為10%-30%。KRAS基因突變后，會持續激活下游的MAPK和PI3K/AKT等信號通路，促進細胞的增殖、遷移和侵襲，抑制細胞凋亡，從而推動膽管癌的進展。TP53基因是一種重要的抑癌基因，正常情況下，TP53基因編碼的p53蛋白可以通過誘導細胞周期停滯、DNA修復或細胞凋亡，來維持基因組的穩定性和細胞的正常生長。在膽管癌中，TP53基因的突變率約為20%-50%。TP53基因突變后，p53蛋白的功能喪失，無法有效地抑制細胞的異常增殖，使得癌細胞能夠逃避機體的免疫監視，從而促進膽管癌的發生和發展。此外，IDH1/2基因突變在膽管癌中也較為常見，突變率約為10%-20%。IDH1/2基因編碼的異檸檬酸脫氫酶參與細胞的能量代謝和氧化還原平衡調節。IDH1/2基因突變后，會導致酶活性改變，產生異常代謝產物2-羥基戊二酸（2-HG），2-HG可以抑制α-酮戊二酸依賴的雙加氧酶家族成員，包括組蛋白去甲基化酶和DNA去甲基化酶，從而影響組蛋白和DNA的甲基化狀態，干擾細胞的正常分化和代謝，促進膽管癌的發生。除了基因突變，信號通路異常也是膽管癌發病機制中的重要環節。在膽管癌中，Notch信號通路、Wnt/β-catenin信號通路、Hedgehog信號通路等多個信號通路存在異常激活或抑制，這些信號通路的異常相互交織，形成復雜的調控網絡，共同影響膽管癌細胞的生物學行為。Notch信號通路在細胞的增殖、分化和凋亡等過程中發揮著重要作用。在膽管癌中，Notch信號通路異常激活，其配體Delta-like1（DLL1）、Jagged1等與受體Notch1-4結合后，激活下游的RBP-Jκ/CBF1信號通路，促進細胞的增殖和遷移，抑制細胞凋亡。同時，Notch信號通路還可以通過調節上皮-間質轉化（EMT）相關蛋白的表達，促進膽管癌細胞的EMT過程，增強癌細胞的侵襲和轉移能力。Wnt/β-catenin信號通路在胚胎發育和組織穩態維持中起著關鍵作用。在正常情況下，β-catenin在細胞質中與APC、Axin和GSK-3β等形成復合物，被磷酸化后降解。在膽管癌中，Wnt信號通路異常激活，Wnt蛋白與細胞膜上的Frizzled受體和LRP5/6共受體結合，抑制GSK-3β的活性，使得β-catenin在細胞質中積累并進入細胞核，與TCF/LEF轉錄因子結合，激活下游靶基因的表達，如c-myc、CyclinD1等，促進細胞的增殖、遷移和侵襲。Hedgehog信號通路在胚胎發育和組織修復中發揮重要作用。在膽管癌中，Hedgehog信號通路異常激活，其配體SonicHedgehog（SHH）等與細胞膜上的Patched受體結合，解除對Smoothened受體的抑制，激活下游的Gli轉錄因子，促進細胞的增殖、遷移和侵襲。此外，Hedgehog信號通路還可以通過調節腫瘤微環境中的免疫細胞和間質細胞的功能，促進膽管癌的生長和轉移。膽管癌的發病還與多種危險因素密切相關。膽管結石是膽管癌的重要危險因素之一，長期的膽管結石刺激膽管壁，可導致膽管黏膜反復損傷和修復，引發慢性炎癥反應，進而誘導膽管上皮細胞的異常增生和癌變。研究表明，膽管結石患者發生膽管癌的風險比正常人高10-20倍。膽道感染也是膽管癌的常見危險因素。細菌、病毒或寄生蟲感染可引起膽道炎癥，炎癥細胞釋放的細胞因子和活性氧等物質，可損傷膽管上皮細胞的DNA，導致基因突變和細胞的異常增殖。例如，華支睪吸蟲感染是東南亞地區膽管癌的重要危險因素，華支睪吸蟲寄生于膽管內，其代謝產物和機械刺激可引起膽管上皮細胞的炎癥和損傷，長期感染可導致膽管上皮細胞的異型增生和癌變。原發性硬化性膽管炎是一種慢性膽汁淤積性肝病，其特征是膽管彌漫性炎癥和纖維化，導致膽管狹窄和膽汁流動受阻。原發性硬化性膽管炎患者發生膽管癌的風險顯著增加，約10%-30%的原發性硬化性膽管炎患者最終會發展為膽管癌。這可能與原發性硬化性膽管炎引起的膽汁淤積、炎癥反應和免疫異常等因素有關。此外，膽道系統的先天性囊性疾病，如膽總管囊腫、Caroli病等，也與膽管癌的發生密切相關。這些先天性囊性疾病可導致膽汁引流不暢，膽汁淤積，長期的膽汁刺激可誘發膽管上皮細胞的癌變。研究顯示，未經治療的膽總管囊腫患者發生膽管癌的風險高達10%-30%，且發病年齡相對較早。2.3膽管癌的診斷與治療現狀膽管癌的早期診斷面臨諸多挑戰，其起病隱匿，早期癥狀不明顯，缺乏特異性的臨床表現，多數患者在確診時已處于中晚期。目前，膽管癌的診斷主要依靠影像學檢查、腫瘤標志物檢測以及病理學檢查等多種方法的綜合應用。影像學檢查在膽管癌的診斷中發揮著重要作用，常見的影像學檢查方法包括超聲檢查、CT檢查、MRI檢查和PET-CT檢查等。超聲檢查具有操作簡便、無創、價格低廉等優點，是膽管癌篩查的首選方法。超聲檢查可以發現膽管擴張、膽管內占位性病變等異常情況，對于肝外膽管癌的診斷準確性較高，能夠檢測出大部分直徑大于1cm的膽管癌。但對于肝內膽管癌，尤其是較小的腫瘤，超聲檢查的敏感性相對較低。CT檢查能夠清晰地顯示膽管癌的部位、大小、形態以及與周圍組織的關系，對于判斷腫瘤的可切除性具有重要價值。CT增強掃描可以進一步觀察腫瘤的血供情況，有助于鑒別腫瘤的良惡性。多排螺旋CT（MDCT）的應用，使得圖像的分辨率和清晰度得到顯著提高，能夠更準確地顯示膽管癌的細節特征，如膽管壁的增厚、管腔的狹窄程度等。MRI檢查對軟組織的分辨能力較高，能夠多方位、多序列成像，在顯示膽管癌的侵犯范圍、膽管受累情況以及肝門部血管侵犯等方面具有獨特的優勢。磁共振胰膽管造影（MRCP）是一種無創性的膽管成像技術，能夠清晰地顯示膽管系統的全貌，對于膽管癌的診斷和術前評估具有重要意義。MRCP可以直觀地顯示膽管癌導致的膽管狹窄、梗阻部位和程度，以及膽管擴張的范圍，為手術方案的制定提供重要依據。PET-CT檢查是一種將正電子發射斷層顯像（PET）和CT相結合的影像學檢查技術，能夠同時提供腫瘤的代謝信息和解剖結構信息。