消滅易錯(cuò)生物技術(shù)與生物工程的科學(xué)前沿易錯(cuò)

題組一發(fā)酵工程

1.酵母菌是一種單細(xì)胞真菌，與人類(lèi)生活息息相關(guān)。轉(zhuǎn)基因啤酒酵母用于生產(chǎn)乙肝疫苗。耐

高糖的面包酵母（從自然界酵母種群篩選獲得）能利用面團(tuán)中的糖類(lèi)等營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)發(fā)酵產(chǎn)生C02,

使面包松軟可口；止匕外，面包酵母含有豐富的氨基酸、維生素和微量元素等，能夠增加食品的

營(yíng)養(yǎng)價(jià)值。下列相關(guān)說(shuō)法錯(cuò)誤的是（）

A.酵母菌細(xì)胞呼吸產(chǎn)生C02的場(chǎng)所有細(xì)胞質(zhì)基質(zhì)和線(xiàn)粒體

B.通過(guò)選擇培養(yǎng)、基因工程育種可獲得優(yōu)良性狀的酵母菌種

C.做面包、饅頭，釀酒等，都是利用酵母菌的無(wú)氧呼吸原理

D.酵母菌細(xì)胞富含蛋白質(zhì)、維生素等，可以用作飼料添加劑

易錯(cuò)分析：酵母菌是兼性厭氧單細(xì)胞真菌，在發(fā)酵工程中運(yùn)用廣泛，做面包、饅頭等，是

利用酵母菌有氧呼吸產(chǎn)生大量二氧化碳，釀酒則是利用酵母菌的無(wú)氧呼吸原理。

2.我國(guó)具有悠久的釀酒文化和歷史?！短旃ら_(kāi)物》中有“古來(lái)曲造酒，薨造醴”的記載，“曲”指

由谷物培養(yǎng)微生物所制成的發(fā)酵劑，“篥”指發(fā)芽的谷物，“醴”指甜酒。古人在冬季釀酒時(shí)，常

將谷物封存在陶器中并埋藏于地下進(jìn)行保溫。下列敘述錯(cuò)誤的是（）

A.釀酒過(guò)程中密封的主要目的是避免雜菌污染，從而提高酒的品質(zhì)

B.“曲”中含有大量的酵母菌，溫度是影響酵母菌生長(zhǎng)的重要因素

C.“造醴”時(shí)選擇“篥”的原因是發(fā)芽的谷物會(huì)釋放更多的淀粉酶

D.“篥造醴”時(shí)大部分糖的分解和代謝物的生成都在發(fā)酵階段完成

3.某研究小組采用濾膜法（如圖）對(duì)冰激凌中大腸桿菌數(shù)量是否超標(biāo)進(jìn)行檢測(cè)。已知飲用水標(biāo)準(zhǔn)

為1000mL自來(lái)水中大腸桿菌菌落數(shù)不能超過(guò)3個(gè)（37C培養(yǎng)48h）。下列敘述不合理的是（）

無(wú)菌保子

濾膜

37℃培養(yǎng)

伊紅-亞甲

藍(lán)瓊脂平板

注：大腸桿菌在含有伊紅-亞甲藍(lán)的瓊脂培養(yǎng)基上

生長(zhǎng)，菌落呈深紫色并有金屬光澤

A.該實(shí)驗(yàn)不需要對(duì)冰激凌原液進(jìn)行梯度稀釋

B.實(shí)驗(yàn)方案應(yīng)增設(shè)一組接種無(wú)菌水的組別作為對(duì)照

C.稀釋涂布平板法不可用于測(cè)定冰激凌中大腸桿菌數(shù)目

D.伊紅-亞甲藍(lán)瓊脂培養(yǎng)基屬于鑒別培養(yǎng)基

4.農(nóng)桿菌是植物基因工程中常用到的一種細(xì)菌，下表為用來(lái)培養(yǎng)農(nóng)桿菌的LB培養(yǎng)基配方,

下圖是對(duì)培養(yǎng)的農(nóng)桿菌進(jìn)行菌落計(jì)數(shù)的過(guò)程。下列敘述錯(cuò)誤的是()

