毛皮動(dòng)物細(xì)菌性肺炎診治技術(shù)規(guī)程2024-03-19發(fā)布2024-04-18實(shí)施石家莊市市場(chǎng)監(jiān)督管理局發(fā)布I前言 12規(guī)范性引用文件 13術(shù)語和定義 14技術(shù)流程圖 1 2 47無害化處理 4附錄A(資料性)常用抗生素用藥參考量 5圖1毛皮動(dòng)物細(xì)菌性肺炎防控技術(shù)流程圖 2表A.1常用抗生素用藥參考量 5本文件按照GB/T1.1-2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。請(qǐng)注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識(shí)別這些專利的責(zé)任。本文件由石家莊市農(nóng)業(yè)農(nóng)村局提出。本文件起草單位：平山縣中山貂狐產(chǎn)銷專業(yè)合作社、石家莊市農(nóng)林科學(xué)研究院。本文件主要起草人：李偉、李鑫、劉潔、任二軍、劉進(jìn)軍、王朋然、鄧露芳、宗文麗、郭亮、趙春付、趙彥雪、韓學(xué)良。1毛皮動(dòng)物細(xì)菌性肺炎診治技術(shù)規(guī)程1范圍本文件確立了毛皮動(dòng)物”細(xì)菌性肺炎"診治的技術(shù)程序，規(guī)定了診斷、治療等環(huán)節(jié)的操作步驟及要求，描述了各個(gè)程序環(huán)節(jié)的追溯記錄。本文件適用于養(yǎng)殖場(chǎng)(戶)及動(dòng)物診療單位對(duì)毛皮動(dòng)物細(xì)菌性肺炎的診斷與防治的技術(shù)操作培訓(xùn)與指導(dǎo)。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改單)適用于本文件。GB/T14926.43實(shí)驗(yàn)動(dòng)物細(xì)菌學(xué)檢測(cè)染色法、培養(yǎng)基和試劑NY/T541獸醫(yī)診斷樣品采集、保存與運(yùn)輸技術(shù)規(guī)范DB1301/T084規(guī)模養(yǎng)殖場(chǎng)病害動(dòng)物無害化處理技術(shù)規(guī)范3術(shù)語和定義本文件沒有需要界定的術(shù)語和定義。4技術(shù)流程圖毛皮動(dòng)物細(xì)菌性肺炎防控技術(shù)流程圖見圖1。1)毛皮動(dòng)物僅限水貂、銀狐、北極狐、貉。2)細(xì)菌性肺炎指由綠膿桿菌、大腸桿菌、巴氏桿菌、克雷伯氏菌、鏈球菌等細(xì)菌性病原菌引起的終末氣道、肺泡和肺間質(zhì)炎癥。2圖1毛皮動(dòng)物細(xì)菌性肺炎防控技術(shù)流程圖5.1流行病學(xué)調(diào)查送診動(dòng)物品種、年齡，是否處于易感期；是否與疑似或確診發(fā)病動(dòng)物有接觸；水貂、銀狐、北極狐、貉等毛皮動(dòng)物均有易感性。5.2臨床癥狀觀察患病動(dòng)物表現(xiàn)咳嗽，呼吸困難，腹式呼吸，精神沉郁，食欲減退，被毛逆亂，體溫升高。不同細(xì)菌性肺炎表現(xiàn)如下：a)綠膿桿菌：多數(shù)病獸死后鼻中流出血樣液體，部分病獸后肢麻痹現(xiàn)象，主要呈現(xiàn)急性發(fā)作，少數(shù)病獸未見癥狀突然死亡；b)大腸桿菌：前期咳嗽，逐漸出現(xiàn)哮喘，呼吸衰竭而死，急性病例通常出現(xiàn)口鼻流血的情況；c)巴氏桿菌肺炎：除有部分呼吸道癥狀外，有時(shí)會(huì)伴隨嘔吐和下痢，出現(xiàn)不自覺的咀嚼等神經(jīng)癥狀，常伴隨抽搐死亡等現(xiàn)象；d)克雷伯氏菌：肩、背部、尾部、胯部出現(xiàn)膿腫，破潰后流出灰白色粘稠膿汁；e)鏈球菌：眼中有膿性分泌物，鼻流清液，后期成膿性分泌物。患病動(dòng)物剖檢后肺臟出血、淤血、腫大，切開有泡沫樣血樣流出，具體表現(xiàn)如下：a)綠膿桿菌肺炎剖檢為出血性肺炎，肺臟出血淤血，氣管內(nèi)充滿血色泡沫；3b)大腸桿菌肺炎剖檢為間質(zhì)性肺炎，肺炎區(qū)質(zhì)地堅(jiān)實(shí)，呈灰紅色或灰白色，部分病例有化膿灶；c)巴氏桿菌肺炎剖檢為氣管出血，肺淤血腫大，全身多處粘膜和皮下組織有大量出血點(diǎn)，肝、脾、腎都有出血點(diǎn)；d)克雷伯氏菌肺炎剖檢為纖維素性肺炎；e)鏈球菌肺炎剖檢為各器官廣泛出血，脾臟腫大紫紅色，表面粗糙，兼有小出血點(diǎn)和貧血性梗死，肝臟充血腫大，呈紅色或淡黃色，腎腫大有出血點(diǎn)和淤血斑，并有化膿性壞死灶。