PET-CT檢查在檢測膽管癌的遠處轉移方面具有較高的敏感性，對于判斷膽管癌的分期和制定治療方案具有重要的參考價值。然而，PET-CT檢查價格昂貴，且存在一定的假陽性和假陰性率，因此在臨床上的應用受到一定限制。腫瘤標志物檢測是膽管癌診斷的重要輔助手段，目前常用的腫瘤標志物包括糖類抗原19-9（CA19-9）、癌胚抗原（CEA）、糖類抗原125（CA125）等。CA19-9是膽管癌中應用最廣泛的腫瘤標志物，其在膽管癌患者血清中的水平明顯升高，對于膽管癌的診斷具有較高的敏感性和特異性。但CA19-9的水平也受到多種因素的影響，如膽道炎癥、梗阻性黃疸等，在這些情況下，CA19-9也可能會升高，導致假陽性結果。因此，在臨床診斷中，需要結合患者的臨床表現和其他檢查結果進行綜合判斷。CEA在膽管癌患者血清中的水平也可升高，但特異性相對較低，在多種消化道腫瘤和良性疾病中均可出現異常升高。CA125在膽管癌中的診斷價值相對有限，但其在部分膽管癌患者中也可升高，可作為輔助診斷指標之一。除了上述常見的腫瘤標志物外，近年來還發現了一些新的潛在腫瘤標志物，如骨橋蛋白（OPN）、高爾基體蛋白73（GP73）等，這些標志物在膽管癌的診斷和預后評估中可能具有一定的價值，但仍需要進一步的研究和驗證。病理學檢查是診斷膽管癌的金標準，通過獲取腫瘤組織進行病理切片和細胞學檢查，能夠明確腫瘤的病理類型、分化程度等信息。病理學檢查的方法主要包括手術切除標本病理檢查、經皮肝穿刺膽管造影（PTC）或內鏡逆行胰膽管造影（ERCP）下活檢、超聲引導下細針穿刺活檢（FNA）等。手術切除標本病理檢查是最準確的病理學檢查方法，但只有在手術切除腫瘤后才能進行。PTC和ERCP下活檢可以在診斷膽管癌的同時進行膽管引流，緩解黃疸癥狀，但這兩種方法均為有創檢查，存在一定的并發癥風險。FNA是一種相對微創的檢查方法，在超聲或CT引導下進行，能夠獲取腫瘤組織進行病理診斷，但由于獲取的組織量較少，可能會出現假陰性結果。膽管癌的治療方法主要包括手術切除、化療、放療、靶向治療和免疫治療等，治療方案的選擇需要根據患者的腫瘤分期、身體狀況、病理類型等因素綜合考慮。手術切除是膽管癌最主要的治療方法，也是目前唯一可能實現治愈的手段。對于早期膽管癌患者，手術切除的根治性較高，患者的預后相對較好。但由于膽管癌起病隱匿，早期診斷困難，多數患者在確診時已處于中晚期，腫瘤侵犯范圍廣泛，手術切除難度較大，根治性切除率較低。對于無法進行根治性手術切除的患者，可考慮進行姑息性手術，如膽管引流術、膽腸吻合術等，以緩解黃疸癥狀，提高患者的生活質量。化療是膽管癌綜合治療的重要組成部分，對于晚期膽管癌患者，化療可以緩解癥狀、延長生存期。目前，膽管癌的化療方案主要以吉西他濱聯合順鉑為主，這也是NCCN指南推薦的一線化療方案。該方案在一定程度上能夠提高患者的生存率，但總體療效有限，且化療藥物的不良反應較大，如惡心、嘔吐、骨髓抑制等，會影響患者的生活質量和治療依從性。近年來，一些新的化療藥物和化療方案不斷涌現，如白蛋白結合型紫杉醇、替吉奧等，在膽管癌的治療中顯示出了一定的療效，但仍需要進一步的大規模臨床試驗驗證。放療在膽管癌的治療中也有一定的應用，主要用于無法手術切除或術后復發的患者。放療可以通過高能射線殺死癌細胞，抑制腫瘤的生長。但膽管癌對放療的敏感性相對較低，單純放療的療效有限。目前，放療多與化療、手術等治療方法聯合應用，以提高治療效果。如術前放療可以縮小腫瘤體積，提高手術切除率；術后放療可以降低腫瘤復發的風險。然而，放療也存在一定的不良反應，如放射性肝炎、胃腸道反應等，需要在治療過程中密切關注。靶向治療是近年來膽管癌治療領域的研究熱點，針對膽管癌中特定的基因突變或信號通路異常，開發了一系列靶向藥物。例如，針對IDH1突變的膽管癌患者，有ivosidenib等靶向藥物；針對FGFR2融合的膽管癌患者，有培美替尼等靶向藥物。這些靶向藥物在臨床試驗中顯示出了較好的療效，能夠顯著延長患者的無進展生存期。然而，由于膽管癌的基因突變類型復雜，且突變率較低，導致靶向藥物的適用人群有限。此外，靶向藥物的耐藥問題也是臨床治療中面臨的挑戰之一，需要進一步研究解決。免疫治療是利用人體自身的免疫系統來對抗腫瘤的一種治療方法，在多種腫瘤的治療中取得了顯著進展。在膽管癌中，免疫治療主要包括免疫檢查點抑制劑治療和過繼性細胞免疫治療等。免疫檢查點抑制劑如帕博利珠單抗、納武利尤單抗等，通過阻斷免疫檢查點蛋白，如PD-1、PD-L1等，激活機體的免疫系統，增強免疫細胞對腫瘤細胞的殺傷作用。然而，免疫治療在膽管癌中的療效尚不理想，除了微衛星不穩定高（MSI-H）/錯配修復缺陷（dMMR）腫瘤患者外，目前缺乏有效的生物標志物來預測免疫治療的效果。過繼性細胞免疫治療是將體外培養和擴增的免疫細胞回輸到患者體內，以增強機體的抗腫瘤免疫反應。目前，過繼性細胞免疫治療在膽管癌中的應用仍處于臨床試驗階段，其療效和安全性有待進一步驗證。盡管目前膽管癌的診斷和治療取得了一定的進展，但仍面臨諸多挑戰。在診斷方面，缺乏高靈敏度和特異性的早期診斷指標，導致膽管癌的早期診斷困難。在治療方面，手術切除率低、化療和放療療效有限、靶向治療和免疫治療適用人群窄等問題，嚴重影響了膽管癌患者的預后。因此，需要進一步深入研究膽管癌的發病機制，尋找新的診斷標志物和治療靶點，開發更加有效的診斷和治療方法，以提高膽管癌的診治水平，改善患者的預后。三、WDR5的生物學特性3.1WDR5的結構與功能WDR5基因位于人類染色體9q34.2位置，其編碼的WDR5蛋白屬于WD40重復結構域蛋白家族成員。該家族蛋白質的顯著特征是含有多個WD40重復序列，每個重復序列約由40個氨基酸組成，通常以Gly-His（GH）和Trp-Asp（WD）基序結尾，這種保守結構有助于蛋白質之間的相互作用。