PAGE6-土壤中分解尿素的細菌的分別與計數[基礎對點]學問點一篩選微生物的探討思路1.土壤中的細菌能分解尿素，是因為它們能合成()A．尿素酶 B．脲酶C．蛋白酶 D．肽酶答案B解析能夠分解利用尿素的細菌，其細胞內含有脲酶，可以把尿素分解成氨，然后進一步利用，B正確。2．分別土壤中分解尿素的細菌時，對培育基的要求是()①加尿素②不加尿素③加瓊脂④不加瓊脂⑤加葡萄糖⑥不加葡萄糖⑦加硝酸鹽⑧不加硝酸鹽A．①③⑤⑦ B．②④⑥⑧C．①③⑤⑧ D．①④⑥⑦答案C解析土壤中分解尿素的細菌能夠合成脲酶，將尿素分解生成氨，利用尿素中的氮合成自身有機物，①符合要求；培育基中尿素作為唯一氮源，分解尿素的細菌能生長，其他微生物不能生長，⑧符合要求；分別微生物要用固體培育基，須要加瓊脂，③符合要求；土壤中分解尿素的細菌屬于異養微生物，須要加葡萄糖作為碳源，⑤符合要求。3．選擇培育基可以從混雜的微生物群體中分別出所需的微生物，通過不含有機物的培育基、缺氮培育基、含尿素(不含其他氮源)的培育基，可從土壤中分別出的微生物依次是()A．硝化細菌、放線菌、根瘤菌B．根瘤菌、青霉菌、固氮菌C．異養型細菌、放線菌、硝化細菌D．自養型細菌、固氮菌、分解尿素的細菌答案D解析選擇培育基可以依據不同微生物的代謝特點，通過變更培育基的成分，以達到選擇某種微生物的目的。不含有機物的培育基可以分別出自養型微生物；缺少氮元素的培育基可以培育固氮微生物；含尿素(不含其他氮源)的培育基可以分別出能分解尿素的微生物，D正確。4．用稀釋涂布平板法來統計樣品中活菌的數目，其結果與實際值相比最可能是()A．比實際值高B．比實際值低C．和實際值一樣D．比實際值可能高也可能低答案B解析在涂布時，有可能兩個或兩個以上的細胞連在一起，使平板上視察到的只是一個菌落。學問點二試驗設計及操作5.關于土壤中細菌的分別，下列正確的操作步驟是()①土壤取樣②稱取10g土壤，加入盛有90mL無菌水的錐形瓶中③吸取0.1mL進行平板涂布④依次稀釋至103、104、105、106、107倍A．①→②→③→④ B．①→③→②→④C．①→②→④→③ D．①→④→②→③答案C解析在分別土壤中某種細菌時，應先選取土樣(10g)，然后加入到盛有無菌水的錐形瓶中獲得土壤浸出液，并進行不同倍數稀釋，最終將稀釋液涂布到培育基表面進行培育，并分別和計數，C正確。6．下列操作須要在火焰旁進行的是()①土壤取樣②稱取土壤③稀釋土壤溶液④涂布平板⑤微生物的培育A．①②③④⑤ B．②③④⑤C．③④⑤ D．②③④答案D解析試驗操作過程要進行嚴格的無菌操作，除試驗空間必需消毒外，每個操作步驟都必需在無菌區進行。土壤的稱取、土壤溶液的稀釋、涂布平板都須要在酒精燈火焰旁的無菌區完成，以防止雜菌污染，D正確。7．可以鑒定出分解尿素的細菌的方法是()A．以尿素為唯一氮源的培育基中加入酚紅指示劑B．以尿素為唯一氮源的培育基中加入二苯胺試劑C．以尿素為唯一氮源的培育基中加入蘇丹Ⅲ試劑D．以尿素為唯一氮源的培育基中加入雙縮脲試劑答案A解析細菌將尿素分解后，培育基中pH上升，使酚紅指示劑變紅，A正確。8．用稀釋涂布平板法來統計樣品中尿素分解菌的數目，為了提高試驗結果的可信度，往往要設置比照試驗，對于比照組的要求不包括()A．比照組培育基也嚴格滅菌，且不接種任何微生物B．倒平板時，培育基的用量與試驗組必需完全相同C．所用培育基成分及pH大小與試驗組保持一樣D．比照組和試驗組均放在相同且相宜的條件下培育答案B解析比照組培育基也要嚴格滅菌，且不接種任何微生物，為空白比照，A正確；比照組培育基用量的大小與試驗組基本相同即可，不肯定肯定相同，B錯誤；比照組所用培育基的成分及pH應與試驗組完全一樣，C正確；比照組和試驗組的培育基都要置于相同條件下培育，以保證單一變量，D正確。9．下列關于微生物培育的敘述，錯誤的是()A．因為土壤中各類微生物的數量不同，所以，為獲得不同類型的微生物一般要按不同的稀釋倍數進行分別B．測定土壤中細菌的總量和測定土壤中能分解尿素的細菌的數量，選用的稀釋范圍不同C．利用稀釋涂布平板法只能分別微生物不能對微生物進行計數D．