③大多數單倍體植株可作為進行體細胞誘變育種和研究遺傳突變的理想材料。(P40)（3）為什么大多數單倍體植株可作為進行體細胞誘變育種和研究遺傳突變的理想材料？大多數單倍體植株的細胞中只含一套染色體，染色體加倍后得到的植株的隱性性狀容易顯現。(P40)2．突變體的利用（1）過程：（2）誘變處理對象：一般為愈傷組織。（3）產生原因：在植物的組織培養過程中，易受培養條件和誘變因素(如射線、化學物質等)的影響而產生突變。(P41)（4）原理：基因突變和植物細胞的全能性。（5）誘變育種的缺點：突變具有不定向性和低頻性，因此需大量處理實驗材料。（6）誘變育種的優點：通過人工誘變提高愈傷組織的突變率，從而篩選獲得抗病、抗鹽、高產、優質的新品種，加快育種進程。(P41)(7)利用：篩選出對人們有用的突變體，進而培育成新品種。(P41)（三）細胞產物的工廠化生產1.代謝產物的分類a.初生代謝產物：初生代謝是生物生長和生存所必需的代謝活動；產物：糖類、脂質、蛋白質、核酸等(P41相關信息)b.次生代謝產物：植物代謝會產生一些一般認為不是生物生長所必需的，一般在特定組織或器官中，并在一定的環境和時間條件下才進行。產物：一類小分子有機化合物（如酚類、萜類、含氮化合物等)(P41相關信息)2.細胞產物的工廠化生產的目標產物：次生代謝產物。(P41)3.次生代謝物作用：在植物抗病、抗蟲等方面發揮作用，也是很多藥物、香料和色素等的重要來源。(P41)4.生產技術手段：植物組織培養技術（在離體條件下對單個植物細胞或細胞團進行培養使其增殖的技術）。5.過程：6.細胞產物工廠化生產主要利用的是哪種結構？愈傷組織。7.該過程中是否需要培養得到完整植株？一般不需要。8.優點：不占用耕地，幾乎不受季節、天氣等的限制，對于社會、經濟、環境保護具有重要意義；生產速度快。(P41)9．實例：利用紫草細胞的組織培養生產的紫草寧具有抗菌、消炎和抗腫瘤等活性。利用紅豆杉細胞的組織培養生產的紫杉醇具有高抗癌活性。(P41)▉考點03動物細胞培養動物細胞工程動物細胞工程包括：動物細胞培養、動物細胞融合、動物細胞核移植。(P43)一、動物細胞培養1.動物細胞培養概念：指從動物體中取出相關的組織，將它分散成單個細胞，然后在適宜的培養條件下，讓這些細胞生長和增殖的技術。(P43)2.動物細胞培養的原理：細胞增殖（有絲分裂）。3.動物細胞培養的地位：動物細胞工程的基礎。(P43)4.動物細胞培養的關鍵操作：原代培養和傳代培養。(P45)（一）動物細胞培養的條件1.動物細胞培養的條件：營養條件、無菌、無毒的環境、適宜的溫度、pH和滲透壓、適宜的氣體環境。(P43)2.營養物質主要包括：糖類、氨基酸、無機鹽、維生素等。(P43)3.未知營養條件：使用合成培養基時，通常需加入血清等一些天然成分。(P44)4.血清的作用：提供尚未全部研究清楚的細胞所需的營養物質。(P44)5.動物細胞培養的培養基的物理性質：培養動物細胞一般使用液體培養基，也稱為培養液。(P44)6.動物細胞利用的營養物質包括蔗糖和淀粉嗎？不包括。7.保證無菌、無毒環境的具體措施(P44)（1）對培養液和所有培養用具進行滅菌處理。（2）在無菌環境下進行操作。（3）還需要定期更換培養液。8.培養液的滅菌方法：濕熱滅菌法（高壓蒸汽滅菌）。培養用具的滅菌方法：濕熱滅菌法（+烘干）或干熱滅菌法。9.怎樣保證無菌操作？對操作空間、操作者衣著和手進行清潔和消毒，保證所有操作均在在超凈工作臺并在酒精燈火焰旁進行。10.為什么培養液需要定期更換？(P44)以便清除代謝物，防止細胞代謝物積累對細胞自身造成危害。