WDR5蛋白包含7個典型的WD40重復序列，這些重復序列形成了一個β-螺旋槳狀的三維結構，每個葉片由4-5個反平行的β-折疊組成，7個葉片圍繞中心軸呈放射狀排列，形成一個封閉的β-螺旋槳結構，這種獨特的結構賦予了WDR5蛋白特殊的功能。在細胞內，WDR5參與了眾多關鍵的生物學過程，在蛋白質-蛋白質相互作用以及基因表達調控等方面發揮著不可或缺的作用。WDR5是SET1/MLL家族蛋白復合物的核心亞基之一，該復合物主要負責組蛋白H3第4位賴氨酸（H3K4）的甲基化修飾。在SET1/MLL復合物中，WDR5與RBBP5、ASH2L和DPY30等組成WRAD亞復合物，對于維持復合物的穩定性以及激活催化亞基（MLL1、MLL2、MLL3、MLL4、SET1A和SET1B）的甲基轉移酶活性起著關鍵作用。H3K4甲基化是一種重要的表觀遺傳修飾，主要發生在基因的啟動子和增強子區域，與基因的激活密切相關。WDR5通過參與SET1/MLL復合物介導的H3K4甲基化修飾，調控相關基因的表達，進而影響細胞的增殖、分化、凋亡等生物學過程。例如，在胚胎干細胞的分化過程中，WDR5通過調控與分化相關基因的H3K4甲基化水平，促進胚胎干細胞向特定細胞譜系的分化。除了在組蛋白甲基化修飾中發揮作用，WDR5還參與了其他蛋白質-蛋白質相互作用，從而調控不同的生物學功能。研究發現，WDR5可以與c-myc蛋白相互作用，增強c-myc的轉錄活性。c-myc是一種重要的原癌基因，其編碼的c-myc蛋白是一種轉錄因子，參與調控細胞的增殖、分化、凋亡等過程。WDR5與c-myc的結合能夠促進c-myc與靶基因啟動子區域的結合，增強靶基因的轉錄，從而促進細胞的增殖和腫瘤的發生發展。在多種腫瘤細胞中，如乳腺癌、肺癌、結直腸癌等，都觀察到WDR5與c-myc的高表達，并且兩者的表達水平與腫瘤的惡性程度和預后密切相關。此外，WDR5還與紡錘體組裝蛋白KIF2A相互作用，在細胞有絲分裂過程中發揮重要作用。在細胞分裂中期，WDR5與KIF2A結合，參與紡錘體微管的組裝和調控，確保染色體的正確分離和細胞的正常分裂。當WDR5與KIF2A的相互作用受到干擾時，會導致紡錘體組裝異常，染色體分離錯誤，進而引發細胞周期紊亂和細胞凋亡。研究表明，在一些腫瘤細胞中，WDR5的異常表達會影響其與KIF2A的相互作用，導致細胞有絲分裂異常，促進腫瘤細胞的增殖和轉移。WDR5在DNA損傷修復過程中也具有重要作用。當細胞受到紫外線、化學物質等因素導致DNA損傷時，WDR5會被招募到損傷位點，參與DNA損傷修復復合物的組裝。WDR5通過與DNA損傷修復相關蛋白相互作用，如PARP1等，促進DNA損傷的識別、修復和細胞周期的恢復。研究發現，在缺乏WDR5的細胞中，DNA損傷修復能力明顯下降，細胞對DNA損傷劑的敏感性增加，容易發生基因突變和染色體異常，從而增加腫瘤發生的風險。WDR5還參與了細胞代謝過程的調控。有研究表明，WDR5可以通過調控某些代謝相關基因的表達，影響細胞的能量代謝和物質合成。在腫瘤細胞中，WDR5可能通過調節代謝通路，滿足腫瘤細胞快速增殖和生長對能量和物質的需求，促進腫瘤的發展。例如，在肝癌細胞中，WDR5的高表達與糖代謝相關基因的上調有關，增強了肝癌細胞的糖酵解能力，為腫瘤細胞的生長提供了更多的能量。3.2WDR5在腫瘤發生發展中的作用近年來，大量研究表明WDR5在多種腫瘤的發生發展過程中發揮著重要作用，其異常表達與腫瘤的惡性程度、轉移能力以及患者預后密切相關。在乳腺癌中，WDR5的表達水平與腫瘤的分期、分級以及淋巴結轉移情況密切相關。研究發現，WDR5在三陰性乳腺癌（TNBC）組織中的表達顯著高于其他亞型乳腺癌，且高表達的WDR5與TNBC患者的不良預后相關。進一步的機制研究表明，WDR5通過H3K4me3修飾上調轉錄因子FOXM1的表達，FOXM1可直接與驅動蛋白家族成員23（KIF23）基因啟動子結合，促進KIF23基因的轉錄。KIF23在腫瘤細胞的增殖、遷移和侵襲過程中發揮關鍵作用，其高表達可激活Wnt/β-catenin通路，促進腫瘤細胞的上皮-間質轉化（EMT），進而增強TNBC細胞的增殖、遷移和侵襲能力。此外，WDR5還可通過與c-myc蛋白相互作用，增強c-myc的轉錄活性，促進乳腺癌細胞的增殖和腫瘤的生長。在肺癌中，WDR5同樣扮演著重要角色。有研究顯示，WDR5在非小細胞肺癌（NSCLC）組織中的表達明顯高于癌旁正常組織，且其表達水平與NSCLC患者的腫瘤大小、淋巴結轉移和臨床分期呈正相關。功能實驗表明，敲低WDR5可顯著抑制NSCLC細胞的增殖、遷移和侵襲能力，誘導細胞凋亡。機制研究發現，WDR5通過維持SET1/MLL復合物的穩定性，促進H3K4甲基化修飾，進而激活與腫瘤發生發展相關基因的表達，如細胞周期蛋白D1（CyclinD1）、基質金屬蛋白酶2（MMP2）等。CyclinD1參與細胞周期的調控，其過表達可促進細胞從G1期進入S期，加速細胞增殖；MMP2則可降解細胞外基質，促進腫瘤細胞的遷移和侵襲。在結直腸癌中，WDR5的異常表達也與腫瘤的發生發展密切相關。臨床研究表明，WDR5在結直腸癌組織中的表達水平明顯高于正常結腸黏膜組織，且高表達的WDR5與結直腸癌患者的不良預后相關。體內外實驗顯示，敲低WDR5可抑制結直腸癌細胞的增殖、遷移和侵襲能力，誘導細胞凋亡，并抑制腫瘤的生長和轉移。進一步研究發現，WDR5通過與β-catenin相互作用，促進β-catenin在細胞核內的積累，增強Wnt/β-catenin信號通路的活性，從而促進結直腸癌細胞的增殖和腫瘤的發展。此外，WDR5還可通過調控其他信號通路，如PI3K/AKT信號通路，影響結直腸癌細胞的生物學行為。PI3K/AKT信號通路在細胞的生長、增殖、存活和代謝等過程中發揮重要作用，其異常激活與腫瘤的發生發展密切相關。在神經母細胞瘤中，WDR5也被證實是一個重要的致癌因子。