文件號(hào)：AA第1版頁(yè)數(shù)PAGE5共5頁(yè)試劑標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程項(xiàng)目總膽汁酸（TBA）方法第五代循環(huán)酶法，速率法儀器H7600系列編寫(xiě)人日期審核人日期批準(zhǔn)人日期文件分發(fā)部門(mén)和/或個(gè)人本規(guī)程自年月日起實(shí)施 目錄檢測(cè)原理標(biāo)本采集與處理2.1受檢者的準(zhǔn)備2.2靜脈采血2.3抗凝劑2.4標(biāo)本處理3.試劑3.1試劑3.2校準(zhǔn)血清3.3試劑與校準(zhǔn)血清的穩(wěn)定性4.儀器5.操作6.計(jì)算7.操作性能7.1精密度7.2準(zhǔn)確度7.3靈敏度7.4可報(bào)告范圍7.5特異性7.6干擾8.參考值9.臨床意義附錄A:參數(shù)1.檢測(cè)原理膽汁酸與3a-羥基類(lèi)固醇脫氫酶（3a-HSDH）及氧化型b-硫代煙酰胺脲嘌呤二核苷酸氧化型（Thio-NAD）發(fā)生反應(yīng)，生成3-酮類(lèi)固醇以及還原型b-硫代煙酰胺脲嘌呤二核苷酸（Thio-NADH）。3-酮類(lèi)固醇在3a-HSDH和Thio-NADH作用下，生成膽汁酸及Thio-NAD。通過(guò)循環(huán)酶而使微量的膽汁酸量得到放大。通過(guò)測(cè)定生成物Thio-NADH在405nm吸光度的變化，可測(cè)量樣品中膽汁酸的濃度。2．標(biāo)本采集與處理2.1受檢者的準(zhǔn)備：病人空腹12h，不飲酒24h后采集血樣。體檢對(duì)象抽血前應(yīng)有兩周的的正常狀況記錄。注意有無(wú)應(yīng)用影響測(cè)試項(xiàng)目的藥物。此外，對(duì)于體檢者，采血的季節(jié)都應(yīng)做相關(guān)記錄，因?yàn)闃颖局懈黜?xiàng)目的含量有季節(jié)性變動(dòng)，為了前后比較應(yīng)在每年同一季節(jié)檢驗(yàn)。應(yīng)囑體檢對(duì)象在抽血前24小時(shí)內(nèi)不做劇烈運(yùn)動(dòng)。2.2靜脈采血：除非是臥床的病人，一般在采血時(shí)取坐位。體位影響水分在血管內(nèi)外的分布，會(huì)影響測(cè)試項(xiàng)目的濃度。在采血前至少應(yīng)靜坐5分鐘，一般從肘靜脈取血，使用止血帶的時(shí)間不超過(guò)1分鐘，穿刺成功后立即松開(kāi)止血帶。2.3抗凝劑：血漿使用肝素作為抗凝劑。2.4標(biāo)本處理：血標(biāo)本室溫放置30min～45min后離心分離血清或血漿，置潔凈試管加蓋低溫保存。3．試劑3.1試劑：本科使用上海華臣生化技術(shù)有限公司TBA試劑盒，為液體雙試劑，各組分如下：試劑包裝規(guī)格見(jiàn)試劑說(shuō)明書(shū)。試劑1β-硫代煙酰胺腺嘌呤二核酸磷酸2.2mmol/LGOOD'S緩沖液pH7.10.66mmol/L試劑2NADH2.9mmol/L3α-HSD3α-羥類(lèi)固醇去氫酶≥5000U/LGOOD'S緩沖液pH7.00.65mmol/L3.2：校準(zhǔn)血清使用上海華臣生化技術(shù)有限公司提供的復(fù)合校準(zhǔn)血清或使用TBA的專(zhuān)用標(biāo)準(zhǔn)液。校準(zhǔn)頻次：空白定標(biāo)：每日需做試劑空白定標(biāo)。全點(diǎn)定標(biāo)：試劑換批號(hào)使用時(shí)或質(zhì)控結(jié)果超過(guò)規(guī)定的2SD范圍，需要全點(diǎn)定標(biāo)。3.3試劑與校準(zhǔn)血清的穩(wěn)定性：原包裝試劑儲(chǔ)存在2-8℃至標(biāo)簽所示失效日期。試劑開(kāi)瓶后，在儀器中至少可保存20天。試劑儲(chǔ)存在18-22℃穩(wěn)定15天，試劑應(yīng)避免污染。試劑R1顏色為無(wú)色，試劑R2顏色為無(wú)色至淺黃色，當(dāng)試劑變色，按照試劑失效處理。多項(xiàng)校準(zhǔn)血清在2-8℃儲(chǔ)存至標(biāo)簽所示失效日期，復(fù)溶后-20℃保存，可穩(wěn)定一個(gè)月，只可凍融一次，避免反復(fù)凍融。參見(jiàn)校準(zhǔn)血清說(shuō)明書(shū)。4．儀器H7600系列型號(hào)儀器。5．操作樣品為血清或肝素/EDTA抗凝血漿。本法為終點(diǎn)法。參數(shù)見(jiàn)后附，附錄A。試劑參數(shù)設(shè)置、定標(biāo)操作以及樣本檢測(cè)常規(guī)操作，見(jiàn)儀器操作規(guī)程。ΔAΔA測(cè)定ΔA標(biāo)準(zhǔn)c＝ΧCΔA標(biāo)準(zhǔn)式中：c——測(cè)定總膽汁酸濃度，μmol/L；ΔA測(cè)定——標(biāo)本管吸光度變化；ΔA標(biāo)準(zhǔn)——標(biāo)準(zhǔn)管吸光度變化；CO——校準(zhǔn)血清總膽汁酸濃度，μmol/L；ΔA＝A2－A17．操作性能7.1精密度：批內(nèi)CV<5%，批間CV<7%。7.2準(zhǔn)確度：測(cè)量結(jié)果在上海華臣質(zhì)控血清靶值±2SD范圍內(nèi)。不同方法學(xué)試劑的質(zhì)控結(jié)果之間會(huì)存在差異，使用時(shí)請(qǐng)確保質(zhì)控選擇與試劑的方法學(xué)保持一致。7.3靈敏度：總膽汁酸濃度為：100μmol/L時(shí)，顯色吸光度為0.235～0.256。7.4可報(bào)告范圍：血清與試劑用量之比為4:240：80時(shí)，測(cè)定上限為180μmol/L。7.5特異性：測(cè)量值在給定值的90%-110％范圍內(nèi)。7.6干擾：內(nèi)源性干擾物溶血為1000mg/ml、脂血2000mg/ml、黃疸30mg/ml、抗壞血酸300mg/ml對(duì)測(cè)試結(jié)果無(wú)明顯影響。8．參考值0～12μmol/L。9．臨床意義本試劑盒用于體外測(cè)定血清中的總膽汁酸含量。TBA是由肝臟分解代謝，能反映肝實(shí)質(zhì)損傷。一旦肝細(xì)胞發(fā)生病變，血中膽汁酸濃度極易升高。急性肝炎、慢性活肝、肝硬化、肝癌TBA結(jié)果明顯升高。與ALT進(jìn)行比較，急性肝炎、慢性活肝