11.如何防止培養過程中的微生物污染？在細胞培養液中添加一定量的抗生素。12.哺乳動物細胞培養的溫度多以36.5±0.5℃為宜。(P44)13.多數動物細胞生存的適宜pH為7.2-7.4。(P44)14.維持適宜滲透壓的目的維持細胞正常的形態和功能。15.動物細胞培養所需氣體主要有O2和CO2。(P44)16.O2的作用：O2是細胞代謝所必需的。CO2的作用：CO2的主要作用維持培養液的pH。(P44)17.培養容器：通常采用培養皿或松蓋培養瓶。(P44圖)培養儀器：含有95%空氣和5%CO2的混合氣體的CO2培養箱。(P44)18.因此動物細胞培養的氣體環境為95%空氣和5%CO2。(P44)（二）動物細胞培養的過程取動物組織制成細胞懸液轉入培養液原代培養分瓶傳代培養1.動物細胞培養取材：動物胚胎或幼齡動物的組織、器官。取材原因：細胞分化程度低，增殖能力強，容易培養。2.制成細胞懸液的步驟(P44)（1）將組織分散成單個細胞。（2）用培養液將細胞制成細胞懸液。3.將組織分散成單個細胞的原因（1）從動物體取出的成塊組織中，細胞與細胞靠在一起，彼此限制了生長和增殖；（2）能使細胞與培養液充分接觸，更易進行物質交換。4.將組織分散成單個細胞的方法(1)機械法;(2)用胰蛋白酶、膠原蛋白酶等處理一段時間。5.用胰蛋白酶分散細胞，可以說明什么問題？動物細胞間的物質主要是蛋白質。6.可以用胃蛋白酶分散細胞嗎？不可以。為什么？胃蛋白酶作用的適宜pH約為2，當pH大于6時，胃蛋白酶就會失去活性，多數動物細胞培養的適宜pH為7.2-7.4，胃蛋白酶在此環境中沒有活性，所以用胃蛋白酶不行。7.酶解法較溫和，一定不會對動物細胞造成損傷嗎？不是，使用胰蛋白酶時，要控制好作用時間，因為胰蛋白酶不僅能分解細胞間的蛋白質，長時間作用還會分解細胞膜蛋白等，對細胞造成損傷。8.體外培養的動物細胞的兩大類：(P44)（1）能夠懸浮在培養液中生長增殖。（2）大多數需要貼附于某些基質表面才能生長增殖（細胞貼壁）。9.兩類細胞的生長特點(P44)（1）懸浮生長類：會因細胞密度過大、有害代謝物積累和培養液中營養物質缺乏等因素而分裂受阻。（2）貼壁生長類：除會因細胞密度過大、有害代謝物積累和培養液中營養物質缺乏等因素而分裂受阻外，還會發生接觸抑制。10.“細胞增殖到互相接觸的時候，糖蛋白識別了這種信息，就會使細胞停止繼續繁殖，出現接觸抑制的現象”試結合上述解釋，舉例說明哪種細胞最可能無接觸抑制現象，并闡述原因：癌細胞，癌細胞的細胞膜上糖蛋白等物質減少。11．原代培養：通常將分瓶之前的細胞培養，即指動物組織經處理后的初次培養。(P45)12.原代培養的具體做法：將初次制備好的細胞懸液放入培養皿或培養瓶內，置于適宜環境中培養。(P44)13．傳代培養：將分瓶后的細胞培養。(P45)14.分瓶傳代培養的具體做法(P45)（1）收集細胞a.懸浮生長類：直接用離心法收集。b.貼壁生長類：重新用胰蛋白酶等處理，使之分散成單個細胞，然后再用離心法收集。（2）將收集的細胞制成細胞懸液，分瓶培養。15.為什么動物細胞培養中需分瓶進行傳代培養？(P44)細胞會因細胞密度過大、有害代謝物積累和培養液中營養物質缺乏等因素而分裂受阻，貼壁細胞還會發生接觸抑制現象。16.離心的作用：在沉淀中得到細胞，同時去掉上清液中的胰蛋白酶。17.動物細胞培養技術有沒有體現動物細胞的全能性？未體現，動物細胞培養只是細胞增殖的過程。思考：正常細胞能否一直傳代培養下去？