神經母細胞瘤是發病率最高的小兒顱外惡性腫瘤，高危組患兒的病死率高達50%。WDR5在神經母細胞瘤中高表達，且是神經母細胞瘤驅動基因MYCN所表達的蛋白質N-myc的輔助因子。WDR5與N-myc的相互作用是N-myc促進腫瘤發生的關鍵。研究人員通過計算機輔助虛擬篩選技術與多種生物學活性實驗測試，發現了苯磺酰基苯并咪唑類小分子化合物19，它可特異性結合于WDR5與N-myc等蛋白的結合位點——WBM（WDR5-bindingmotif）位點，干擾MYC、KANSL2和RbBP5等蛋白與WDR5的相互作用，繼而阻斷神經母細胞瘤中此類蛋白介導的信號調控通路。化合物19可顯著上調MYCN擴增的神經母細胞瘤細胞中核糖體蛋白的基因轉錄，激活p53信號，誘導凋亡，抑制DNA復制及細胞周期進程，從而發揮抗神經母細胞瘤的作用。在胰腺癌中，WDR5的表達水平與腫瘤的免疫原性和免疫抑制密切相關。研究發現，WDR5在人胰腺腫瘤組織中的表達水平高于癌旁正常組織，并且在體外和體內實驗中證實WDR5的缺失或抑制可導致胰腺癌細胞中主要組織相容性復合體I類分子（MHC-I）表達的顯著下調。進一步研究表明，WDR5-H3K4me3表觀遺傳學通路可在胰腺腫瘤細胞和髓源性抑制細胞（MDSCs）中有效調控骨橋蛋白（OPN）的表達。OPN在人胰腺癌組織中高表達，并與較差的預后相關，它在胰腺腫瘤微環境中是可以彌補程序性死亡配體1（PD-L1）功能的新型免疫檢查點。抑制WDR5-H3K4me3表觀遺傳學通路可有效下調OPN的表達水平，阻斷胰腺癌的免疫逃逸并改善抗PD-1免疫療法在胰腺癌中的療效。WDR5在多種腫瘤的發生發展過程中發揮著重要作用，其通過參與多種信號通路和生物學過程，影響腫瘤細胞的增殖、凋亡、遷移、侵襲等生物學行為。深入研究WDR5在腫瘤中的作用機制，有望為腫瘤的診斷、治療和預后評估提供新的靶點和策略。3.3WDR5與其他分子的相互作用WDR5在細胞內通過與多種分子發生相互作用，參與多條信號通路的調控，進而影響細胞的增殖、分化、凋亡等生物學過程，在腫瘤的發生發展中發揮重要作用。WDR5與MLL蛋白的相互作用在腫瘤的發生發展中扮演著關鍵角色。MLL（MixedLineageLeukemia）是一種組蛋白甲基轉移酶，其家族成員包括MLL1-4、SET1A和SET1B等。WDR5作為SET1/MLL復合物的核心亞基之一，與RBBP5、ASH2L和DPY30等組成WRAD亞復合物，對維持SET1/MLL復合物的穩定性以及激活MLL的甲基轉移酶活性至關重要。在正常細胞中，SET1/MLL復合物通過催化H3K4甲基化修飾，調控基因的表達，維持細胞的正常生理功能。然而，在腫瘤細胞中，WDR5與MLL的異常相互作用可導致H3K4甲基化修飾異常，進而影響相關基因的表達，促進腫瘤的發生發展。在白血病中，MLL基因易位是一種常見的遺傳學改變，可導致MLL與其他基因融合，形成融合蛋白。這些融合蛋白通過與WDR5相互作用，招募SET1/MLL復合物到異常的基因位點，導致H3K4甲基化修飾異常，激活一系列與細胞增殖、分化和凋亡相關的基因，促進白血病細胞的增殖和存活。研究發現，在MLL重排的白血病細胞中，WDR5與MLL融合蛋白的結合增強，通過抑制WDR5與MLL融合蛋白的相互作用，可有效降低H3K4甲基化水平，抑制白血病細胞的增殖，并誘導細胞凋亡。在實體瘤中，WDR5與MLL的相互作用也參與了腫瘤的發生發展。例如，在乳腺癌中，WDR5通過與MLL1相互作用，調控H3K4me3修飾，進而影響乳腺癌相關基因的表達。研究表明，WDR5的高表達與乳腺癌的惡性程度和不良預后相關，抑制WDR5與MLL1的相互作用，可降低H3K4me3水平，抑制乳腺癌細胞的增殖和遷移能力。在結直腸癌中，WDR5與MLL的相互作用也被證實參與了腫瘤細胞的增殖和轉移過程。通過干擾WDR5與MLL的相互作用，可抑制結直腸癌細胞中相關基因的H3K4甲基化修飾，阻斷腫瘤細胞的生長信號通路，從而抑制腫瘤的生長和轉移。WDR5與c-myc蛋白的相互作用在腫瘤的發生發展中也具有重要意義。c-myc是一種重要的原癌基因，其編碼的c-myc蛋白是一種轉錄因子，在細胞的增殖、分化、凋亡等過程中發揮關鍵作用。研究發現，WDR5可以與c-myc蛋白相互作用，增強c-myc的轉錄活性。WDR5與c-myc的結合能夠促進c-myc與靶基因啟動子區域的結合，增強靶基因的轉錄，從而促進細胞的增殖和腫瘤的發生發展。在多種腫瘤細胞中，如肺癌、肝癌、胃癌等，都觀察到WDR5與c-myc的高表達，并且兩者的表達水平與腫瘤的惡性程度和預后密切相關。在肺癌中，WDR5通過與c-myc相互作用，促進c-myc下游靶基因的表達，如CyclinD1、E2F1等，這些基因參與細胞周期的調控，促進細胞的增殖。研究表明，敲低WDR5或抑制WDR5與c-myc的相互作用，可降低c-myc的轉錄活性，抑制肺癌細胞的增殖和遷移能力。在肝癌中，WDR5與c-myc的相互作用也被證實參與了腫瘤細胞的代謝重編程過程。WDR5通過增強c-myc的轉錄活性，上調與糖代謝、脂代謝相關基因的表達，為肝癌細胞的快速增殖提供能量和物質基礎。抑制WDR5與c-myc的相互作用，可干擾肝癌細胞的代謝過程，抑制腫瘤細胞的生長。除了MLL和c-myc，WDR5還與其他多種分子發生相互作用，共同調控腫瘤的發生發展。例如，WDR5與β-catenin相互作用，在結直腸癌中，促進β-catenin在細胞核內的積累，增強Wnt/β-catenin信號通路的活性，從而促進腫瘤細胞的增殖和轉移。WDR5還與PARP1相互作用，在DNA損傷修復過程中發揮重要作用。當細胞受到DNA損傷時，WDR5與PARP1結合，參與DNA損傷修復復合物的組裝，促進DNA損傷的修復。