第2章細胞工程第2節動物細胞工程Part2動物細胞融合技術與單克隆抗體目錄/CONTENTS0102動物細胞融合技術單克隆抗體及其應用植物體細胞雜交植物細胞融合植物組織培養溫故而知新：意義：打破生殖隔離，實現遠緣雜交育種，培育植物新品種。

溫故而知新：實驗：人——鼠細胞熒光標記融合實驗501動物細胞融合技術使兩個或多個動物細胞結合形成一個細胞的技術。形成具有原來兩個或多個細胞的遺傳信息的雜交細胞

細胞膜具有一定的流動性1、概念：4、結果：2、原理：3、誘導方式物理法：電融合法化學法：聚乙二醇（PEG)生物法：滅活病毒誘導法與植物原生質體融合的方法相同——動物細胞融合特有601動物細胞融合技術5、過程:動物細胞融合動物細胞培養細胞膜的流動性細胞增殖701動物細胞融合技術滅活病毒誘導細胞融合的原理滅活：指用物理或化學手段使病毒失去感染能力（不感染細胞），但是并不破壞病毒的抗原結構（誘導細胞融合）。

病毒表面含有的糖蛋白和一些酶能夠與細胞膜上的糖蛋白發生作用，使細胞互相凝聚，細胞膜上的蛋白質分子和脂質分子重新排布，細胞膜打開，細胞發生融合。【拓展】801動物細胞融合技術正在融合的淋巴細胞與骨髓瘤細胞7、應用：突破了有性雜交方法的局限，使遠緣雜交成為可能。6、意義：

至今，種間、屬間、科間，甚至動物和植物之間的細胞融合都已獲得成功。研究細胞遺傳、細胞免疫、腫瘤和培育生物新品種等的重要手段。為制造單克隆抗體開辟了新途徑。項目植物體細胞雜交動物細胞融合原理步驟誘導方法結果意義比較動物細胞融合與植物體細胞雜交細胞膜的流動性和植物細胞的全能性細胞膜的流動性酶解法去掉細胞壁后，誘導原生質體融合，形成雜種體細胞，再經過植物組織培養形成雜種植株分散成單個細胞后誘導細胞融合物理方法、化學方法物理方法、化學方法、滅活病毒形成雜種植株形成雜種細胞克服遠緣雜交不親和障礙課堂檢測1.關于動物細胞融合的說法錯誤的是()A.動物細胞融合后形成的具有原來兩個或多個動物細胞遺傳信息的多核細胞稱為雜交細胞B.動物細胞融合己成為研究細胞遺傳、細胞免疫、腫瘤和生物新品種培育的重要手段C.常用于誘導動物細胞融合手段有聚乙二醇、滅活的病毒、電激等D.細胞融合技術突破了有性雜交方法的局限，使遠緣雜交成為可能A2.關于動物細胞融合與植物體細胞雜交技術的比較,下列敘述合理的是 (

)A.均可使用PEG、電激或滅活病毒誘導細胞融合B.兩者都可以跨越種屬間的生殖隔離C.兩者都可以體現細胞的全能性D.在適宜條件下，均可發育成完整個體B課堂檢測121302單克隆抗體及其應用1.定義：機體受抗原刺激后產生的，能與該抗原發生特異性結合的具有免疫功能的球蛋白。2.抗體的分布：1）血清（主要）2）組織液及外分泌液（如乳汁中）體液免疫

抗體1）每個B淋巴細胞只分泌一種特異性的抗體2）體內產生的特異性抗體種類多達百萬種以上抗體1402單克隆抗體及其應用1抗原傳統抗血清（所有抗體混合）免疫

1

1234缺陷：產量低、純度低，特異性差。（不能無限增殖）動物體內1抗原注射漿細胞1抗體

1B淋巴細胞增殖分化1、傳統抗體制備方法及缺陷

1

1502單克隆抗體及其應用動物細胞融合雜交細胞動物細胞培養單克隆抗體骨髓瘤細胞

（能無限增殖）一種B淋巴細胞（只分泌一種特異性抗體）雜交瘤細胞既能迅速大量增殖，又能產生專一抗體一個極富創造力的方案1975年，米爾斯坦和柯勒1984年，諾貝爾生理學或醫學獎1602單克隆抗體及其應用動物細胞融合雜交細胞動物細胞培養單克隆抗體骨髓瘤細胞

