五倍子體外抑菌實驗研究五倍子體外抑菌試驗研究

前言

儀器與材料

實驗方法技術路線步驟結果與結論討論目錄五倍子體外抑菌試驗研究五倍子(Gallachinensis),別名文蛤、百蟲倉、木附子等,五倍子為漆樹科植物鹽膚木、青麩楊或紅麩楊葉上的蟲癭，主要由五倍子蚜寄生而形成。秋季采摘，置沸水中略煮或蒸至表面呈灰色，殺死蚜蟲，取出，干燥。按外形不同，分為肚倍和角倍。作為傳統中藥,始載于《開寶本草》,具有斂肺降火、澀腸止瀉、固精縮尿、止汗、止血、解毒、斂瘡等多種臨床功效。五倍子主產于四川、貴州、云南、陜西、甘肅、湖北、廣西、湖南、河北、山西、廣東、安徽、福建、浙江、江西等地。現選擇云南、陜西、湖南、河北、浙江五省五倍子進行抑菌實驗研究，旨在觀察不同地區(qū)五倍子抑菌效果。前言:五倍子體外抑菌試驗研究五倍子體外抑菌試驗研究儀器與材料：金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、白色念珠菌、綠膿桿菌均來源于寧夏醫(yī)科大學檢驗學院；MH培養(yǎng)基培養(yǎng)基及瓊脂購于杭州天和微生物試劑有限公司。恒溫搖床（HS-200B，上海和呈）無菌操作臺（蘇凈集團）超控超聲波清洗器（KQ-500DA型;昆山市超聲儀器有限公司）；電熱鼓風干燥箱（DHG-9075A型;上海-恒科學儀器有限公司）；旋轉蒸發(fā)儀（R206;上海申升科技有限公司）；立式壓力蒸汽滅菌器（LDZX-50KBS;上海申安醫(yī)療器械廠）；冰箱五倍子體外抑菌試驗研究方法:2.1實驗藥液的制備分別稱取各產地五倍子粉末25g（過10目篩）于相應燒杯中，各量取70%的乙醇溶液250ml加入燒杯，超聲提取30min后分別用兩層紗布初步過濾后將濾液再次抽濾，濾渣再次提取合并兩次濾液，最后用旋轉蒸發(fā)儀濃縮后將濃縮后的藥液用25ml容量瓶定容放于冰箱保存?zhèn)溆谩?.2抑菌實驗2.2.1菌液培養(yǎng)：實驗前所有試管培養(yǎng)皿錐形瓶等在高壓蒸汽滅菌鍋（121℃，0.12MP）內經過高溫消毒。取4支高溫滅菌好的試管貼好標簽，分別加入3ml雙料MH培養(yǎng)液后各刮取一個菌落至相應試管中，放于37℃恒溫搖床（60w/min）培養(yǎng)16~18h使這些菌種進行活化使細菌有較強的活力。取4支試管各加入6ml單料培養(yǎng)基貼好標簽加2.2.2入60ul上述培養(yǎng)好的菌液于相應試管中放入37℃恒溫搖床（60w/min）培養(yǎng)4~6h將菌液保存于冰箱內備用。五倍子體外抑菌試驗研究方法:2.2.2不同濃度藥液培養(yǎng)液培養(yǎng)細菌：取202支在高壓蒸汽滅菌鍋內滅過菌的試管貼好標簽，加入相應倍半稀釋法稀釋好的藥液各1ml，加入相應菌液100ul，放入恒溫搖床培養(yǎng)16~18h。2.2.3瓊脂平板制備：

按說明書配置足量營養(yǎng)瓊脂，配好后經高壓滅菌，待溫度稍降低在無菌操作臺內將營養(yǎng)瓊脂倒入滅好菌的培養(yǎng)皿制備瓊脂平板備用。2.2.4抑菌效果檢測：