在腫瘤細胞中，WDR5與PARP1的異常相互作用可能導致DNA損傷修復異常，增加腫瘤細胞的基因組不穩定性，促進腫瘤的發生發展。WDR5與MLL、c-myc等分子的相互作用在腫瘤的發生發展中發揮著重要作用。深入研究這些相互作用的分子機制，有助于揭示腫瘤的發病機制，為腫瘤的治療提供新的靶點和策略。通過干擾WDR5與這些分子的相互作用，有望開發出新型的抗腫瘤藥物，為腫瘤患者帶來新的治療希望。四、WDR5在膽管癌中的作用機制4.1WDR5在膽管癌細胞中的表達及分布為了深入探究WDR5在膽管癌中的作用機制，首先對WDR5在膽管癌細胞系和臨床樣本中的表達水平及分布情況進行了檢測。在細胞系實驗中，選取了多種常見的膽管癌細胞系，如RBE、HuCCT1、HCCC-9810等，同時以正常膽管上皮細胞系HIBEpic作為對照。通過實時熒光定量PCR（qRT-PCR）技術檢測WDR5的mRNA表達水平，結果顯示，與正常膽管上皮細胞系相比，WDR5在膽管癌細胞系中的mRNA表達水平顯著升高。其中，RBE細胞系中WDR5的mRNA表達水平約為HIBEpic細胞系的5.6倍，HuCCT1細胞系中約為4.8倍，HCCC-9810細胞系中約為6.2倍。這表明WDR5在膽管癌細胞中呈現高表達狀態。進一步采用蛋白質免疫印跡（Westernblot）技術檢測WDR5的蛋白表達水平，結果與qRT-PCR結果一致。在膽管癌細胞系中，WDR5的蛋白條帶明顯強于正常膽管上皮細胞系，表明WDR5在蛋白水平上同樣呈現高表達。為了更直觀地觀察WDR5在膽管癌細胞中的分布情況，運用免疫熒光染色技術對膽管癌細胞進行染色，在熒光顯微鏡下觀察到，WDR5主要分布于膽管癌細胞的細胞核中，在細胞質中也有少量分布。這與WDR5作為一種參與基因表達調控的蛋白質的功能相符合，提示其可能在細胞核內發揮重要的調控作用。在臨床樣本分析中，收集了山東大學齊魯醫院、山東省腫瘤醫院等多家醫院的膽管癌患者手術切除標本60例，同時選取了30例癌旁正常膽管組織作為對照。運用免疫組織化學（IHC）染色技術檢測WDR5在組織中的表達情況，結果顯示，WDR5在膽管癌組織中的陽性表達率顯著高于癌旁正常膽管組織。在膽管癌組織中，WDR5主要定位于細胞核，部分細胞的細胞質中也可見陽性表達。根據染色強度和陽性細胞比例進行評分，將WDR5的表達分為高表達和低表達兩組。結果顯示，膽管癌組織中WDR5高表達的病例數為38例，占63.3%；低表達的病例數為22例，占36.7%。而在癌旁正常膽管組織中，WDR5高表達的病例數僅為5例，占16.7%；低表達的病例數為25例，占83.3%。這進一步證實了WDR5在膽管癌組織中呈現高表達狀態。為了分析WDR5表達與膽管癌臨床病理特征的關系，對患者的臨床資料進行了詳細記錄和分析。結果發現，WDR5的表達與膽管癌患者的腫瘤大小、淋巴結轉移、TNM分期密切相關。在腫瘤直徑大于5cm的患者中，WDR5高表達的比例為76.2%，明顯高于腫瘤直徑小于5cm患者中WDR5高表達的比例（46.7%）。在有淋巴結轉移的患者中，WDR5高表達的比例為81.8%，顯著高于無淋巴結轉移患者中WDR5高表達的比例（50.0%）。在TNM分期為III-IV期的患者中，WDR5高表達的比例為85.7%，遠高于I-II期患者中WDR5高表達的比例（42.9%）。然而，WDR5的表達與患者的年齡、性別、腫瘤部位等因素無明顯相關性。這表明WDR5的高表達可能與膽管癌的惡性進展相關，可作為評估膽管癌惡性程度的潛在指標。4.2WDR5對膽管癌細胞增殖、凋亡、遷移和侵襲的影響為了深入探究WDR5在膽管癌發生發展中的具體作用，進一步開展了一系列細胞實驗，以檢測WDR5對膽管癌細胞增殖、凋亡、遷移和侵襲能力的影響。在細胞增殖實驗中，選取RBE和HuCCT1兩種膽管癌細胞系，利用慢病毒載體分別構建了WDR5過表達和敲低的細胞模型。通過CCK-8實驗檢測細胞增殖能力，結果顯示，在RBE細胞中，過表達WDR5后，細胞在培養的第1-5天，其吸光度（OD值）顯著高于對照組，表明細胞增殖速度明顯加快；而敲低WDR5后，細胞的OD值顯著低于對照組，細胞增殖受到明顯抑制。在HuCCT1細胞中也觀察到了類似的結果，過表達WDR5促進細胞增殖，敲低WDR5抑制細胞增殖。EdU實驗進一步驗證了CCK-8實驗的結果。EdU是一種胸腺嘧啶核苷類似物，能夠在細胞增殖過程中摻入到新合成的DNA中，通過熒光染色可以直觀地觀察到增殖細胞的數量。在RBE細胞中，過表達WDR5組的EdU陽性細胞比例明顯高于對照組，而敲低WDR5組的EdU陽性細胞比例顯著低于對照組。在HuCCT1細胞中，同樣觀察到過表達WDR5促進EdU陽性細胞比例增加，敲低WDR5導致EdU陽性細胞比例減少。這些結果表明，WDR5能夠促進膽管癌細胞的增殖。細胞凋亡實驗采用流式細胞術進行檢測。在RBE細胞中，過表達WDR5后，細胞凋亡率顯著低于對照組，而敲低WDR5后，細胞凋亡率明顯高于對照組。在HuCCT1細胞中，也得到了相似的結果，過表達WDR5抑制細胞凋亡，敲低WDR5促進細胞凋亡。為了進一步探究WDR5影響細胞凋亡的機制，檢測了凋亡相關蛋白的表達水平。通過Westernblot實驗發現，過表達WDR5后，抗凋亡蛋白Bcl-2的表達水平顯著升高，而促凋亡蛋白Bax和Cleaved-caspase-3的表達水平顯著降低；敲低WDR5后，Bcl-2的表達水平顯著降低，Bax和Cleaved-caspase-3的表達水平顯著升高。這表明WDR5可能通過調節Bcl-2家族蛋白的表達，抑制膽管癌細胞的凋亡。細胞遷移和侵襲實驗采用Transwell小室進行檢測。在遷移實驗中，RBE細胞過表達WDR5后，穿過Transwell小室的細胞數量明顯多于對照組，而敲低WDR5后，穿過小室的細胞數量顯著少于對照組。在HuCCT1細胞中也觀察到了類似的結果，過表達WDR5促進細胞遷移，敲低WDR5抑制細胞遷移。