不可以；細胞的傳代培養一般傳至10代后就不易傳下去，這時細胞能保持細胞正常的二倍體核型；傳至10-50代左右時，增殖會逐漸緩慢，以至于完全停止，這時部分細胞的細胞核型可能會發生變化，這一階段的細胞稱為細胞株;繼續傳代培養時，少部分細胞會克服細胞壽命的自然極限，獲得不死性，這些細胞已經發生了突變，正在朝著等同于癌細胞的方向發展，這一階段的細胞稱為細胞系，細胞系的遺傳物質一定改變了。（三）干細胞的培養及其應用1．干細胞功能：在一定條件下，可以分化成其他類型的細胞。(P46)2．干細胞的分布：早期胚胎、骨髓和臍帶血等多種組織和器官中。(P46)3．干細胞的種類：包括胚胎干細胞、成體干細胞和誘導多能干細胞等。(P46)4.胚胎干細胞（簡稱ES細胞）(P46)（1）分布：存在于早期胚胎中。（2）特點：具有分化為成年動物體內的任何一種類型的細胞，并進一步形成機體的所有組織和器官甚至個體的潛能。5.成體干細胞(P46)（1）分布：存在于成體組織或器官內中。（2）常見類別：包括骨髓中的造血干細胞、神經系統中的神經干細胞、睪丸中的精原干細胞等；（3）特點：一般認為，成體干細胞具有組織特異性，只能分化成特定的細胞或組織，不具有發育成完整個體的能力。（4）發現最早、研究最多的、應用最成熟的實例造血干細胞，主要存在于成體的骨髓、外周血和臍帶血中。6.誘導多能干細胞概念：通過體外誘導成纖維細胞，獲得類似胚胎干細胞的一種細胞，稱為誘導多能干細胞，簡稱iPS細胞。(P46)7.誘導多能干細胞優點：(P46)（1）誘導過程無需破壞胚胎。（2）iPS細胞可以來源于病人自身的體細胞，將它移植回病人體內后，理論上可以避免免疫排斥反應。8.干細胞的應用：有著自我更新能力及分化潛能的干細胞，與組織、器官的發育、再生和修復等密切相關。(P46)9.干細胞應用實例(P46)（1）造血干細胞可以治療白血病及一些惡性腫瘤放療或化療后引起的造血系統、免疫系統功能障礙等疾病。（2）神經干細胞可以治療神經組織損傷和神經系統退行性疾病（如帕金森病、阿爾茨海默病等）。（3）誘導多能干細胞（iPS細胞）可治療小鼠的鐮狀細胞貧血癥，在治療阿爾茲海默病、心血管疾病等領域的研究也取得了新進展。9.干細胞可以治療某些頑癥的原理是什么？干細胞可以被誘導分化形成新的組織細胞，經移植可使壞死或退化部位得以修復并恢復正常功能。10.胚胎干細胞的局限性：必須從胚胎中獲取，涉及倫理問題。(P46)11.普遍認為iPS細胞的應用前景優于胚胎干細胞。(P46)12.iPS細胞用于治療人類疾病過程(P47)取成纖維細胞轉入相關因子細胞轉化為iPS細胞誘導iPS細胞定向分化為多種組織細胞移植回病人體內。13.制備iPS細胞的其他方法(P46相關信息)（1）借助載體將特定基因導入細胞中誘導形成iPS細胞。（2）直接將特定蛋白導入受體細胞中誘導形成iPS細胞。（3）用小分子化合物來誘導形成iPS細胞誘導形成iPS細胞。14.iPS細胞的來源：成纖維細胞以及已分化的T細胞、B細胞。(P46相關信息)15.如果想將iPS細胞用于緊急情況，應該提前采取什么措施？(P47拓展應用)建立iPS細胞庫（HLA多態性豐富的iPS細胞庫），可以為需要的人找到HLA匹配度較高的iPS細胞。16.如果誘導iPS細胞定向分化為生殖細胞的技術發展成熟，該技術可能會有哪些應用？(P47拓展應用)可以用來治療不孕癥，可以用來進行瀕危物種的克隆，可以對獲得的生殖細胞進行轉基因操作，再經過受精、胚胎發育等過程來獲得轉基因動物。▉考點04動物細胞融合技術與單克隆抗體（一）動物細胞融合技術1．動物細胞融合技術概念：使兩個或多個動物細胞結合形成一個細胞的技術。