5.4病原學(xué)檢測(cè)5.4.1分離培養(yǎng)采樣應(yīng)符合NY/T541要求。無菌采取鼻腔氣管吸取物、胸水、膿液、肺臟等病變組織。劃線接種于含5%胎牛血清的胰蛋白胨大豆瓊脂平板(TSA)培養(yǎng)基，37℃培養(yǎng)18h~24h,觀察菌落生長情況，無菌落判斷為非細(xì)菌性肺炎。5.4.2涂片鏡檢細(xì)菌染色按GB/T14926.43執(zhí)行。將培養(yǎng)的菌作涂片，干燥、固定。固定時(shí)通過火焰1次~2次即可，不可過熱，以載玻片不燙手為宜。固定后按照如下步驟操作：a)初染：加結(jié)晶紫液蓋滿標(biāo)本處，染1min后水洗，并將玻片上積水輕輕甩凈；b)媒染：加碘液蓋滿標(biāo)本處，1min后水洗，甩凈玻片上積水；c)脫色：加95%酒精蓋滿標(biāo)本，輕輕搖動(dòng)玻片，約20s后水洗、甩干；d)復(fù)染：加稀釋石炭酸復(fù)紅液或沙黃溶液1滴～2滴蓋滿標(biāo)本，染30s后水洗，待標(biāo)本自干或用吸水紙印干；e)鏡檢：用香柏油覆蓋涂菌部位，置油鏡觀察，綠膿桿菌呈長棒形，紫紅色；大腸桿菌呈桿狀，紫紅色；巴氏桿菌呈卵圓形，兩極濃染，紫紅色；克雷伯氏菌呈較短粗的桿菌，單獨(dú)、成雙或短鏈狀排列；鏈球菌呈鏈狀排列，藍(lán)色。5.4.3生化試驗(yàn)挑取單個(gè)分離菌接種于細(xì)菌微量發(fā)酵管中，37℃培養(yǎng)18h～24h,觀察記錄生化反應(yīng)結(jié)果。5.4.4分子生物學(xué)鑒定分離得到的菌種接種于1mL的胰蛋白胨大豆液體培養(yǎng)基(TSB)培養(yǎng)基中，37℃、220r/min培養(yǎng)16SrRNA序列擴(kuò)增所用引物為16SrRNA通用引物，引物序列為：P1:5’—AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3’,P2:5’一擴(kuò)增程序：95℃5min;95℃30s,55℃30s,72℃100s,共35個(gè)循環(huán)；72℃10min。預(yù)期擴(kuò)增的目的片段長度約為1500bp。測(cè)序分析4將回收純化后的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物測(cè)序，根據(jù)測(cè)序比對(duì)結(jié)果(同源性比對(duì)結(jié)果>96%)對(duì)分離株進(jìn)行鑒定和相應(yīng)編號(hào)。5.5診斷結(jié)果判定5.5.1初步診斷根據(jù)流行病學(xué)特征和典型臨床癥狀，結(jié)合病理剖檢，做出初步診斷。根據(jù)病原學(xué)檢測(cè)結(jié)果，確定是何種細(xì)菌感染，結(jié)合初步診斷做出確診。6治療發(fā)病后立即對(duì)發(fā)病動(dòng)物進(jìn)行隔離，每天清掃糞便，對(duì)養(yǎng)殖場(chǎng)進(jìn)行全面消毒。針對(duì)不同病原菌選擇不同藥物，根據(jù)疾病嚴(yán)重程度選擇用藥量和用藥次數(shù)，連續(xù)用藥時(shí)間不超過1周，建議選擇藥物如下。a)綠膿桿菌肺炎使用環(huán)丙沙星、慶大霉素、丁胺卡那、頭孢哌酮等藥物；b)大腸桿菌性肺炎使用氟苯尼考、頭孢曲松、頭孢哌酮等藥物；c)巴氏桿菌肺炎使用頭孢噻呋鈉、林可霉素、恩諾沙星、環(huán)丙沙星等藥物；d)克雷伯氏菌肺炎使用亞胺培南及多粘菌素等藥物；e)鏈球菌肺炎使用青霉素、阿莫西林、氨芐西林、恩諾沙星等藥物治療。藥物使用量見附錄A。7無害化處理病死動(dòng)物按照DB1301/T084的要求進(jìn)行無害化處理。5(資料性)常用抗生素用藥參考量常用抗生素用藥參考量見表A.1。表A.1常用抗生素用藥參考量阿莫西林頭孢噻吩(先鋒I)頭孢噻啶(先鋒Ⅱ)頭孢氨芐(先鋒IV)頭孢唑啉(先鋒V)頭孢拉定(先鋒VI)頭孢呋辛頭孢哌酮頭孢噻