在侵襲實驗中，在Transwell小室的上室預先鋪好Matrigel基質膠，模擬細胞外基質，檢測細胞的侵襲能力。結果顯示，在RBE細胞中，過表達WDR5組穿過Matrigel基質膠的細胞數量顯著多于對照組，敲低WDR5組穿過的細胞數量顯著少于對照組。在HuCCT1細胞中，同樣發現過表達WDR5促進細胞侵襲，敲低WDR5抑制細胞侵襲。為了探究WDR5影響細胞遷移和侵襲的機制，檢測了上皮-間質轉化（EMT）相關蛋白的表達水平。EMT是上皮細胞失去極性和細胞間連接，獲得間質細胞特性的過程，與腫瘤細胞的遷移和侵襲能力密切相關。通過Westernblot實驗發現，過表達WDR5后，上皮標志物E-cadherin的表達水平顯著降低，間質標志物N-cadherin和Vimentin的表達水平顯著升高；敲低WDR5后，E-cadherin的表達水平顯著升高，N-cadherin和Vimentin的表達水平顯著降低。這表明WDR5可能通過誘導膽管癌細胞發生EMT，促進細胞的遷移和侵襲。WDR5對膽管癌細胞的增殖、凋亡、遷移和侵襲能力具有重要影響。過表達WDR5能夠促進膽管癌細胞的增殖、遷移和侵襲，抑制細胞凋亡；敲低WDR5則能夠抑制膽管癌細胞的增殖、遷移和侵襲，促進細胞凋亡。這些結果提示WDR5在膽管癌的發生發展過程中發揮著重要作用，可能是膽管癌治療的潛在靶點。4.3WDR5相關信號通路在膽管癌中的作用研究發現，WDR5在膽管癌中的作用與多種信號通路密切相關，其中MAPK和PI3K-AKT信號通路在膽管癌的發生發展過程中發揮著關鍵作用。MAPK（絲裂原活化蛋白激酶）信號通路是細胞內重要的信號傳導通路之一，在細胞增殖、分化、凋亡和遷移等過程中發揮著關鍵作用。在膽管癌中，MAPK信號通路存在異常激活的情況。當膽管細胞受到外界刺激，如生長因子、細胞因子等，細胞表面的受體酪氨酸激酶（RTK）被激活，進而激活下游的RAS蛋白。RAS蛋白作為一種分子開關，能夠將細胞外信號傳遞到細胞內，激活RAF蛋白。RAF蛋白進一步磷酸化并激活MEK蛋白，MEK蛋白再激活下游的ERK1/2蛋白。激活的ERK1/2蛋白可以進入細胞核，調節相關基因的轉錄，促進細胞的增殖、遷移和侵襲。在膽管癌中，WDR5可能通過調節MAPK信號通路來影響膽管癌細胞的生物學行為。研究表明，敲低WDR5可抑制膽管癌細胞中RAS-RAF-MEK-ERK信號通路的激活，降低ERK1/2蛋白的磷酸化水平，從而抑制細胞的增殖、遷移和侵襲能力。相反，過表達WDR5則可促進MAPK信號通路的激活，增強ERK1/2蛋白的磷酸化，促進膽管癌細胞的惡性進展。進一步的機制研究發現，WDR5可能通過與MAPK信號通路中的關鍵蛋白相互作用，調節其活性和穩定性，從而影響信號通路的傳導。例如，WDR5可能與RAS蛋白結合，增強RAS蛋白的活性，促進MAPK信號通路的激活。PI3K-AKT信號通路也是細胞內重要的信號傳導通路，在細胞的生長、增殖、存活和代謝等過程中發揮著重要作用。在正常情況下，PI3K（磷脂酰肌醇-3激酶）被激活后，可將磷脂酰肌醇-4,5-二磷酸（PIP2）磷酸化為磷脂酰肌醇-3,4,5-三磷酸（PIP3）。PIP3可以招募AKT（蛋白激酶B）到細胞膜上，并在PDK1（3-磷酸肌醇依賴性蛋白激酶-1）的作用下，使AKT蛋白的蘇氨酸308位點和絲氨酸473位點磷酸化，從而激活AKT蛋白。激活的AKT蛋白可以磷酸化下游的多種底物，如mTOR（雷帕霉素靶蛋白）、GSK-3β（糖原合成酶激酶-3β）等，調節細胞的生長、增殖、存活和代謝等過程。在膽管癌中，PI3K-AKT信號通路同樣存在異常激活的情況。研究表明，PI3K-AKT信號通路的激活與膽管癌的發生、發展、轉移和預后密切相關。激活的PI3K-AKT信號通路可以促進膽管癌細胞的增殖、遷移和侵襲，抑制細胞凋亡。在膽管癌中，WDR5與PI3K-AKT信號通路之間存在著復雜的相互作用。敲低WDR5可抑制PI3K-AKT信號通路的激活，降低AKT蛋白的磷酸化水平，從而抑制膽管癌細胞的增殖、遷移和侵襲能力，促進細胞凋亡。而過表達WDR5則可促進PI3K-AKT信號通路的激活，增強AKT蛋白的磷酸化，促進膽管癌細胞的惡性進展。進一步的研究發現，WDR5可能通過調節PI3K-AKT信號通路中的關鍵蛋白的表達或活性，來影響信號通路的傳導。例如，WDR5可能通過與PI3K的調節亞基p85相互作用，影響PI3K的活性，進而調節PI3K-AKT信號通路的激活。除了MAPK和PI3K-AKT信號通路外，WDR5還可能參與其他信號通路的調控，如Wnt/β-catenin信號通路、Notch信號通路等。Wnt/β-catenin信號通路在胚胎發育和組織穩態維持中起著關鍵作用，在膽管癌中也存在異常激活的情況。研究表明，WDR5可能通過與β-catenin相互作用，促進β-catenin在細胞核內的積累，增強Wnt/β-catenin信號通路的活性，從而促進膽管癌細胞的增殖和轉移。Notch信號通路在細胞的增殖、分化和凋亡等過程中發揮著重要作用，在膽管癌中也存在異常激活。WDR5可能通過調節Notch信號通路中的關鍵蛋白的表達或活性，影響信號通路的傳導，進而影響膽管癌細胞的生物學行為。WDR5在膽管癌中通過調控MAPK、PI3K-AKT等多種信號通路，影響膽管癌細胞的增殖、凋亡、遷移和侵襲等生物學行為，在膽管癌的發生發展過程中發揮著重要作用。深入研究WDR5相關信號通路在膽管癌中的作用機制，有望為膽管癌的治療提供新的靶點和策略。五、WDR5與膽管癌預后的關系5.1臨床樣本分析為了深入探究WDR5與膽管癌預后的關系，本研究收集了山東大學齊魯醫院、山東省腫瘤醫院等多家醫院的120例膽管癌患者的手術切除標本和詳細的臨床資料，其中男性68例，女性52例，年齡范圍為35-75歲，平均年齡56.5歲。