(P48)2.誘導的結果：形成的雜交細胞，具有原來兩個或多個細胞的遺傳信息。(P48)3.誘導的原理：細胞膜具有一定的流動性。4．誘導方法：PEG融合法、電融合法和滅活病毒誘導法等。其中，滅活病毒誘導法是動物細胞融合特有的誘導融合方法。(P48)5．意義：突破了有性雜交的局限，使遠緣雜交成為可能。(P48)6.“滅活病毒”中滅活的具體含義是什么？(P48相關信息)用物理或化學手段使病毒或細菌失去感染能力，但并不破壞它們的抗原結構。7.滅活病毒誘導細胞融合的原理是什么？(P48相關信息)病毒表面含有的糖蛋白和一些酶能夠與細胞膜上的糖蛋白發生作用，使細胞互相凝聚，細胞膜上的蛋白質分子和脂質分子重新排布，細胞膜打開，細胞發生融合。8.融合實質及完成的標志：細胞核的融合。9．動物細胞融合技術的應用(P48)(1)細胞融合技術成為研究細胞遺傳、細胞免疫、腫瘤和培育生物新品種等的重要手段。(2)利用動物細胞融合技術發展起來的雜交瘤技術，為制備單克隆抗體開辟了新途徑。（二）單克隆抗體及其應用1.早期獲得抗體的方法：向動物體內反復注射某種抗原，使動物產生抗體，然后從動物血清中分離所需抗體。(P49)2.上述抗體的缺點：產量低、純度低、特異性差。(P49)3.B細胞的特點（優點和局限性）：能產生單一的特異性抗體，但不能無限增殖。(P49)4.癌細胞的特點：能在體外大量增殖，但不能產生抗體。5.雜交瘤細胞特點：B淋巴細胞與骨髓瘤細胞融合得到的雜交瘤細胞，既能無限增殖又能產生大量特定抗體。(P49)6.米爾斯坦和科勒由于發明了單克隆抗體的制備技術，于1984年獲得了諾貝爾生理學或醫學獎。(P49)7．制備過程：8.實驗最初應如何處理小鼠？(P48)注射特定的抗原，用特定的抗原對小鼠進行免疫。9.上述操作目的是為了獲得抗體嗎？不是。(P48)10.注射特定抗原的目的：用特定的抗原對小鼠進行免疫，并從該小鼠的脾中得到能產生特定抗體的B淋巴細胞（獲得能產生特定抗體的B淋巴細胞）。(P48)11.誘導融合的方法：PEG融合法、電融合法、滅活病毒誘導法（動物細胞特有）。(P48)12.誘導融合后，能得到幾種細胞？（融合只考慮兩兩融合）（1）未融合的親本細胞（B淋巴細胞、骨髓瘤細胞）。（2）融合的具有同種核的細胞（B-B細胞、瘤-瘤細胞）。（3）融合的雜交瘤細胞。13.第一次篩選(P48)（1）如何篩選（篩選方法）：用特定的選擇培養基進行篩選。（2）篩選原理：在選擇培養基上，未融合的親本細胞和融合的具有同種核的細胞都會死亡，只有融合的雜交瘤細胞才能生長。（3）獲得的雜交瘤細胞的特點：既能迅速大量繁殖，又能產生抗體。此時，抗體不是所需的特定抗體。（4）得到的該雜交瘤細胞一定是所需的嗎？雜交瘤細胞并不純，因為從脾臟獲得的B淋巴細胞不純（既有未免疫的B淋巴細胞，又有能產其他抗體的B淋巴細胞，以及能產所需抗體的B淋巴細胞），因此要進行第二次篩選。14.第二次篩選(P49)（1）如何篩選（篩選方法）：用96孔板培養，在每一個孔中盡量只接種一個雜交瘤細胞的情況下，進行克隆化培養和抗體檢測（一般進行多次篩選）。（2）獲得的雜交瘤細胞的特點：既能迅速大量繁殖，又能分泌所需抗體。（3）選擇抗體檢測呈陽性的雜交瘤細胞，即分泌的抗體能與特定的抗原結合。（4）抗體檢測原理：抗原和抗體能夠特異性結合(分子水平的檢測）。15.第一次篩選的目的：篩選獲得雜交瘤細胞。第二次篩選的目的：獲得足夠數量的能分泌所需抗體的雜交瘤細胞。16.如何對所需雜交瘤細胞大規模培養(P49)在體外條件下大規模培養（接種于培養液中）或注射到小鼠腹腔內增殖。