蛋白陳10.0g

酵母浸粉5.0g

NaCl10.0g

蒸儲(chǔ)水IL

配制完成后，將pH調(diào)至7.0

注：酵母浸粉以酵母為原料，經(jīng)自溶、酶解、濃縮、干燥等工藝制成。

A.上述LB培養(yǎng)基為液體培養(yǎng)基，一般對(duì)細(xì)菌無(wú)選擇作用

B.圖中所用接種方法為稀釋涂布平板法

C.蛋白腺和酵母浸粉可以給農(nóng)桿菌提供碳源和氮源

D.若b、c、d中菌落數(shù)分別為48、57、60,則a中農(nóng)桿菌約為5.5xl()7個(gè)

5.西鳳酒是中國(guó)四大名酒之一，其歷史悠久，品質(zhì)上乘。據(jù)了解，西鳳酒是以土窖池為發(fā)酵

容器，而多年反復(fù)利用的窖池內(nèi)壁的窖泥中含有多種與釀酒有關(guān)的微生物。下列敘述錯(cuò)誤的是

()

A.西鳳酒的釀造是以釀酒酵母為主的多種微生物共同作用下完成的

B.窖池中的各種微生物會(huì)形成相對(duì)穩(wěn)定的體系，從而不容易被雜菌污染

C.釀酒原料多以高粱、大麥等為主，經(jīng)發(fā)酵形成的酒糟中可分離出產(chǎn)淀粉酶的微生物

D.若對(duì)分離出的釀酒酵母做擴(kuò)大培養(yǎng)，則需在二氧化碳或氮?dú)猸h(huán)境中進(jìn)行

易錯(cuò)分析：擴(kuò)大培養(yǎng)的目的是獲得更多酵母菌，與無(wú)氧呼吸相比，細(xì)胞有氧呼吸產(chǎn)生的能

量更多，更能滿(mǎn)足酵母菌大量繁殖時(shí)的需求，更需要有氧環(huán)境。

6.影印接種法是一種用于研究微生物抗藥性和篩選突變體的實(shí)驗(yàn)技術(shù)。為檢測(cè)某種氨基酸缺

陷型菌株，實(shí)驗(yàn)人員的實(shí)驗(yàn)過(guò)程如圖所示，其中基本培養(yǎng)基中缺乏某種氨基酸，而完全培養(yǎng)基

中含有該種氨基酸。下列敘述正確的是（）

滅菌的絲絨布

經(jīng)誘變處待測(cè)絲絨布

理的菌液培養(yǎng)基吸附菌體

菌落完全培養(yǎng)基

A.影印接種法和稀釋涂布平板法相似，每個(gè)菌落都由單個(gè)菌體發(fā)育而來(lái)

B.過(guò)程②培養(yǎng)時(shí)絲絨布先轉(zhuǎn)印至完全培養(yǎng)基上再轉(zhuǎn)印到基本培養(yǎng)基上

C.應(yīng)從完全培養(yǎng)基上挑選出氨基酸缺陷型菌株用于后續(xù)的培養(yǎng)和研究

D.實(shí)驗(yàn)結(jié)束后對(duì)培養(yǎng)皿進(jìn)行消毒處理后即可再次使用或者廢棄

7.飲用被細(xì)菌污染的水后，細(xì)菌在消化道內(nèi)會(huì)繁殖并產(chǎn)生毒素，引起急性腸胃炎。某同學(xué)利

用圖1所示方法，檢測(cè)飲用水的細(xì)菌含量,圖2為不同稀釋度下得到的平板。下列相關(guān)敘述不

正確的是（）

1mL1mL1mL1mL

圖1圖2

A.配制圖1所示固體培養(yǎng)基時(shí)，需要先調(diào)整到適宜的pH,再分裝、滅菌

B.圖1中①?③三個(gè)培養(yǎng)皿菌落數(shù)的平均值乘稀釋倍數(shù)即為樣品中細(xì)菌數(shù)

C.圖2是稀釋涂布平板法的結(jié)果，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)比活菌的實(shí)際數(shù)目要少

D.圖2所示的平板中，a和c的計(jì)數(shù)結(jié)果不適合用于計(jì)算樣品中的細(xì)菌數(shù)

8.如圖表示從土壤中分離出能分解石油的微生物的實(shí)驗(yàn)操作過(guò)程：在某地土壤中取樣后，經(jīng)

過(guò)多次稀釋?zhuān)瑢⑾♂屢航臃N到培養(yǎng)基上，經(jīng)過(guò)一定條件培養(yǎng)后，在培養(yǎng)基上發(fā)現(xiàn)①②③④⑤五