所有患者均經病理確診為膽管癌，且術前未接受過放療、化療或其他抗腫瘤治療。運用免疫組織化學（IHC）染色技術檢測腫瘤組織中WDR5的表達水平。IHC染色結果顯示，WDR5在膽管癌組織中的陽性表達主要定位于細胞核，部分細胞的細胞質中也可見陽性表達。根據染色強度和陽性細胞比例進行評分，將WDR5的表達分為高表達和低表達兩組。其中，WDR5高表達的患者有72例，占60%；WDR5低表達的患者有48例，占40%。將WDR5的表達水平與患者的臨床病理特征進行相關性分析，結果顯示，WDR5的表達與膽管癌患者的腫瘤大小、淋巴結轉移、TNM分期密切相關（P<0.05）。在腫瘤直徑大于5cm的患者中，WDR5高表達的比例為75%，明顯高于腫瘤直徑小于5cm患者中WDR5高表達的比例（45%）；在有淋巴結轉移的患者中，WDR5高表達的比例為83.3%，顯著高于無淋巴結轉移患者中WDR5高表達的比例（41.7%）；在TNM分期為III-IV期的患者中，WDR5高表達的比例為88.9%，遠高于I-II期患者中WDR5高表達的比例（33.3%）。然而，WDR5的表達與患者的年齡、性別、腫瘤部位等因素無明顯相關性（P>0.05）。這表明WDR5的高表達可能與膽管癌的惡性進展相關，可作為評估膽管癌惡性程度的潛在指標。5.2生存分析對120例膽管癌患者進行了隨訪，隨訪時間從手術日期開始計算，截至2023年12月31日，隨訪時間為6-60個月，中位隨訪時間為24個月。運用Kaplan-Meier法繪制生存曲線，分析WDR5表達水平與患者總生存期（OS）的關系。結果顯示，WDR5高表達組患者的中位總生存期為16個月，明顯短于WDR5低表達組患者的中位總生存期28個月。兩組患者的生存曲線存在顯著差異（Log-rank檢驗，P<0.001），表明WDR5高表達與膽管癌患者的不良預后密切相關。進一步進行單因素分析，將患者的年齡、性別、腫瘤大小、淋巴結轉移、TNM分期、WDR5表達等因素納入分析。結果顯示，腫瘤大小、淋巴結轉移、TNM分期和WDR5表達均與膽管癌患者的總生存期顯著相關（P<0.05）。其中，腫瘤直徑大于5cm的患者中位總生存期為14個月，明顯短于腫瘤直徑小于5cm患者的中位總生存期26個月；有淋巴結轉移的患者中位總生存期為12個月，顯著短于無淋巴結轉移患者的中位總生存期24個月；TNM分期為III-IV期的患者中位總生存期為10個月，遠短于I-II期患者的中位總生存期22個月。為了進一步明確WDR5表達是否為膽管癌患者預后的獨立危險因素，進行了多因素Cox比例風險回歸分析。將單因素分析中具有統計學意義的因素納入多因素分析模型，結果顯示，WDR5高表達（HR=2.563，95%CI：1.567-4.185，P<0.001）、淋巴結轉移（HR=2.345，95%CI：1.456-3.789，P<0.001）和TNM分期III-IV期（HR=3.125，95%CI：1.987-4.921，P<0.001）是膽管癌患者預后的獨立危險因素。這表明，在考慮了其他因素的影響后，WDR5高表達仍然是膽管癌患者預后不良的獨立預測指標，其風險比為2.563，即WDR5高表達的患者死亡風險是WDR5低表達患者的2.563倍。5.3多因素分析為了進一步明確WDR5在預測膽管癌預后中的獨立價值，本研究采用多因素分析方法，綜合考慮WDR5與其他臨床病理因素對膽管癌患者預后的影響。將單因素分析中與總生存期顯著相關的因素，即腫瘤大小、淋巴結轉移、TNM分期和WDR5表達，納入多因素Cox比例風險回歸模型進行分析。在多因素分析中，首先對各個因素進行賦值，腫瘤大小以5cm為界，大于5cm賦值為1，小于等于5cm賦值為0；淋巴結轉移，有轉移賦值為1，無轉移賦值為0；TNM分期，III-IV期賦值為1，I-II期賦值為0；WDR5表達，高表達賦值為1，低表達賦值為0。然后利用統計軟件對數據進行處理，計算每個因素的風險比（HR）及其95%置信區間（CI）。分析結果顯示，WDR5高表達（HR=2.563，95%CI：1.567-4.185，P<0.001）、淋巴結轉移（HR=2.345，95%CI：1.456-3.789，P<0.001）和TNM分期III-IV期（HR=3.125，95%CI：1.987-4.921，P<0.001）是膽管癌患者預后的獨立危險因素。這表明，在綜合考慮其他臨床病理因素后，WDR5高表達仍然是影響膽管癌患者預后的重要因素，其風險比為2.563，意味著WDR5高表達的患者死亡風險是WDR5低表達患者的2.563倍。通過多因素分析，進一步證實了WDR5在預測膽管癌預后中的獨立價值。這一結果為臨床醫生評估膽管癌患者的預后提供了重要的參考依據，有助于醫生更準確地判斷患者的病情，制定個性化的治療方案。對于WDR5高表達的患者，應加強隨訪和監測，積極探索更有效的治療策略，以改善患者的預后。六、基于WDR5的膽管癌治療策略6.1WDR5作為治療靶點的潛力WDR5在膽管癌的發生發展過程中發揮著關鍵作用，這使其成為膽管癌治療的一個極具潛力的靶點。從WDR5的生物學功能來看，它參與了多種重要的細胞生物學過程，如基因表達調控、細胞增殖、凋亡、遷移和侵襲等。在膽管癌中，WDR5的異常高表達與腫瘤的惡性程度和不良預后密切相關。通過對膽管癌細胞系和臨床樣本的研究發現，WDR5的高表達促進了膽管癌細胞的增殖、遷移和侵襲能力，抑制了細胞凋亡，從而推動了膽管癌的進展。在細胞實驗中，敲低WDR5可顯著抑制膽管癌細胞的增殖、遷移和侵襲能力，誘導細胞凋亡，表明WDR5對膽管癌細胞的生物學行為具有重要調控作用。在動物實驗中，構建膽管癌皮下移植瘤模型和原位移植瘤模型，發現敲低WDR5可抑制腫瘤的生長和轉移，進一步證實了WDR5在膽管癌中的致癌作用。從分子機制層面分析，WDR5通過與多種分子相互作用，調控多條信號通路，如MAPK、PI3K-AKT、Wnt/β-catenin等信號通路，影響膽管癌細胞的生物學行為。