17.如何獲取單克隆抗體（1）體外培養：從細胞培養液中獲取。（2）小鼠腹腔內培養：從小鼠腹水中獲取。18.單克隆抗體制備的過程中涉及的原理：細胞膜具有一定的流動性、細胞增殖。19.單克隆抗體制備的過程中應用到的技術：動物細胞融合、動物細胞培養。20．單克隆抗體的優點：能準確地識別抗原的細微差異，與特定抗原發生特異性結合，并且可以大量制備。(P50)21．單克隆抗體的應用(P50)(1)作為診斷試劑，具有準確、高效、簡易、快速的優點。(2)用于治療疾病和運載藥物。22.用作診斷試劑的原理：單克隆抗體能準確地識別抗原的細微差異，與特定抗原發生特異性結合。(P50)23.用作診斷試劑的實例：多種疾病的診斷和病原體鑒定。(P50)24.運載藥物(P50)（1）實例——ADC：與藥物結合，制成抗體-藥物偶聯物（ADC），殺傷腫瘤細胞；ADC通常由抗體、接頭和藥物三部分組成。(P50)（2）原理：通過將藥物與能特異性識別腫瘤細胞抗原的單克隆抗體結合，實現對腫瘤細胞的選擇性殺傷。(P50)發揮殺傷作用的為放射性同位素、化學藥物或細胞毒素；單克隆抗體作用為靶向運輸作用；（3）優點：靶點清楚、毒副作用?。ú粫】导毎斐蓚Γ?。補充了解——HAT培養基的篩選原理1.細胞合成DNA有兩條途徑，正常細胞內兩種途徑都有，若全合成途徑被阻斷，可以通過補救合成途徑合成DNA；2.骨髓瘤細胞不能合成轉化酶和激酶，因此只能進行全合成途徑；3.全合成途徑能被氨基喋呤（A）阻斷；4.次黃嘌呤（H）、胸腺嘧啶（T）是補救合成途徑的原料；5.無增殖能力的細胞在培養基中存活僅5-7天，細胞的多聚體也容易死去；思考：將誘導融合后的細胞接種于HAT培養基后兩周，則細胞生存狀況及原因為：B細胞和B-B細胞死亡；能進行補救合成途徑，但是無增殖能力。骨髓瘤細胞和瘤-瘤細胞死亡；兩種途徑均無法進行，無法合成DNA，無法增殖。雜交瘤細胞存活；能進行補救合成途徑，能合成DNA，可大量增殖。補充了解——不同水平的克隆及實例1.分子水平--DNA復制、PCR技術2.細胞水平--動物細胞培養3.個體水平--植物組織培養、動物細胞核移植▉考點05動物體細胞核移植技術和克隆動物1.動物細胞核移植技術概念：將動物一個細胞的細胞核移入去核的卵母細胞中，使這個重新組合的細胞發育成新胚胎，繼而發育成動物個體的技術。(P52)2.克隆動物：用核移植的方法得到的動物。(P52)3.動物細胞核移植技術原理：動物細胞核的全能性、細胞膜具有一定的流動性。培育多利羊的原理：動物體細胞核的全能性、細胞膜具有一定的流動性。4.動物細胞核移植技術生殖方式：無性生殖。5．哺乳動物核移植分類：胚胎細胞核移植和體細胞核移植。兩者中難度較高的是體細胞核移植。(P52)6.動物體細胞核移植的難度明顯高于胚胎細胞核移植；為什么？(P52)動物胚胎細胞分化程度低，表現全能性相對容易，動物體細胞分化程度高，表現全能性十分困難。7.非人靈長類動物體細胞核移植的困難原因(P52)（1）供體細胞的細胞核在去核卵母細胞中不能完全恢復其分化前的功能狀態，這導致了胚胎發育率低；（2）對非人靈長類動物胚胎進行操作的技術尚不完善。（一）體細胞核移植的過程1.采集的卵母細胞應培養至MⅡ期（減數分裂Ⅱ中期）(P53)2.選擇MⅡ期卵母細胞的原因（1）含有促進細胞核表現全能性的物質和營養條件。（2）細胞體積大，易于操作。3.卵母細胞去核的方法：顯微操作（去核）法。(P53)*除此之外，還有梯度離心、紫外線短時間照射和化學物質處理等方法。