ICS65.020.20DB13B05河北省地方標準DB13/T2828—2018馬鈴薯抗旱性鑒定技術規程河北省質量技術監督局發布DB13/T2828—2018前言本標準按照GB/T1.1-2009給出的規則起草。本標準由河北北方學院提出。本標準由河北北方學院起草。本標準主要起草人員：王燕、王寬、羅亞婷、郭三妮、王磊、馮琰、吳桂麗、祁利潘、劉暢、孫明磊、李夢、蘇云、柴瑩、尹江、龔學臣。IDB13/T2828—2018馬鈴薯抗旱性鑒定技術規程12范圍本標準規定了馬鈴薯抗旱性鑒定方法及使用規則。本標準適用于馬鈴薯品種、種質資源的抗旱性鑒定。規范性引用文件下列文件中對于本文件的應用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB18133馬鈴薯種薯DB13/T865-2007馬鈴薯有機栽培技術規程3術語和定義下列術語和定義適用于本文件。抗旱指數droughtresistanceindex（DRI）抗旱指數是指抗旱系數與某材料旱地產量之積，再除以所有材料的平均旱地產量。gradeofdroughtresistance抗旱性分五級，從強到弱依次為：1級，極強（HR，highlyresistant）；2級，強（R，resistant）；3級，中等（MR，middleresistant）；4級，弱（S，susceptible）；5級，極弱（HS，highlysusceptible）。4馬鈴薯抗旱性鑒定時期分為苗期和全生育期兩個時期，可根據工作目的，選用不同時期的鑒定結1DB13/T2828—2018種薯質量應符合GB18133的要求。為減少種薯差異，先將塊莖放于18℃條件下催芽，待芽長1cm左右，按單芽切塊，每個切塊重相等（7g±0.5g），備用。4.1.2播種將準備好的芽塊播種于口直徑15cm的塑料盆中，盆中用透水性好的沙壤土（也可以用水洗沙），播后統一灌溉，出苗后，每盆只留1個莖，每個材料種植20株，3次重復。4.1.3干旱脅迫處理干旱處理材料在出苗后40d停止灌水7～8片葉，使土壤水分保持在田間最大持水量的30%±3%，處理72h后采集樣品。4.1.4非干旱脅迫處理正常供水材料按植株正常生長需要，給以充足水分，使土壤水分保持在田間最大持水量55%±5%。4.1.5樣品采集干旱脅迫處理組脅迫72h后取處理組和對照組主莖中上部功能葉片1～2片置于冷藏箱內帶回實驗室備用。4.1.6測定指標和方法馬鈴薯生理生化指標的測定按照常規植物生理生化指標的測定方法。葉綠素含量測定（SPAD502葉綠素儀測定）；首先用（1）式求每材料各指標的抗旱系數，用（2）式或（3）式求每個材料各指標的具體隸屬函數值，用（4）式求每材料的平均隸屬函數值:抗旱系數DRC=干旱處理測定值/對照測定值………………（1）Uij=(Xij-Xmin)/(Xmax-Xmin)……………（2）或Uij=1-(Xij-Xmin)/(Xmax-Xmin)……………（3）nUij……………（4）Uij——i材料j指標的隸屬函數值；Xij——為i材料j指標的抗旱系數；Xmax——為所有材料中此指標的最大值；Xmin——為所有材料中此指標的最小值；Ui——為i材料各性狀的平均抗旱隸屬函數值。注：葉綠素、過氧化氫和過氧化物等指標的隸屬函數值計算用(2)式，丙二醛指標的隸屬函數值計算用(3)式。2DB13/T2828—20184.1.8苗期抗旱性評價標準馬鈴薯苗期抗旱性評價標準應符合表1。表1馬鈴薯苗期抗旱性評價標準級別平均抗旱隸屬函數值(Ui)Ui≥0.63抗旱性極強（HR）強（R）123450.53≤Ui<0.630.37≤Ui<0.530.28≤Ui<0.37Ui<0.28中等（MR）弱（S）極弱（HS）4.2全生育期抗旱性鑒定馬鈴薯全生育期抗旱性鑒定在旱棚內進行。4.2.1種薯要求同4.1.1。4.2.2試驗設計旱棚內用塑料布深埋1米，把旱棚面積分成相等的兩區域，一區域用于正常澆水材料種植，一區域用于干旱脅迫處理材料種植。每區域內部材料隨機排列，三次重復。干旱處理區播種后少量灌水，確保苗全苗齊。出苗后至收獲不供水。對照試驗的土壤狀況與脅迫處理的基本一致，保證馬鈴薯全生育期處于水分適宜狀態。其它管理與脅迫處理一致。YDYD………………（5）nY3DB13/T2828—2018式中：DRI——抗旱指數；YD——干旱脅迫處理產量（kg）；YW——對照處理產量（kg）；j——第j個參試品種（系）。4.2.8全生育期抗旱性評價標準馬鈴薯全生育期抗旱性評價標準見表2。