個(gè)菌落及透明圈。下列敘述錯(cuò)誤的是（）

99mL4.5mL4.5mL4.5mL

無(wú)菌水無(wú)菌水無(wú)菌水無(wú)菌水

A.實(shí)驗(yàn)所用的土壤樣本應(yīng)選自常被石油污染的土壤

B.通過(guò)稀釋涂布平板法接種的微生物已被稀釋IO4倍

C.該實(shí)驗(yàn)所用培養(yǎng)基的營(yíng)養(yǎng)成分中唯一碳源來(lái)自石油

D.圖示五個(gè)菌落中，菌落⑤產(chǎn)生的酶分解石油的能力最強(qiáng)

9.生物興趣小組設(shè)計(jì)了一個(gè)利用作物秸稈生產(chǎn)燃料乙醇的小型實(shí)驗(yàn)。其主要步驟是：先將粉

碎的作物秸稈堆放在底部有小孔的托盤(pán)中，噴水浸潤(rùn)、接種菌T,培養(yǎng)一段時(shí)間后（清水淋洗

時(shí)菌T不會(huì)流失），在裝有淋洗液的瓶中接種酵母菌，進(jìn)行乙醇發(fā)酵。下列說(shuō)法正確的是（）

浸潤(rùn)、接種菌T清水淋洗

淋洗液自里電喜女乙醇

A.菌T可產(chǎn)生分解纖維素的酶，其分解產(chǎn)物是酵母菌的碳源

B.為了不破壞淋洗液中的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，對(duì)淋洗液進(jìn)行巴氏消毒

C.為提高發(fā)酵的乙醇產(chǎn)量，需始終保持發(fā)酵瓶處于密閉狀態(tài)

D.發(fā)酵后，產(chǎn)生的乙醇使澳麝香草酚藍(lán)溶液由藍(lán)變綠再變黃

10.某研究小組為研究“使用公筷對(duì)餐后菜品細(xì)菌數(shù)量的影響”，進(jìn)行了如下實(shí)驗(yàn)：①配制培養(yǎng)

基并進(jìn)行滅菌處理；②設(shè)置對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組進(jìn)行相關(guān)操作；③適宜條件培養(yǎng)一段時(shí)間，統(tǒng)計(jì)各

組平板上菌落的平均數(shù)。下列敘述正確的是（）

A.①過(guò)程所使用的培養(yǎng)基為選擇培養(yǎng)基

B.②過(guò)程中采用平板劃線(xiàn)法進(jìn)行接種

C.在培養(yǎng)基上進(jìn)行計(jì)數(shù)后所得菌落數(shù)少于實(shí)際活菌數(shù)

D.使用公筷可以防止傳染病的原理是切斷細(xì)菌的傳染源

11.谷氨酸是生產(chǎn)谷氨酸鈉（味精）的原料，運(yùn)用發(fā)酵工程生產(chǎn)谷氨酸需要用到谷氨酸棒狀桿菌,

下圖1是利用玉米淀粉作為材料制備谷氨酸的流程圖。圖2是細(xì)菌的增長(zhǎng)曲線(xiàn)圖，其中階段3

表示穩(wěn)定期，是代謝產(chǎn)物（如谷氨酸）大量積累的時(shí)期。下列敘述錯(cuò)誤的是（）

無(wú)機(jī)鹽笥種

玉米初一廢贏IT谷氨酸

淀粉

維生\素B尿/素?zé)oX菌空氣

圖1

A.谷氨酸棒狀桿菌與醋酸菌的代謝類(lèi)型相同

B.培養(yǎng)谷氨酸棒狀桿菌和其他所有微生物時(shí)均需要添加維生素B

C.發(fā)酵工程的中心環(huán)節(jié)是接種菌種之后的發(fā)酵過(guò)程

D.在穩(wěn)定期添加營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)、流出發(fā)酵液有助于提高谷氨酸產(chǎn)量

12.某科研團(tuán)隊(duì)在熱帶雨林土壤中分離獲得了高效分解纖維素的細(xì)菌，為探究影響其纖維素酶

活性的條件，設(shè)計(jì)了如表所示的實(shí)驗(yàn)。下列敘述錯(cuò)誤的是（）

試管底物和試劑實(shí)驗(yàn)條件

1纖維素+2mL纖維素酶溶液30℃水??；pH=7

2纖維素+2mL纖維素酶溶液①_____;pH=3

3纖維素+2mL纖維素酶溶液0。。水浴；pH=?______

A.若試管1和試管2形成對(duì)比實(shí)驗(yàn)，則①為30℃水浴處理

B.實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，試管1中的纖維素含量可能最低

C.試管3中纖維素酶的空間結(jié)構(gòu)在低溫條件下遭到破壞

D.可增加設(shè)置其他溫度和pH的試管以完善該實(shí)驗(yàn)