*這些方法是在沒有穿透卵母細胞透明帶的情況下去核或使其中的DNA變性。4.“去核”去的是什么？去除的為紡錘體-染色體復合物。注意：去核時，由于MⅡ期卵母細胞核的位置靠近第一極體，一般用微型吸管一并吸出細胞核和第一極體。5.去核的原因：使核移植得到的胚胎或動物核內遺傳物質全部來自有重要利用價值的動物。6.與直接注入核相比，將供體細胞注入卵母細胞的優點：對卵母細胞損傷較小。注入位置：將供體細胞注入去核卵母細胞的透明帶內（卵細胞膜和透明帶之間）。7.誘導供體細胞和去核卵母細胞融合的方法：電融合法。8.融合的結果：供體核進入卵母細胞，形成重構胚。(P53)9.重構胚概念：人工重新構建的胚胎，具有發育成完整個體的能力。(P53相關信息)10.激活重構胚的方法(P53)（1）物理方法：電刺激。（2）化學方法：Ca2+載體、乙醇和蛋白酶合成抑制。11.以上方法處理重構胚的目的：激活重構胚，使其完成細胞分裂和發育過程。(P53)12.實驗結論：證明了動物已分化的體細胞的細胞核具有全能性。13.實驗結果：生出與供體奶牛遺傳物質基本相同的犢牛14.新生犢牛的細胞核遺傳物質來自供體奶牛。新生犢牛的細胞質遺傳物質來自去核卵母細胞。15.新生牛的性別與供體奶牛一致。16.通過動物細胞核移植獲得奶牛的過程中涉及的技術：（1）動物細胞核移植。（2）動物細胞培養。（3）動物細胞融合。（4）早期胚胎培養。（5）胚胎移植。注意：操作為“將供體細胞注入去核卵母細胞”時，才涉及該技術。17.用上述技術培育的克隆動物，是對體細胞供體動物進行了100%的復制嗎？不是。18.為什么克隆動物不是對體細胞供體動物進行了100%的復制*？（1）克隆動物絕大部分DNA來自供體動物的細胞核，但線粒體中的DNA（細胞質中的DNA）同時來自供體細胞和受體卵母細胞。（2）性狀是基因與環境共同作用的結果，克隆動物所處的環境與核供體細胞生活的環境不會完全相同。（3）克隆動物在個體發育過程中有可能發生基因突變、染色體變異等可遺傳變異。（二）體細胞核移植技術的應用前景及存在的問題1．應用前景(1)畜牧生產方面：加速家畜遺傳改良進程，促進優良畜群繁育。(P54)(2)醫藥衛生領域(P54)①轉基因克隆動物作為生物反應器，生產珍貴的醫用蛋白。②轉基因克隆動物的細胞、組織和器官可作為異種移植的供體。③以患者作為供體培育的人核移植胚胎干細胞，經過誘導分化能形成相應的細胞、組織或器官，將它們移植給患者時可以避免免疫排斥反應。(3)保護瀕危物種方面：保護瀕危物種，增加瀕危動物的存活數量。(P54)(4)科研(P54)①研究克隆動物可使人類更深入地了解胚胎發育及衰老過程。②克隆一批遺傳背景相同的動物，可以通過它們之間的對比來分析致病基因。③克隆特定疾病模型的動物，還能為研究該疾病機制和開發相應的藥物提供幫助。2．存在問題(P54)(1)體細胞核移植技術的成功率非常低。(2)各個技術環節有待進一步改進。(3)克隆動物存在健康問題，表現出遺傳和生理缺陷等。▉考點06胚胎工程一、胚胎工程的理論基礎1.胚胎工程概念：對生殖細胞、受精卵或早期胚胎細胞進行多種顯微操作和處理，然后將獲得的胚胎移植到雌性動物體內生產后代，以滿足人類的各種需求。(P56)2．胚胎工程技術(1)操作對象：動物生殖細胞、受精卵、早期胚胎細胞；(2)技術種類：體外受精、胚胎移植、胚胎分割；(P56)(3)特點：獲得的胚胎需移植到雌性動物體內生產后代；(4)理論基礎：哺乳動物受精和早期胚胎發育的規律。(P56)（一）受精1．受精概念：精子與卵子結合形成合子(即受精卵)的過程。(P56)2．