B30

DB1302唐 山 市 地 方 標 準DB1302/T471—201722017-12-20發布 2018-01-01實施唐山市質量技術監督局發布DB1302/T471—2017DB1302/T471—2017前 言GB/T1.1-2009本標準由唐山市農牧局歸口。本標準起草單位：唐山市畜牧水產品質量監測中心。本標準起草人：周鑫、張立田、段曉然、項愛麗、湯思凝、蒙君麗、張建雄、陰明杰、龐學良。柑橘類水果中橘紅2號的測定 液相色譜串聯質譜法范圍本標準規定了液相色譜串聯質譜法測定鮮柑橘類水果中橘紅2號。本標準適用于鮮柑橘類水果中橘紅2號殘留量的測定。規范性引用文件下列文件對于本文件的應用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單或修訂版）適用于本文件。GB/T6682 分析實驗室用水規則和試驗方法原理試樣經乙腈提取，NH2固相萃取柱凈化，濃縮定容后經液相色譜-串聯質譜儀測定，外標法定量。試劑和材料除另有說明外，所用試劑均為分析純，實驗用水為GB/T6682規定的一級水。試劑甲醇：色譜純。乙腈：色譜純。甲酸：色譜純。乙酸乙酯：色譜純。氯化鈉。試劑配制乙酸乙酯甲醇溶液：（乙酸乙酯:甲醇=9:1，V:V）4.2.270%乙腈溶液：（乙腈:水=7:3，V:V）標準品橘紅2號標準品（CitrusRed2，CAS：6358-53-8），純度≥99%。標準溶液配制橘紅22號標準品約100.0110mL℃保存。橘紅2號標準中間液：用甲醇稀釋橘紅2號標準儲備液至10μg/mL。橘紅2號標準工作液：用甲醇稀釋橘紅2號標準中間液至100ng/mL。材料NH2固相萃取柱（500mg，6mL）或相當者。濾膜：0.22μm。儀器和設備液相色譜-質譜/質譜儀（LC-MS/MS）：配有電噴霧離子源(ESI)。5.2分析天平：感量為0.00001g和0.01g。離心機：轉速不低于6000r/min。固相萃取裝置。旋轉蒸發儀。渦旋混合器。組織搗碎機。具塞塑料離心管：50mL。試樣制備取適量新鮮的樣品，去葉、梗后均質處理，-18℃冷凍保存，備用。分析步驟準確稱取4g（精確至0.01g）試樣，置于50mL聚丙烯具塞離心管中，加入20mL乙腈，渦旋振蕩1min，加入4g306000r/min離心10min10.00mL℃旋轉蒸發至近干，加入乙酸乙酯甲醇溶液(4.2.1)5mL，充分混合溶解。凈化用5mL甲醇活化NH2固相萃取柱，將提取液(7.1)過柱，用乙酸乙酯甲醇溶液(4.2.1)淋洗固相萃取柱兩次，每次540mL70%0.22μm濾膜，待上機。基質標準溶液的制備取陰性柑橘樣品按照7.1、7.2的操作步驟進行，用最終所得的定容液配制基質標準溶液。測定條件液相色譜參考條件a)色譜柱：ShimadzuODS-C18，100mm×2.1mm，1.6μm，或者相當；b)柱溫：40℃；進樣量：5μL；流動相：A，0.1%甲酸水溶液；B，乙腈；流動相條件：流速0.3mL/min，洗脫程序見表1。表1液相色譜梯度洗脫條件時間(min)0.00.82.02.52.62.80.1%甲酸水溶液（%）3030003030乙腈（%）70701001007070質譜參考條件離子源：電噴霧離子源（ESI）；掃描方式：正離子掃描；檢測方式：多反應監測（MRM）；電噴霧電壓（IS）：5000v；氣簾氣：20psi；霧化氣：40psi；輔助氣：40psi；霧化溫度：500℃；橘紅2號的質譜參數見表2。表2橘紅2號質譜參數化合物名稱母離子（m/z）子離子（m/z）去簇電壓（DP）/V碰撞能量（CE）/V（EP）/V出口電位（CXP）/V橘紅2號309.3153.3*277.9969623171010812“*”表示定量子離子液相色譜—串聯質譜測定定性確證被測化合物選擇1個母離子，2個子離子，在相同實驗條件下，樣品中待測物質的保留時間與混合基質標準校準溶液中對應組分的保留時間偏差在±2.5%之內；且樣品譜圖中組分的相對離子豐度與濃度接近的基質3表3定性確證——相對離子豐度的最大允許偏差相對離子豐度KK>5020<K<5010<K<20K<10允許最大偏差±20±25±30±50定量測定2平行試驗按以上步驟，對同一試樣進行平行試驗測定。空白試驗不稱取樣品，其余均按照試樣步驟進行。回收率試驗陰性樣品中添加標準溶液，按照7.1和7.2操作，測定后計算樣品添加的回收率。結果計算橘紅2號的測定結果按式（1）計算：XcVf

……………（1）m 式中：X——試樣中被測組分殘留量，單位為微克每千克（μg/kg）；c——從標準工作曲線得到的被測組分溶液濃度，單位為納克每毫升（ng/mL）；V——樣品溶液最終定容體積，單位為毫升（mL）；f——稀釋因子；m——稱樣量，單位為克（g）；1000——單位轉換。計算結果應扣除空白值，保留3位有效數字。靈敏度、準確度和精密度靈敏度橘紅2號在鮮柑橘類水果中的檢出限為0.5μg/kg。回收率和精密度見表4。

表4橘紅2號在鮮柑橘類水果中的平均回收率和精密度（n=6）化合物名稱添加濃度/（μg/kg）回收率/%精密度/%187.55.99橘紅2號CitrusRed21091.13.022090.14.9