13.谷氨酰胺酶（PG酶）是一種催化L-B-谷氨酰胺水解成L-谷氨酸和氨的酶，能增大蛋白質(zhì)的

溶解性，提高食品工業(yè)中蛋白質(zhì)的利用率。研究人員利用谷氨酰胺-甘氨酸（谷氨酰胺-甘氨酸遇

熱易分解）為唯一氮源從土壤中篩選產(chǎn)PG酶的金黃桿菌，實(shí)驗(yàn)過(guò)程如圖所示。下列敘述錯(cuò)誤的

是（）

稀釋培養(yǎng)基1培養(yǎng)基II培養(yǎng)基山

A.該實(shí)驗(yàn)不僅篩選出了產(chǎn)PG酶的金黃桿菌，并且還對(duì)其進(jìn)行了計(jì)數(shù)

B.金黃桿菌在培養(yǎng)基I和ni中的生長(zhǎng)速度高于在培養(yǎng)基n的生長(zhǎng)速度

c.培養(yǎng)基i~in中的氮源相同，三種培養(yǎng)基都是選擇培養(yǎng)基

D.PG酶的活性可以用單位時(shí)間內(nèi)催化L-B-谷氨酰胺水解生成氨的數(shù)量來(lái)表示

14.柑橘酸腐病是由白地霉引起的柑橘貯藏期常見(jiàn)的病害之一?？咕氖且环N抑菌活性強(qiáng)、無(wú)

環(huán)境污染的生物多肽，目前已用于多種農(nóng)業(yè)病菌的防治。研究人員研究了抗菌肽對(duì)白地霉的抑

菌效果，并且對(duì)其作用機(jī)制進(jìn)行了探究?；卮鹣铝袉?wèn)題：

利用基因工程合成抗菌肽時(shí)，基本流程為：克隆目的基因一導(dǎo)入枯草桿菌一篩選菌種一誘導(dǎo)抗

菌肽表達(dá)一分離純化一功能研究。

(1)白地霉從柑橘中獲得其生長(zhǎng)繁殖所需的水、無(wú)機(jī)鹽、—和—等營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。

(2)為研究抗菌肽對(duì)白地霉的抑菌效果，現(xiàn)用無(wú)菌打孔器在果實(shí)相同部位打孔，每個(gè)打孔

處接種相同體積的處理液，比較15天后的病斑直徑。各組處理及結(jié)果見(jiàn)表。

組別12345

接種一定體抗菌肽溶液與病先加入抗菌肽溶抗菌肽溶液與病原

接種處理

積的病原菌原菌抱子懸浮液液,2h后接種病原X菌抱子懸浮液混合，

方式

抱子懸浮液混合后直接接種菌抱子懸浮液培養(yǎng)2h后接種

15天后

病斑直徑41.313.929.328.711.2

/mm

表中數(shù)據(jù)表明抗菌肽對(duì)白地霉有一定的抑菌效果，且抑菌效果與抗菌肽、病原菌抱子懸浮

液接種順序有關(guān)，表中X為。與第2組相比，第5組抑菌效果更好的可能原因

是。

(3)一般情況下，電導(dǎo)率和離子濃度呈正相關(guān)，通過(guò)測(cè)量溶液電導(dǎo)率可以反映出溶液中離

子濃度的大小。研究人員將白地霉抱子與抗菌肽在無(wú)菌水中混合，測(cè)定電導(dǎo)率，培養(yǎng)一段時(shí)間

后，再次測(cè)定電導(dǎo)率，結(jié)果發(fā)現(xiàn)電導(dǎo)率明顯升高，據(jù)此推測(cè)抗菌肽抑制白地霉抱子的作用機(jī)制

可能是。

15.為調(diào)查某地人工湖的水質(zhì)狀況，科研小組進(jìn)行了該湖水樣中的細(xì)菌培養(yǎng)、分離及計(jì)數(shù)等工

作?；卮鹣铝袉?wèn)題：

(1)在細(xì)菌培養(yǎng)時(shí)，培養(yǎng)基中能同時(shí)提供碳源、氮源的成分是(填“蛋白膝”“葡萄糖”或

“NaNOV）。通常，制備培養(yǎng)基時(shí)要根據(jù)所培養(yǎng)細(xì)菌的不同來(lái)調(diào)節(jié)培養(yǎng)基的pH,其原因是0

