PCR理論培訓(xùn)試題一、選擇題1.PCR的中文名稱是（）[單選題]*A.聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)B.多聚酶鏈反應(yīng)C.聚合酶鏈鎖反應(yīng)D.以上都對(duì)答案：D。原因：PCR的英文全稱為PolymeraseChainReaction，中文可以譯為聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)、多聚酶鏈反應(yīng)或者聚合酶鏈鎖反應(yīng)，這幾個(gè)譯名都指的是同一種生物技術(shù)。2.PCR反應(yīng)體系中，以下哪種物質(zhì)提供了反應(yīng)所需的模板（）[單選題]*A.dNTPB.引物C.模板DNAD.Taq酶答案：C。原因：在PCR反應(yīng)體系中，dNTP是合成DNA的原料，引物是與模板DNA結(jié)合引導(dǎo)DNA合成的短鏈核酸，Taq酶是催化DNA合成的酶，而模板DNA則提供了反應(yīng)進(jìn)行的模板序列。3.Taq酶的最適反應(yīng)溫度是（）[單選題]*A.37°CB.55°CC.72°CD.95°C答案：C。原因：Taq酶是一種熱穩(wěn)定的DNA聚合酶，其最適反應(yīng)溫度為72°C，在這個(gè)溫度下它能夠有效地催化以引物為起始點(diǎn)的DNA鏈延伸反應(yīng)。4.PCR反應(yīng)中，變性步驟的溫度一般為（）[單選題]*A.90-95°CB.50-55°CC.60-65°CD.70-75°C答案：A。原因：在PCR反應(yīng)的變性步驟中，需要將雙鏈DNA解開成單鏈，這個(gè)過程一般需要較高的溫度，90-95°C能夠使DNA的氫鍵斷裂，從而實(shí)現(xiàn)雙鏈到單鏈的轉(zhuǎn)變。5.以下哪個(gè)不是PCR反應(yīng)的基本步驟（）[單選題]*A.變性B.退火C.延伸D.連接答案：D。原因：PCR反應(yīng)的基本步驟包括變性（使雙鏈DNA變?yōu)閱捂湥⑼嘶穑ㄒ锱c模板結(jié)合）和延伸（合成新的DNA鏈），而連接不是PCR反應(yīng)的基本步驟。6.PCR反應(yīng)中，引物的長(zhǎng)度一般為（）[多選題]*A.10-20bpB.20-30bpC.30-40bpD.40-50bp答案：AB。原因：引物的長(zhǎng)度通常在10-30bp之間，10-20bp和20-30bp都在這個(gè)合理的長(zhǎng)度范圍內(nèi)，30-40bp和40-50bp相對(duì)較長(zhǎng)，可能會(huì)影響引物與模板的特異性結(jié)合以及反應(yīng)效率。7.下列哪種因素可能影響PCR的特異性（）[單選題]*A.模板DNA的濃度B.引物的特異性C.dNTP的濃度D.Taq酶的活性答案：B。原因：引物的特異性決定了它與模板DNA結(jié)合的準(zhǔn)確性，如果引物特異性差，可能會(huì)與非目標(biāo)序列結(jié)合，從而影響PCR的特異性。模板DNA濃度主要影響產(chǎn)物的量，dNTP濃度和Taq酶活性更多地影響反應(yīng)的效率等方面。8.在PCR反應(yīng)中，dNTP的作用是（）[單選題]*A.提供能量B.提供堿基C.激活Taq酶D.穩(wěn)定反應(yīng)體系答案：B。原因：dNTP（脫氧核糖核苷三磷酸）是合成DNA的原料，它為新合成的DNA鏈提供了堿基，從而使DNA鏈得以延伸。9.PCR反應(yīng)的退火溫度主要取決于（）[單選題]*A.模板DNA的長(zhǎng)度B.引物的長(zhǎng)度和GC含量C.Taq酶的種類D.dNTP的濃度答案：B。原因：引物的長(zhǎng)度和GC含量對(duì)退火溫度影響較大，GC含量高的引物需要較高的退火溫度，同時(shí)引物較長(zhǎng)也需要適當(dāng)提高退火溫度以保證引物與模板的特異性結(jié)合，而模板DNA長(zhǎng)度、Taq酶種類和dNTP濃度對(duì)退火溫度影響較小。10.如果PCR產(chǎn)物出現(xiàn)非特異性條帶，可能的原因是（）[多選題]*A.引物設(shè)計(jì)不合理B.退火溫度過低C.模板DNA有污染D.Taq酶活性過高答案：ABC。原因：引物設(shè)計(jì)不合理可能導(dǎo)致引物與非目標(biāo)序列結(jié)合產(chǎn)生非特異性條帶；退火溫度過低會(huì)使引物與模板的結(jié)合特異性降低，產(chǎn)生非特異性產(chǎn)物；模板DNA有污染時(shí)，污染的DNA可能被擴(kuò)增從而出現(xiàn)非特異性條帶。Taq酶活性過高一般主要影響反應(yīng)速度和產(chǎn)量，而非特異性條帶的產(chǎn)生關(guān)系不大。11.PCR反應(yīng)中，循環(huán)次數(shù)過多可能會(huì)導(dǎo)致（）[單選題]*A.特異性產(chǎn)物增加B.非特異性產(chǎn)物增加C.反應(yīng)體系失效D.產(chǎn)物量不變答案：B。原因：隨著PCR循環(huán)次數(shù)過多，反應(yīng)體系中的各種成分逐漸消耗，同時(shí)也增加了引物與非目標(biāo)序列結(jié)合的機(jī)會(huì)，從而導(dǎo)致非特異性產(chǎn)物增加。12.以下關(guān)于PCR反應(yīng)的說法正確的是（）[單選題]*A.反應(yīng)體系中可以沒有引物B.反應(yīng)不需要鎂離子C.可以同時(shí)擴(kuò)增多個(gè)不同的目標(biāo)序列D.只能使用一種特定的Taq酶答案：C。原因：PCR反應(yīng)可以通過設(shè)計(jì)多對(duì)引物同時(shí)擴(kuò)增多個(gè)不同的目標(biāo)序列。反應(yīng)體系中引物是必須的，鎂離子是Taq酶發(fā)揮活性所必需的，并且存在多種不同的Taq酶可供選擇。13.在進(jìn)行定量PCR時(shí)，以下哪種物質(zhì)可以作為內(nèi)參基因（）[單選題]*A.β-actinB.GFPC.目的基因本身D.隨機(jī)引物答案：A。原因：β-actin在許多細(xì)胞類型中表達(dá)相對(duì)穩(wěn)定，可以作為內(nèi)參基因用于校正定量PCR中的實(shí)驗(yàn)誤差等，GFP是一種報(bào)告基因，目的基因本身不能作為內(nèi)參基因，隨機(jī)引物是用于引發(fā)DNA合成的，不能作為內(nèi)參基因。14.PCR反應(yīng)中，以下哪種情況可能導(dǎo)致沒有產(chǎn)物生成（）[多選題]*A.引物缺失B.Taq酶失活C.模板DNA嚴(yán)重降解D.反應(yīng)體系中沒有dNTP答案：ABCD。原因：引物缺失則無法引導(dǎo)DNA合成；Taq酶失活不能催化DNA鏈的延伸；模板DNA嚴(yán)重降解沒有完整的模板序列可供擴(kuò)增；反應(yīng)體系中沒有dNTP則沒有合成DNA的原料，這些情況都可能導(dǎo)致沒有產(chǎn)物生成。15.以下關(guān)于PCR技術(shù)的應(yīng)用，錯(cuò)誤的是