受精場所：在自然條件下，哺乳動物的受精在輸卵管內完成。(P56)3．受精過程：包括受精前的準備階段和受精階段；前者又包括精子獲能和卵子的準備。4.精子獲能(1)概念：剛剛排出的精子不能立即與卵子受精，必須在相應的生理變化發生雌性動物的生殖道后，才能獲得受精能力，這一生理現象稱為“精子獲能”。(P56)*獲能的能指的是“受精能力”而不是“能量”。(2)使精子獲能的兩種方法:(P56相關信息)a.直接利用雌性動物生殖道使精子獲能b.將精子培養在人工配制的獲能液中使其獲能*獲能液的成分因動物種類不同而有所差異；*獲能液常見有效成分有肝素、Ca2+載體等。(3)研究精子獲能機制的意義:實現了各種哺乳動物在體外條件下的獲能，為體外受精技術的建立奠定了基礎。(P57)5.卵子的準備(1)卵子一般在排出2-3h后才能被精子穿入。(P57)(2)動物排出的卵子成熟程度不同。(P57)有的可能是初級卵母細胞，如馬、犬等；有的可能是次級卵母細胞，如豬、羊等。(3)卵子成熟的場所:排出的卵子都要在輸卵管內進一步成熟。(4)卵子具備與精子受精能力的時期MⅡ期。(P57)6.受精階段過程:（1）精子釋放多種酶溶解卵細胞膜外的一些結構，精子穿越透明帶。(P57)（2）透明帶反應：阻止多精入卵的第一道屏障。(P57)（3）透明帶反應具體表現：精子觸及卵細胞膜的瞬間，透明帶會迅速發生生理反應，阻止后來的精子進入透明帶。(P57)（4）透明帶反應發生時間：精子觸及卵細胞膜的瞬間。(P57)（5）精子入卵：（卵細胞膜反應：阻止多精入卵的第二道屏障。）(P57)（6）卵細胞膜反應具體表現：精子入卵后，卵細胞膜會立即發生生理反應，拒絕其他精子再進入卵內。(P57)（7）卵細胞膜反應發生時間：精子入卵后。(P57)（8）雄原核的形成：精子入卵后，尾部脫離，原有的核膜破裂并形成一個新的核膜，最后形成一個比原來精子的核還大的核，叫做雄原核。(P57)（9）雌原核的形成：精子入卵后,被激活的卵子完成減數分裂Ⅱ，排出第二極體后，形成雌原核。(P57)（10）受精的標志：a.觀察到兩個極體（透明帶和卵細胞膜之間）。b.觀察到雌、雄原核。注意：多數哺乳動物的第一極體不進行減數分裂Ⅱ，因而不會形成兩個第二極體，觀察到的兩個極體為一個第一極體一個第二極體。(P58相關信息)（11）受精完成的標志：雌、雄原核核膜消失，形成合子。(P57)（12）受精過程結束后，受精卵的發育也就開始了。(P57)（13）受精卵中細胞核遺傳物質來源一半來源于精子，一半來源于卵子。細胞質遺傳物質來源幾乎全部來自于卵子。（二）胚胎早期發育1.受精卵是胚胎發育過程中全能性最高的階段。2.哺乳動物胚胎早期發育場所：輸卵管和子宮。3.胚胎早期發育階段(P58)受精卵→桑葚胚→囊胚→原腸胚。4.卵裂（1）場所：透明帶內。(P58)（2）分裂方式：有絲分裂。(P58)（3）特點(P58)a.細胞數量不斷增加。b.胚胎總體積并不增加。（4）其他表現每個細胞體積不斷減??；DNA總數目不斷增加；每個細胞的核DNA數目不變；有機物總量減少；有機物種類增加。3.桑葚胚（1）概念：當卵裂產生的子細胞逐漸形成致密的細胞團，形似桑葚時，這時的胚胎稱為桑葚胚。(P58)（2）特點：這一階段及之前的每一個細胞都具有發育成完整胚胎的潛能，屬于全能細胞。4.囊胚（1）概念：胚胎進一步發育，細胞開始出現分化，形成內細胞團、滋養層；隨著胚胎進一步發育，胚胎內部出現了含有液體的囊腔—囊胚腔，這個時期的胚胎叫做囊胚。(P58)（2）特點：細胞逐漸分化。(P58)（3）結構組成：內細胞團、滋養層、囊胚腔。