接種時連續劃線的目的是將聚集的菌種逐步稀釋獲得單菌落答案C解析土壤中各種微生物數量不同，大約70%～90%為細菌，放線菌和真菌較少，故不同類型微生物，一般要按不同稀釋倍數進行分別，A正確；由A可知，測定土壤中細菌的總量和測定土壤中能分解尿素的細菌的數量，須要選用的稀釋范圍不同，B正確；稀釋涂布平板法能用于微生物的計數，C錯誤；接種時連續劃線的目的是將聚集的菌種逐步稀釋獲得單菌落，D正確。[實力提升]10．關于土壤中分解尿素的細菌的分別與計數試驗的敘述正確的是()A．培育基應以尿素為唯一氮源，該細菌與硝化細菌所利用的碳源物質是相同的B．選擇菌落數在30～300間的全部平板進行計數，以平均數為試驗結果C．對10mL土樣稀釋106倍后，取0.1mL該溶液進行重復的涂布試驗，測得的菌落數分別為18、234、276，則該10mL土樣中分解尿素的細菌數為2.55×108個D．應當設置比照以解除非測試因素對試驗結果的干擾，提高可信度答案D解析土壤中分解尿素的細菌為異養菌，硝化細菌是自養菌，二者利用的碳源不同，A錯誤；選擇菌落數在30～300間的平板進行計數，舍去數據相差較大的數據，以平均數為試驗結果，B錯誤；對10mL土樣稀釋106倍后，取0.1mL該溶液進行重復的涂布試驗，測得的菌落數分別為18、234、276，應選擇菌落數在30～300間的平板進行計數，則應舍棄菌落數為18的平板，那么該10mL土樣中分解尿素的細菌數為(234＋276)/2÷0.1×10×106＝2.55×1010(個)，C錯誤；分別微生物時，須要設置不接種的培育基與試驗組一起培育做空白比照，設置比照的目的是解除試驗組中非測試因素對試驗結果的干擾，D正確。11．甲、乙、丙是三種微生物，表中Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ是用來培育微生物的三種培育基。甲、乙、丙都能在Ⅲ中正常生長繁殖；甲能在Ⅰ中正常生長繁殖，而乙和丙都不能；乙能在Ⅱ中正常生長繁殖，甲、丙都不能。下列說法正確的是()ⅠⅡⅢ粉狀硫10g＋＋＋K2HPO44g＋＋＋FeSO40.5g＋＋＋蔗糖10g＋－＋(NH4)2SO40.4g－＋＋H2O100mL＋＋＋MgSO49.25g＋＋＋CaCl20.5g＋＋＋注：“＋”表示培育基中加入了這種物質，“－”表示培育基中沒有加入這種物質。A．甲、乙、丙都是異養型微生物B．甲、乙都是自養型微生物，丙是異養型微生物C．甲是異養型微生物，乙是固氮微生物，丙是自養型微生物D．甲是固氮微生物，乙是自養型微生物，丙是異養型微生物答案D解析Ⅰ培育基缺少氮源，Ⅱ培育基缺少碳源，Ⅲ培育基養分全面。甲能在Ⅰ上生長繁殖，而乙、丙都不能，說明甲是能夠固氮的微生物；乙能在Ⅱ中生長繁殖，甲、丙不能，說明乙不須要培育基為它的正常生命活動供應碳源物質，乙肯定為自養型微生物；丙只能在Ⅲ上生長繁殖，為異養型微生物。12．土壤是“微生物的自然培育基”，下面是有關土壤中分解尿素的細菌分別和計數的試驗過程，請據圖回答相關問題：(1)能分解尿素的細菌代謝類型為________，為獲得該種細菌，應從富含有機質的土壤表層取土樣。(2)為分別出土壤中分解尿素的細菌，應當用________________的培育基進行分別，并加入________指示劑進行鑒別。(3)因土壤中細菌密度很大，須要不斷加以稀釋，配制成如圖所示的不同濃度的土壤溶液。取樣稀釋前，肯定要________以削減誤差。將103～107倍的稀釋液分別吸取0.1mL加入到固體培育基上，用________將菌液鋪平，這種接種方法稱為________________。(4)將接種的培育皿放置在37℃恒溫培育箱中培育24～48h，視察并統計具有________(現象)的菌落數，結果如下表，其中________倍的稀釋比較合適。稀釋倍數103104105106107菌落數(個)5003672483618答案(1)異養型(2)以尿素為唯一氮源'酚紅(3)搖勻'涂布器'稀釋涂布平板法(4)紅色環帶'105和106解析(1)能分解尿素的細菌可將尿素分解成氨，代謝類型為異養型。