（2）通常采用—法檢測(cè)水樣中細(xì)菌含量。在接種前應(yīng)隨機(jī)取若干滅菌后的空白平板先行培

養(yǎng)一段時(shí)間，這樣做的目的是。

（3）在進(jìn)行樣品稀釋時(shí)，取10g水樣，加稀釋得到101倍稀釋液，再?gòu)闹形　ú?/p>

作過(guò)程）得到102倍稀釋液，依次類(lèi)推獲得105倍稀釋液，在該稀釋液倍數(shù)下，取3個(gè)平板分別

接種樣品溶液0.1mL,培養(yǎng)一段時(shí)間后，平板上長(zhǎng)出的菌落數(shù)分別是156、178、191,則每克

樣品中的細(xì)菌數(shù)量為個(gè)。

（4）科研人員將得到的菌株接種到液體培養(yǎng)基中并混勻，一部分進(jìn)行靜置培養(yǎng)，另一部分

進(jìn)行振蕩培養(yǎng)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，振蕩培養(yǎng)的細(xì)菌比靜置培養(yǎng)的細(xì)菌生長(zhǎng)速度快。主要原因可能是一

（寫(xiě)出2點(diǎn)即可）

題組二基因工程

1.下列關(guān)于“DNA片段的擴(kuò)增及電泳鑒定”實(shí)驗(yàn)敘述錯(cuò)誤的是（）

A.PCR過(guò)程中模板DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)未發(fā)生改變

B.PCR擴(kuò)增時(shí)需通過(guò)離心將各組分集中在微量離心管的底部

C.制備瓊脂糖凝膠時(shí)，需待凝膠溶液稍冷卻后加入適量的核酸染料混勻

D.可通過(guò)在紫外燈下觀察DNA條帶的分布及粗細(xì)程度來(lái)評(píng)價(jià)擴(kuò)增的結(jié)果

易錯(cuò)分析：PCR的原理：利用DNA半保留復(fù)制原理，因此新合成的兩個(gè)DNA分子中，一條

鏈?zhǔn)桥f的而另外一條鏈?zhǔn)切碌摹?/p>

2.據(jù)研究，W基因在植物發(fā)育和逆境應(yīng)答過(guò)程中發(fā)揮重要作用。研究人員將W基因的啟動(dòng)

子（PW）與GUS基因相連，構(gòu)建擬南芥PW-GUS融合植株（GUS為報(bào)告基因，其表達(dá)產(chǎn)物可催

化無(wú)色底物變藍(lán)），用無(wú)色底物處理擬南芥幼苗的根，探究W基因在擬南芥缺鐵脅迫中的表達(dá)

水平，下列敘述第誤的是（）

A.擴(kuò)增W基因啟動(dòng)子需2種引物，并在引物3,端加入酶切位點(diǎn)

B.PW和GUS基因進(jìn)行雙酶切后，可通過(guò)T4DNA連接酶連接

C.培養(yǎng)擬南芥無(wú)菌苗的MS固體培養(yǎng)基需要用高壓蒸汽滅菌法滅菌

D.通過(guò)觀察根藍(lán)色深淺確認(rèn)W基因在擬南芥缺鐵脅迫中的表達(dá)水平

3.數(shù)字PCR技術(shù)被稱(chēng)為第三代PCR,在核酸定量檢測(cè)中具有突出優(yōu)勢(shì)。該技術(shù)通過(guò)將一個(gè)樣

本稀釋分成幾十至幾萬(wàn)份，并分配到不同的反應(yīng)單元，每個(gè)單元包含一個(gè)或多個(gè)拷貝的目標(biāo)分

子（DNA模板），在每個(gè)反應(yīng)單元中分別對(duì)目標(biāo)分子進(jìn)行PCR擴(kuò)增，擴(kuò)增結(jié)束后對(duì)各個(gè)反應(yīng)單

元的熒光信號(hào)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)算初始樣品中靶標(biāo)分子的拷貝數(shù)。據(jù)此分析，下列說(shuō)法正確