表2馬鈴薯全生育期抗旱性評價標準級別抗旱指數（DRI）DRI≥1.41抗旱性極強（HR）強（R）123451.03≤DRI<1.410.51≤DRI<1.030.14≤DRI<0.51DRI≤0.14中等（MR）弱（S）極弱（HS）5以育種和生產應用為目的馬鈴薯抗旱性鑒定，應采用全生育期抗旱性鑒定的方法。以快速篩選遺傳和生理方面為目的馬鈴薯抗旱性鑒定，應采用苗期抗旱性鑒定的方法。_________________________________4DB13/T2828—2018AA附錄A（規范性附錄）過氧化物酶（POD）活性測定A.1試劑A.1.1試劑a)磷酸氫二鈉；b)c)磷酸二氫鈉；愈創木酚；d)H2O2。A.1.2試劑配制A液：0.2mol/LNa2HPO4，（Na2HPO4·2H2O35.61g或53.65gNa2HPO4·7H2O或71.7gNa2HPO4·12H2O用蒸餾水配成1000ml）B液：0.2mol/LNaH2PO4，（27.6gNaH2PO4·H2O用蒸餾水配成1000ml）31.2gNaH2PO4·2H2O磷酸緩沖液(pH6.0，0.1mol/L)：A：B=12.3:87.7，混勻稀釋至200ml磷酸緩沖液(pH7.8，0.05mol/L)：A：B=91.5:8.5，混勻稀釋至400ml稱取樣品0.5g，加入2m1磷酸緩沖液(pH7.8，0.05mol/L)，冰浴研磨，再以3m1磷酸緩沖液分兩次沖洗殘渣，一并轉入10ml離心管中。0-4℃低溫，12000rpm離心20min，離心后冷藏保存，酶液供丙二醛、POD、CAT測定用。反應混合液配制：0.lmol/L磷酸緩沖液(pH6.0)100m1，愈創木酚56μl，加熱攪拌至溶解，測定：取50μl酶液，加入3m1反應混合液，以50μl磷酸緩沖液(pH7.8)代替酶液作為空白，470nm比色并計時，每隔lmin讀一次(讀0，1，2min的OD值)，以每分鐘內OD470變化值表示酶活性大小。5DB13/T2828—2018A.3.2.3結果計算：POD活性(U.min-l.g-1FW)=△A470×Vt/0.01×W×Vs×t。式中，△A470：反應時間內吸光值的變化；Vt：提取酶液總體積(ml)；W：樣品鮮重（g）；Vs：測定時取用酶液體積(ml)；t：反應時間(min)；0.01：每分鐘增加0.01為一個酶活單位。6DB13/T2828—2018BB附錄B（規范性附錄）過氧化氫酶（CAT）活性B.1試劑B.1.1試劑a)磷酸氫二鈉；b)磷酸二氫鈉；c)H2O2。B.1.2試劑配制a)A液：0.2mol/LNa2HPO4，（Na2HPO4·2H2O35.61g或53.65gNa2HPO4·7H2O或71.7gNa2HPO4·12H2O用蒸餾水配成1000ml）b)B液：0.2mol/LNaH2PO4，（27.6gNaH2PO4·H2O用蒸餾水配成1000ml）31.2gNaH2PO4·2H2O磷酸緩沖液(pH7.8，0.05mol/L)：A：B=91.5:8.5，混勻稀釋至400ml磷酸緩沖液(pH7.0，0.05mol/L)，A：B=61.0:39.0，混勻稀釋至400ml過氧化氫酶（CAT）活性的測定反應混合液配制：0.05mol/L磷酸緩沖液(pH7.0)100m1，30%H2O2100μl，冰箱保存。測定：取50μl酶液，加入反應混合液3m1，用50μl磷酸緩沖液（pH7.8)代替酶液作為空白，-l-1結果計算：CAT活性(U.min.gFW)=△A240×Vt/0.1×W×Vs×t式中，△A240：反應時間內吸光值的變化；Vt：提取酶液總體積(ml)；W：樣品鮮重（g）；Vs：測定時取用酶液體積(ml)；t：反應時間(min)；0.01：每分鐘下降0.1為一個酶活單位。7DB13/T2828—2018CC附錄C（規范性附錄）丙二醛（MDA）含量測定C.1試劑C.1.1試劑a)磷酸氫二鈉；b)c)d)磷酸二氫鈉；硫代巴比妥酸（TBA）；三氯乙酸（TCA）；e)NaOH。C.1.2試劑配制a)A液：0.2mol/LNa2HPO4，（Na2HPO4·2H2O35.61g或53.65gNa2HPO4·7H2O或71.7gNa2HPO4·12H2O用蒸餾水配成1000ml）b)B液：0.2mol/LNaH2PO4，（27.6gNaH2PO4·H2O用蒸餾水配成1000ml）31.2gNaH2PO4·2H2O磷酸緩沖液(pH7.8，0.05mo