(2)分別土壤中分解尿素的細菌，應當用以尿素為唯一氮源的培育基進行分別，分解尿素的細菌在分解尿素時產生氨，使酚紅指示劑顯紅色，所以要加入酚紅指示劑進行鑒別。(3)取樣稀釋前，肯定要將菌液搖勻以削減誤差；將103～107倍的稀釋液分別吸取0.1mL加入到固體培育基上，用稀釋涂布平板法進行接種，須要將菌液用涂布器涂布到固體培育基上。(4)將接種的培育皿放置在37℃恒溫培育箱中培育24～48h，具有紅色環帶的菌落即是分解尿素的細菌的菌落。估算樣品中的活菌數時，往往選取菌落數在30到300之間的平板，分析表格數據可知，105和106的稀釋度下菌落數在這一范圍。13．在調查某湖水中H細菌指數(1升水中含有的H細菌個數)的試驗中，先將5升湖水水樣濃縮至5毫升，然后各取濃縮水樣1毫升，涂布到4個培育皿中培育，培育后統計的菌落數分別是42、38、55、18。請回答：(1)培育基中的蛋白胨和淀粉分別為細菌生長供應了____________________、________。(2)為了盡快視察到細菌培育的試驗結果，應將接種了湖水水樣的平板置于____________中培育，培育的溫度設定在37℃。要使該試驗所得結果牢靠，還應當同時在另一平板上接種____________作為比照。(3)細菌培育產生的單個菌落在生態學中稱為__________。依據上述結果計算，被檢樣的H細菌指數為________。用這種方法測定密度，實際活菌數目要比測得的數目________，緣由是__________________________。(4)為了純化獲得的H細菌，在微生物的試驗室培育過程中，關鍵是________，而試驗結束后，運用過的培育基應當進行________處理后才能倒掉。答案(1)氮源、碳源和維生素碳源(2)恒溫培育箱等量無菌水(3)種群45多當兩個或多個細胞連在一起時在平板上視察到的是一個菌落(4)防止雜菌污染滅菌解析(1)蛋白胨通常為微生物供應氮源、碳源和維生素，淀粉通常作為碳源。(2)恒溫培育箱能夠保證細菌生長最適溫度，故細菌數量增長較快。在另一平板上接種等量無菌水作為比照，推斷平板上是否滅菌徹底。(3)細菌培育產生的單個肉眼可見的子細胞群體稱為菌落，生態系統中稱為種群。計算時應去掉18這個偏差較大組，其他3組(42、38、55)取平均值為45。用稀釋涂布平板法進行微生物計數時，由于兩個或多個細胞連在一起時在平板上視察到的是一個菌落，所以實際活菌數目要比測得的數目多。(4)為了純化獲得的H細菌，在微生物的試驗室培育過程中，關鍵是防止雜菌污染；試驗結束，為避開微生物污染環境和感染操作者，運用過的培育基應當進行滅菌后才能倒掉。14．臨床運用抗生素前，有時須要做細菌耐藥試驗。試驗時，首先要從病人身上獲得少量樣本，然后依據肯定的試驗步驟操作，以確定某致病菌對不同抗生素的敏感性。回答下列問題：(1)為了從樣本中獲得致病菌單菌落，可用________法或______________法將樣本接種于固體培育基表面，經過選擇培育、鑒別等步驟獲得。(2)取該單菌落適當稀釋，用______________法接種于固體培育基表面，在37℃培育箱中培育24h，使其勻稱生長，布滿平板。(3)為了檢測該致病菌對于抗生素的敏感性，將分別含有A、B、C、D四種抗生素的濾紙片勻稱置于該平板上的不同位置，培育一段時間后，含A的濾紙片四周出現透亮圈，說明該致病菌對抗生素A________；含B的濾紙片四周沒有出現透亮圈，說明該致病菌對抗生素B______；含C的濾紙片四周的透亮圈比含A的小，說明__________________________；含D的濾紙片四周的透亮圈也比含A的小，且透亮圈中出現了一個菌落，在解除雜菌污染的狀況下，此菌落很可能是抗生素D的________。(4)依據上述試驗結果，為達到抗菌目的，最好應選用抗生素________。答案(1)平板劃線稀釋涂布平板(2)稀釋涂布平板(3)敏感不敏感該致病菌對C的敏感性比對A的弱耐藥菌(4)A解析(1)將細菌接種到固體培育基上的方法有平板劃線法和稀釋涂布平板法。(2)為了使該致病菌勻稱布滿平板，須要將