（能無限增殖）一種B淋巴細胞（只分泌一種特異性抗體）雜交瘤細胞既能迅速大量增殖，又能產生專一抗體單克隆抗體一個B淋巴細胞細胞群抗體克隆一個極富創造力的方案1702單克隆抗體及其應用注射特定抗原從患骨髓瘤的小鼠體內取骨髓瘤細胞的培養多種已免疫B淋巴細胞骨髓瘤細胞誘導融合小鼠的脾臟中獲取2、單克隆抗體的制備過程1802單克隆抗體及其應用2雜交瘤細胞(多種)13置于選擇性培養基上培養

第一次篩選融合的細胞BB132BB瘤瘤瘤瘤√1902單克隆抗體及其應用克隆化培養抗體檢測第二次篩選(抗原-抗體雜交技術)能分泌所需抗體的雜交瘤細胞陽性細胞雜交瘤細胞(多種)2002單克隆抗體及其應用體外培養單克隆抗體體內或體外培養能分泌所需抗體的雜交瘤細胞注射到小鼠腹腔21【培養雜交瘤細胞的方法比較】項目腹腔培養體外培養優點缺點易于控制培養條件（如無需提供無菌環境等），操作簡單，成本較低規模小，產量少可大規模培養，大量生產需要人為控制培養條件，成本相對較高02單克隆抗體及其應用2302單克隆抗體及其應用動物細胞融合動物細胞培養給小鼠注射特定的抗原蛋白B淋巴細胞（免疫）骨髓瘤細胞雜交細胞雜交瘤細胞單克隆抗體能分泌所需抗體的雜交瘤細胞第一次篩選第二次篩選誘導融合選擇培養基克隆化培養，專一抗體檢驗體外培養或小鼠腹腔內增殖特異性強靈敏度高可大量制備既能大量繁殖又能產生專一抗體知識拓展：第一次篩選獲得雜交瘤細胞①細胞合成DNA有D和S兩條途徑，其中D途徑能被氨基喋呤阻斷。②人淋巴細胞中有這兩種DNA的合成途徑，但不能分裂增殖。

③鼠骨髓瘤細胞中只有D途徑，沒有S途徑，但能不斷分裂增殖。篩選出雜交瘤細胞方法？B淋巴細胞及同型融合細胞不能無限增殖，死亡骨髓瘤細胞及同型融合細胞不能無限增殖，死亡雜交瘤細胞能無限增殖，生長二、單克隆抗體及其應用培養基中加入氨基嘌呤2502單克隆抗體及其應用陽性孔抗體檢測的方法——抗原-抗體雜交法在單克隆抗體制備過程中，兩次篩選的目的和方法是不相同的。將雜交瘤細胞群稀釋，約每孔1個細胞進行培養（克隆化培養）一段時間后，檢測各孔上清液中細胞分泌的抗體上清液可與特定抗原結合的培養孔為陽性孔多孔細胞培養板抗體檢測板分泌抗體能跟特定抗原結合的細胞即為所需雜交瘤細胞總結注射特定抗原的目的是獲得什么細胞？B淋巴細胞第一次篩選的目的？如何篩選？

篩選原理是？篩選出雜交瘤細胞；選擇培養基；在選擇培養基上，未融合的親本細胞和融合的具有同種核的細胞都會死亡，只有融合的雜交瘤細胞才能生長雜交瘤細胞的特點是？既能迅速大量繁殖，又能產生抗體總結第二次篩選的目的？如何篩選？篩選出能分泌所需抗體的雜交瘤細胞；選擇抗體檢測呈____性的雜交瘤細胞用96孔板培養，在每一個孔中盡量只接種一個雜交瘤細胞的情況下，進行克隆化培養和抗體檢測抗體和抗原能特異性結合陽抗體檢測原理是？總結如何獲取大量所需的雜交瘤細胞？在體外條件下大規模培養或注射到小鼠腹腔中如何獲得單克隆抗體？從細胞培養液或小鼠腹水中獲取能準確地識別抗原的細微差異，與特定抗體發生特異性結合，并且可以大量的制備。單克隆抗體的優點單克隆抗體制備過程的原理細胞膜具有一定的流動性和細胞增殖課堂檢測B3.如圖所示為雜交瘤細胞的制備示意圖。骨髓瘤細胞由于缺乏次黃嘌呤磷酸核糖轉移酶(HGPRT-),在HAT選擇培養液中不能正常合成DNA，無法生長。下列敘述錯誤的是(

)A.可用滅活的病毒誘導B淋巴細胞與骨髓瘤細胞融合B.兩兩融合的細胞都能在HAT選擇培養液中生長C.雜交瘤細胞需進一步篩選才能用于生產D.細胞膜的流動性是細胞融合的基礎課堂檢測4.如圖2-2-6為單克隆抗體的制備流程示意圖。下列敘述正確的是(

