玉米穗腐病抗源鑒定及評價技術規程2024-12-30發布2025-01-29實施黑龍江省市場監督管理局發布本文件按照GB/T1.1—2020《標準化工作導則第1部分：標準化文件的結構和起草規則》的規定起草。請注意本文件的某些內容可能涉及專利。本文件的發布機構不承擔識別專利的責任。本文件由黑龍江省農業農村廳提出并歸口。本文件起草單位：黑龍江省農業科學院玉米研究所、東北農業大學、中國農業科學院作本文件主要起草人：扈光輝、楊劍飛、樸琳、李永剛、李春輝、李國良、王明泉、付立新、胡少新、王志國。3DB23/T3896—2024本文件規定了玉米穗腐病抗源鑒定及評價技術的接種體制備、抗病性鑒定圃設置、接種、病情調查和抗病性評價等要求。本文件適用于玉米種質資源對玉米鐮孢穗腐病的田間抗性鑒定和評價。2規范性引用文件下列文件中的內容通過文中的規范性引用而構成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅注日期對應的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改單)適用于本文件。GB4404.1糧食作物種子第1部分：禾谷類NY/T1248.8玉米抗病蟲性鑒定技術規范第8部分：鐮孢穗腐病DB23/T2154玉米機械化籽粒收獲栽培技術規程3術語和定義下列術語和定義適用于本文件。鐮孢(F.subglutinans)、層出鐮孢(F.proliferatum)穗腐病混合菌進行人工接種，鑒定挖掘抗穗腐病種質資源。4接種體制備4.1鐮孢病原菌分離與致病力測定4.1.1病原菌分離取發生穗腐病的玉米籽粒，置于75%的酒精中浸泡2s~3s,取出后置于濃度為1.5%的次氯酸鈉中浸泡3min~5min,再經無菌水換洗3次，晾干后用無菌剪刀從中間剪開后將其中一塊組織轉移至PDA平板培養基上，置于25℃~27℃環境中，黑暗培養3d后挑取病原菌至試管中保存。4.1.2致病力測定采用根部接種法根據柯赫氏法則驗證所分離的鐮孢菌為穗腐病原菌，并確定其具有一定的致病能力。4團鐮孢、層出鐮孢。具體鑒定方法按NY/T1248.8的規定執行。4.3病原菌的配制將高粱粒(125g)在沸水中煮20min,然后轉移到250mL三角瓶中，121℃濕熱滅菌按照NY/T1248.8提供的方法制備馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養基(Potatodextroseagar將禾谷鐮孢轉移至PDA培養基上培養，挑取3個~5個擴繁的禾谷鐮孢的菌碟轉移到0.9%～1.5%的無菌鹽水中，每100mL三角瓶裝液量為15ml,28℃~30℃、可見光1501x~2001x條件下搖床震蕩(150rpm～180rpm)培養96h~120h,雙層紗布過濾后用血球計數4.3.3擬輪枝鐮孢孢子懸浮液的配制將PDA培養基擴繁7d后的擬輪枝鐮孢5個菌碟轉移至裝有無菌高粱粒的三角瓶中，并在26℃、避光條件下培養5d,每天搖晃一次三角瓶，然后用無菌水沖洗帶菌高粱粒，雙4.3.4亞粘團鐮孢孢子懸浮液的配制將PDA培養基擴繁7d后的亞粘團鐮孢5個菌碟轉移至裝有無菌高粱粒的三角瓶中，并在26℃、避光條件下培養5d,每天搖晃一次三角瓶，然后用無菌水沖洗帶菌高粱粒，雙4.3.5層出鐮孢孢子懸浮液的配制將PDA培養基擴繁7d后的層出鐮孢5個菌碟轉移至裝有無菌高粱粒的三角瓶中，并在26℃、避光條件下培養5d,每天搖晃一次三角瓶，然后用無菌水沖洗帶菌高粱粒，雙層4.3.6混合孢子懸浮液配制懸浮液混合，4℃條件下可保存48h。鑒定種質資源按照晚熟、中熟、早熟3個熟期分區種植，各列，每隔30行鑒定材料設置1組已知同熟期抗病、感病對55.2鑒定材料播種期。播種時期按DB23/T2154規定執行。鑒定材料種子不應進行包衣處理，播種方式采用人工點播，6接種應在玉米雌穗吐絲后3d~5d或花絲長度達5cm~10cm時進行。接種采用花絲通道法，每株選擇上部第1個果穗，利用可定量的連續注射器，在果穗花7.2調查方法…………6ERSA——穗腐病平均病情級別(Earrotscoreonaverage);ERS;——第i個接種果穗的病情級別(Ei——接種果穗的順序編碼；n——每份鑒定材料的接種果穗總數；計算保留1位小數，鑒定材料的抗性評價方法按附錄表A.3執行。8.2有效性判別當感病對照材料抗性鑒定為“感”時，該批次鑒定結果視為有效。8.3重復鑒定當鑒定材料初次鑒定結果表現為“抗”和“高抗”,應在第二年進行重復鑒定。8.4抗病性結果判定對初次鑒定為“抗”以下級別的資源，以當年病情級數作為判定依據；對初次鑒定“抗”和“高抗”資源，需將初次鑒定結果同重復鑒定結果進行比較，以最高病情級別作為評價結按附錄表A.3的標準進行抗性評價，將調查和評價結果錄入附錄表A.4。9鑒定檔案應建立鑒定檔案，內容包括：病原菌采集、分離、鑒定、接種體的配制、鑒定材料名稱、接種時間、調查時間、接種總株數、各病情級別發病株數和抗病性評價。附錄A(資料性)熟期抗病對照感病對照晚熟區中熟區早熟區13579平均病情級別高抗Highlyresistant(HR)抗Resi