(P58)a.內細胞團(P58)位置：聚集在胚胎一端。作用：將來發育成胎兒的各種組織。b.滋養層(P58)位置：沿透明帶內壁擴展和排列。作用：將來發育成胎膜和胎盤。c.囊胚腔：胚胎內部含有液體的腔。(P58)（4）孵化：囊胚進一步擴大，會導致透明帶破裂，胚胎從透明帶中伸展出來，這一過程叫做孵化。(P58)5.囊胚期的內細胞團細胞具有全能性。6.原腸胚：囊胚孵化后，將發育形成原腸胚；原腸胚表面的細胞層為外胚層，向內遷移的細胞形成內胚層；隨著發育的進行，一部分細胞還會在內外兩個胚層之間形成中胚層；這三個胚層將逐漸分化形成各種組織、器官等。(P58小字)7.牛在自然情況下，胚胎最早可在8-16細胞階段進入子宮，但在實踐中通常對發育到囊胚階段的胚胎進行移植的原因：提高移植后胚胎的發育率和妊娠率。注意：不同種動物精子的形態相似，大小略有不同，與動物的體型大小無關。二、胚胎工程技術及其應用（一）體外受精1．試管動物：通過人工操作使卵子在體外受精，經培養發育為早期胚胎后，再進行移植產生的個體。(P60)2．體外受精技術的主要過程：卵母細胞的采集、精子的獲取和受精。(P60)（1）采集到的卵母細胞和精子，要分別在體外進行成熟培養（即培養至MⅡ期）和獲能處理（可對精子進行離心處理），然后才能用于體外受精。(P60)（2）一般情況下，可以將獲能的精子和培養成熟的卵子置于適當的培養液中共同培養一段時間，來促進它們完成受精。(P60)3.體外受精的意義：是提高動物繁殖能力的有效措施，可以為胚胎移植提供可用胚胎。(P60)（二）胚胎移植1．概念：是指將通過體外受精及其他方式得到的胚胎，移植到同種的、生理狀態相同的雌性動物體內，使之繼續發育為新個體的技術。(P61)2.胚胎來源：體外受精及其他方式得到的胚胎。其他方式包括：體內受精、轉基因技術、動物細胞核移植技術等。3．胚胎移植的基本程序：（1）供體、受體的選擇和處理。提供胚胎的個體稱為供體。(P61)供體選擇標準：遺傳性狀優良、生產能力強。供體職能：產生具有優良遺傳特性的胚胎。接受胚胎的個體叫受體。(P61)受體選擇標準：有健康體質和正常繁殖能力。受體職能：承擔繁重而漫長的妊娠和育仔任務。對受體進行的處理：同期發情處理。(P61圖)該處理的目的：為胚胎移植前后提供相同的生理環境。只對供體進行的操作：超數排卵處理。(P61圖)該處理需要用的激素：外源促性腺激素。該處理的結果：卵巢排出比自然情況下更多的成熟卵子。（2）配種或人工授精（應選擇同種的優良公牛）。(P61)（3）胚胎的收集、檢查、培養或保存。(P61)胚胎收集的基礎：哺乳動物早期胚胎形成后，在一定時間內不會與母體子宮建立組織上的聯系，而是處于游離狀態。移植前檢查的目的：檢查胚胎的質量。胚胎保存的方法（了解）：-196℃液氮中保存。（4）胚胎的移植。(P61)胚胎移植的時期：一般選擇移植桑葚胚或囊胚階段的胚胎。移植后的檢查。(P61)移植后檢查的目的：對受體進行妊娠檢查（檢查受體是否妊娠）。4.胚胎移植過程中進行了兩次目的不同檢查（1）第一次目的：檢查胚胎的質量。（2）第二次目的：檢查受體是否妊娠。5.胚胎移植的實質：早期胚胎在相同生理環境條件下空間位置的轉移。(P62思考)6.胚胎移植的地位：胚胎工程的最終技術環節。7．胚胎移植的意義(P62)(1)充分發揮雌性優良個體的繁殖潛力。(2)大大縮短了供體本身的繁殖周期。(3)對供體施行超數排卵處理后，增加后代數量。8.胚胎移植是如何充分發揮雌性優良個體的繁殖潛力的？對供體施行超數排卵處理后，可獲得多枚胚胎，經移植可得到多個后代，使供體