)圖2-2-6A.甲是從已免疫的小鼠脾臟中獲得的致敏T淋巴細胞B.①表示將骨髓瘤細胞去核后進行細胞融合C.乙為融合細胞，同時具有細胞甲和骨髓瘤細胞的特性D.②表示篩選能產生特異性抗體的細胞D課堂檢測5.犬細小病毒(CPV)單克隆抗體(CpvMcAb)可抑制病毒對宿主細胞的侵染及病毒的復制，進而殺滅幼犬體內病毒。下列相關敘述，錯誤的是()A．在Cpv、McAb的制備過程中用到了動物細胞培養和動物細胞融合技術B．給幼犬注射CPV后，CPV抗體檢測呈陽性，說明發生了體液免疫反應C．經選擇性培養基篩選出來的雜交瘤細胞即可直接生產CpvMcAbD．對雜交細胞培養時，需要無菌無毒環境，且溫度、氣體環境等要適宜C單克隆抗體應用（1）診斷試劑——最廣泛應用

在受精后不久，胎盤滋養層細胞就會分泌人絨毛膜促性腺激素(HCG)，是由受孕婦女體內胎盤產生的一種糖蛋白類激素，在孕婦的尿液中大量存在。而在非妊娠婦女尿液中幾乎不含有。抗（人絨毛膜促性腺激素）單克隆抗體資料1

用抗人絨毛膜促性腺激素單克隆抗體做成的“早早孕診斷試劑盒”，在妊娠第8天就可以作出診斷，這比原來的診斷方法提前了10d左右，可以避免孕婦在不知道妊娠的情況下因服用藥物而對胎兒造成不利影響。該方法檢測的準確率在90%以上。3302單克隆抗體及其應用1、診斷試劑——最廣泛應用抗原-抗體雜交法抗人絨毛促性腺激素單克隆抗體在妊娠第8天就可以作出診斷，比原來診斷方法提前了10d左右，準確率在90﹪以上。具有準確、高效、簡易、快速特點診斷優點：3、單克隆抗體的應用3402單克隆抗體及其應用乙肝測定試劑艾滋病檢測試劑血型檢測試劑新冠病毒檢測試劑（2）用于治療疾病和運載藥物單克隆抗體應用資料2

使用高效的細胞毒素類藥物進行化療可以有效殺傷腫瘤細胞。但細胞毒素沒有特異性，在殺傷腫瘤細胞的同時還會對健康細胞造成傷害，這限制了它在臨床上的應用。抗體一藥物偶聯物（antibody-drugconjugate,ADC）通過將細胞毒素與能特異性識別腫瘤抗原的單克隆抗體結合，實現了對腫瘤細胞的選擇性殺傷。ADC通常由抗體、接頭和藥物（如細胞毒素）三部分組成，它的作用機制如下圖所示。抗體藥物接頭細胞凋亡ADC被細胞吞噬3602單克隆抗體及其應用主要用于癌癥治療。2、運載藥物優點：位置準確、療效高、副作用小單克隆抗體+接頭+藥物（如細胞毒素）=ADC（抗體-藥物偶聯物）單克隆抗體+藥物=“生物導彈”討論：ADC的抗體和藥物各具有什么作用？

抗體主要發揮靶向運輸作用，即通過特異性結合靶細胞表面的抗原，將連接的藥物輸送到靶細胞；藥物發揮治療效應，如殺傷靶細胞。3802單克隆抗體及其應用單克隆抗體+同位素（熒光標記）2、運載藥物在特定組織中成像的技術，可定位診斷腫瘤、心血管畸形等疾病。結合熒光標記的單克隆抗體藥物3、治療疾病醫藥領域，單抗類藥物占用重要地位練習與應用

一、概念檢測1.下列有關動物細胞融合與植物體細胞雜交比較的敘述，錯誤的是（

）A.它們的原理都涉及細胞膜的流動性B.都可以用電融合法或PEG融合法誘導融合C.融合前都需用纖維素酶或果膠酶處理細胞D.前者主要是為了獲得細胞產品，后者主要是為了獲得雜種植株2.科學家以SARS病毒的核衣殼蛋白為抗原，制備出了單克隆抗體。下列相關敘述正確的是（

）A.利用該單克隆抗體可以診斷是否感染SARS病毒B.體外培養單個B淋巴細胞可以獲得針對SARS病毒的單克隆抗體C.將等量B淋巴細胞和骨髓瘤細胞混合，經誘導后融合