由于藥液本身有一定的渾濁度無法準確觀察細菌生長狀況所以將菌液涂瓊脂平板內培養(yǎng)取52個高壓滅菌好的瓊脂平板，在瓊脂平板上劃線將瓊脂平板平均劃分為四個區(qū)編號，將三中各試管藥液用接種環(huán)接種支瓊脂平板，放入搖床培養(yǎng)16~18h，最后觀察實驗結果并記錄最小抑菌濃度。五倍子體外抑菌試驗研究技術路線：倍半稀釋法配成不同濃度五倍子粉末70%乙醇超聲提取培養(yǎng)液濾液含不同濃度藥物的培養(yǎng)液稀釋100倍搖床培養(yǎng)瓊脂平板培養(yǎng)最小抑菌濃度細菌培養(yǎng)冷藏備用五倍子體外抑菌試驗研究步驟：

（一）提取：分別稱取個產地五倍子粉末25g（過10目篩）于相應燒杯中各量取70%的乙醇溶液200ml加入燒杯超聲提取30min分別用兩層紗布初步過濾后將濾液再次抽濾的濾液重復2-4部操作合并兩次濾液后用旋轉蒸發(fā)儀濃縮放于冰箱保存?zhèn)溆脤饪s后的藥液用25ml容量瓶定容備用（二）抑菌實驗：（Ⅰ）實驗前準備：按個培養(yǎng)基說明配置適量營養(yǎng)液將營養(yǎng)液、試管、培養(yǎng)皿、錐形瓶等試劑儀器高壓滅菌備用（Ⅱ）菌液培養(yǎng)：取4支試管貼好標簽后分別加入3ml培養(yǎng)液各刮取一個菌落至相應試管放于搖床培養(yǎng)16~18h五倍子體外抑菌試驗研究取4支試管各加入6ML單聊培養(yǎng)基貼好標簽加入60ul培養(yǎng)好的菌液于相應試管中放入搖床培養(yǎng)4~6h將菌液保存于冰箱內備用（Ⅲ）不同濃度藥液培養(yǎng)液培養(yǎng)細菌：a.取202支滅過菌的試管貼好標簽b．加入相應稀釋好的藥液c.加入相應菌液100uld.放入搖床培養(yǎng)16~18h（Ⅳ）瓊脂平板制備：a.按說明書配置一定量營養(yǎng)瓊脂b.高壓滅菌c.待溫度稍降低將營養(yǎng)瓊脂倒入滅過菌的培養(yǎng)皿注意正規(guī)操作（Ⅴ）抑菌效果檢測：a.取52個四中制好的瓊脂平板平均分為四個區(qū)編號b.將三中各試管藥液用接種環(huán)接種支瓊脂平板c.放入搖床培養(yǎng)16~18hd.觀察實驗結果并記錄五倍子體外抑菌試驗研究為測定不同產地五倍子抑菌效果選取云南、陜西、河南、湖南、浙江五個產地。將所提取藥液用倍半稀釋法配置成250ug/ml、125ug/ml、62.5ug/ml、31.25ug/ml、15.625ug/ml七種濃度。不同產地五倍子提取物對四種細菌的最小抑菌濃度如下表：結果與結論五倍子體外抑菌試驗研究

金黃色葡萄球菌大腸桿菌綠膿桿菌白色念珠菌河北A15.62531.250125.00062.500B15.62531.250125.00062.500浙江A15.62562.500125.00062.500B15.62562.50062.50015.625湖南A15.62562.500125.00031.250B15.62562.50062.50062.500陜西A31.25062.50062.50031.250B31.25062.500125.00015.625云南A<15.62562.50031.2531.250B<15.62531.250125.00031.250結果與結論五倍子體外抑菌試驗研究五倍子中的主要有效成分為鞣質,我國藥典上收載的五倍子鞣質,稱為鞣酸(tannicacid),又叫單寧酸。它是倍酰葡萄糖的混合物,即葡萄糖上的羥基與沒食子酸所形成的酯類化合物的混