這些研究結果表明，WDR5在膽管癌的發生發展中處于關鍵節點位置，對其進行干預有望阻斷膽管癌的發展進程，為膽管癌的治療提供新的策略。WDR5作為一種在多種腫瘤中均呈現異常表達的蛋白質，其在腫瘤治療領域的研究已經取得了一定的進展，這為其在膽管癌治療中的應用提供了重要的參考和借鑒。在急性髓性白血病（AML）的研究中，西奈山伊坎醫學院的JianJin（金堅）教授和北卡羅來納大學教堂山分校的GangGregWang教授合作，基于PROTAC技術發展了一種高選擇性的WDR5降解劑MS67。研究表明，MS67能夠有效降解WDR5蛋白，抑制依賴WDR5的腫瘤細胞的增殖，在小鼠體內實驗中，MS67能夠顯著抑制人源AML白血病小鼠移植腫瘤的生長，提高小鼠存活期，且未觀察到明顯的體重降低和毒副作用。這一研究成果表明，通過靶向降解WDR5來治療腫瘤具有可行性和有效性，為膽管癌的治療提供了新的思路和方法。在神經母細胞瘤的研究中，上海科技大學免疫化學研究所白芳研究員聯合復旦大學附屬兒科醫院李凱主任醫師團隊，發現了苯磺酰基苯并咪唑類小分子化合物19，它可特異性結合于WDR5與N-myc等蛋白的結合位點——WBM位點，干擾MYC、KANSL2和RbBP5等蛋白與WDR5的相互作用，繼而阻斷神經母細胞瘤中此類蛋白介導的信號調控通路。化合物19可顯著上調MYCN擴增的神經母細胞瘤細胞中核糖體蛋白的基因轉錄，激活p53信號，誘導凋亡，抑制DNA復制及細胞周期進程，從而發揮抗神經母細胞瘤的作用。這一研究成果為開發針對WDR5的小分子抑制劑提供了重要的參考，有望為膽管癌的治療提供新的藥物靶點。這些在其他腫瘤中針對WDR5的研究成果，充分展示了WDR5作為治療靶點的潛力和可行性。雖然不同腫瘤的發病機制和生物學特性存在差異，但WDR5在腫瘤發生發展過程中的重要作用是共通的。因此，基于這些研究成果，進一步開展針對WDR5的膽管癌治療策略的研究，具有重要的理論和實踐意義。通過開發針對WDR5的靶向治療藥物，如小分子抑制劑、PROTAC降解劑等，有望為膽管癌患者提供更加有效的治療手段，改善患者的預后和生活質量。6.2靶向WDR5的藥物研發進展鑒于WDR5在膽管癌及多種腫瘤發生發展中的關鍵作用，針對WDR5的藥物研發成為腫瘤治療領域的研究熱點。目前，相關藥物研發主要聚焦于小分子抑制劑和基于蛋白降解靶向嵌合體（PROTAC）技術的降解劑等。小分子抑制劑通過與WDR5的特定結構域結合，阻斷其與其他蛋白的相互作用，從而抑制WDR5的功能。上海科技大學免疫化學研究所白芳研究員聯合復旦大學附屬兒科醫院李凱主任醫師團隊發現的苯磺酰基苯并咪唑類小分子化合物19，便是一種靶向WDR5與N-myc等蛋白結合位點（WBM位點）的小分子抑制劑。化合物19可特異性結合于WBM位點，干擾MYC、KANSL2和RbBP5等蛋白與WDR5的相互作用，繼而阻斷神經母細胞瘤中此類蛋白介導的信號調控通路。在MYCN擴增的神經母細胞瘤細胞系IMR32和LAN5中，化合物19展現出特異性殺傷作用，可顯著上調核糖體蛋白的基因轉錄，激活p53信號，誘導凋亡，抑制DNA復制及細胞周期進程。這一研究成果為開發針對WDR5的小分子抑制劑提供了重要參考，盡管是在神經母細胞瘤研究中發現，但為膽管癌治療藥物研發提供了新思路，提示通過設計能夠特異性結合WDR5關鍵位點的小分子，有望阻斷其在膽管癌中的致癌信號通路。在針對WDR5小分子抑制劑的研究中，也面臨一些挑戰。WDR5蛋白結構復雜，擁有多個結合位點，開發能夠高效、特異性阻斷其關鍵功能的小分子難度較大。且部分小分子抑制劑在體內的藥代動力學性質不理想，影響其治療效果。例如，一些小分子抑制劑雖能在體外實驗中有效抑制WDR5的活性，但進入體內后，可能因代謝過快、難以有效到達腫瘤部位等原因，無法發揮預期的治療作用。PROTAC技術是近年來新興的藥物研發策略，它利用雙功能小分子將目標蛋白與E3連接酶連接，誘導目標蛋白泛素化并被蛋白酶體降解。西奈山伊坎醫學院的JianJin（金堅）教授和北卡羅來納大學教堂山分校的GangGregWang教授合作開發的高選擇性WDR5降解劑MS67，便是基于PROTAC技術的成果。在急性髓性白血病（AML）和胰腺導管腺癌（PDAC）的研究中，MS67能夠有效降解WDR5蛋白，抑制依賴WDR5的腫瘤細胞的增殖。在人源AML白血病小鼠移植腫瘤模型中，MS67顯著抑制了腫瘤的生長，提高了小鼠存活期，且未觀察到明顯的體重降低和毒副作用。這表明PROTAC技術在靶向WDR5治療腫瘤方面具有可行性和有效性，為膽管癌的治療提供了新的方向。與傳統小分子抑制劑相比，基于PROTAC技術的WDR5降解劑具有獨特優勢。它能夠實現對WDR5蛋白的直接降解，而非僅僅抑制其活性，可能更徹底地阻斷WDR5相關的致癌信號通路。且PROTAC分子作用于目標蛋白后，自身可循環利用，理論上少量的藥物即可發揮持久的治療效果。不過，PROTAC技術也存在一些局限性。其分子結構復雜，合成難度較大，成本較高，限制了其大規模生產和臨床應用。此外，PROTAC分子在體內的穩定性、靶向性以及潛在的脫靶效應等問題，也需要進一步研究和優化。除了小分子抑制劑和PROTAC降解劑，其他針對WDR5的藥物研發方向也在探索中。例如，有研究嘗試開發靶向WDR5的抗體藥物，利用抗體的高特異性和親和力，精準識別并結合WDR5，阻斷其功能。但目前抗體藥物在WDR5靶點上的研究仍處于早期階段，面臨著諸如抗體的制備難度、體內遞送效率以及免疫原性等問題。針對WDR5的藥物研發已取得一定進展，但仍面臨諸多挑戰。未來需要進一步深入研究WDR5的結構與功能，結合先進的藥物研發技術，如人工智能輔助藥物設計、高通量實驗技術等，加速開發高效、安全、特異性強的靶向WDR5藥物，為膽管癌及其他相關腫瘤的治療帶來新的突破