的是（）

A.數(shù)字PCR技術(shù)僅適用于樣本中目標(biāo)分子含量較高的材料

B.數(shù)字PCR技術(shù)遵循的基本原理是DNA的邊解旋邊復(fù)制

C.每個(gè)單元中加入等量的4種核糖核昔酸溶液作為擴(kuò)增原料

D.每個(gè)單元中目標(biāo)分子的兩條子鏈合成都是從5,端向3,端延伸

4.“篩選”是生物技術(shù)與工程中常用的技術(shù)手段。下列敘述錯(cuò)誤的是（）

A.胚胎移植前，需對(duì)通過(guò)體外受精或其他方式得到的胚胎進(jìn)行質(zhì)量篩選

B.制備單克隆抗體時(shí)，需從分子水平篩選能產(chǎn)生多種抗體的雜交瘤細(xì)胞

C.培育轉(zhuǎn)基因抗蟲(chóng)棉時(shí)，需從分子水平及個(gè)體水平進(jìn)行篩選

D.發(fā)酵生產(chǎn)中，性狀優(yōu)良的菌種可以從自然界中篩選

5.蝦青素可由供胡蘿卜素在供胡蘿卜素酮化酶（BKT）和供胡蘿卜素羥化酶（CRTR-B）的作用下

轉(zhuǎn)化而來(lái)，具有抗衰老、增強(qiáng)免疫等功能。杜氏鹽藻是單細(xì)胞浮游植物，生長(zhǎng)快，易培養(yǎng)，能

大量合成供胡蘿卜素?？蒲腥藛T利用“無(wú)縫克隆技術(shù)”（如圖1）構(gòu)建含BKT基因和CRTR-B基因

的表達(dá)載體（如圖2,3）,導(dǎo)入杜氏鹽藻，以實(shí)現(xiàn)蝦青素的工廠(chǎng)化生產(chǎn)，回答下列問(wèn)題。

①??—*,??—⑦

缸[⑥,____⑥

上游同源序列2BKT基因CRTR-B基因下游同源序列2

⑴獲取目的基因：紅球藻是天然蝦青素的重要來(lái)源，提取紅球藻的總DNA為—，設(shè)計(jì)

特異性引物擴(kuò)增BKT基因和CRTR-B基因，此過(guò)程需要—（至少寫(xiě)兩種）。

⑵構(gòu)建轉(zhuǎn)化載體:

①PCR獲取抗除草劑基因過(guò)程中，為確?；騼啥司哂兴柰葱蛄?，需在引物的一端

添加對(duì)應(yīng)的同源序列。若將來(lái)需要將抗除草劑基因能夠從重組質(zhì)粒中切除，還需要在基因兩側(cè)

加入限制酶識(shí)別序列，則擴(kuò)增抗除草劑基因時(shí)，設(shè)計(jì)的引物序列（5,-3,）為

A.抗除草劑基因部分序列+限制酶識(shí)別序列+同源序列

B.同源序列+抗除草劑基因部分序列+限制酶識(shí)別序列

C.同源序列+限制酶識(shí)別序列+抗除草劑基因部分序列

②科研人員利用“無(wú)縫克隆技術(shù)”同時(shí)將BKT基因和CRTR-B基因插入質(zhì)粒，形成的重組

質(zhì)粒對(duì)應(yīng)部位如圖2所示，推測(cè)此過(guò)程擴(kuò)增CRTR-B基因所用的引物為—o

③最終形成的重組質(zhì)粒如圖3所示，其中atpA啟動(dòng)子和psbA啟動(dòng)子均為杜氏鹽藻葉綠體

啟動(dòng)子，選用內(nèi)源性啟動(dòng)子的目的是—o

(3)準(zhǔn)備受體細(xì)胞：選取初始杜氏鹽藻涂布到杜氏鹽藻固體培養(yǎng)基進(jìn)行第一次培養(yǎng)，一段

時(shí)間后，挑取生長(zhǎng)良好的單藻落到杜氏鹽藻液體培養(yǎng)基中繼續(xù)培養(yǎng)。期間可取藻液滴入血細(xì)胞

計(jì)數(shù)板，在顯微鏡下進(jìn)行計(jì)數(shù)，第二次培養(yǎng)的目的是—。

(4)目的基因?qū)爰跋嚓P(guān)檢測(cè)：采用基因槍法將重組質(zhì)粒導(dǎo)入杜氏鹽藻葉綠體，一段時(shí)間

后，先用含—的培養(yǎng)基初篩已轉(zhuǎn)化的杜氏鹽藻，然后采用—技術(shù)檢測(cè)是否成功轉(zhuǎn)錄出隹胡

蘿卜素酮化酶和供胡蘿卜素羥化酶的mRNAo

(5)葉綠體轉(zhuǎn)化是植物基因工程的新熱點(diǎn)，葉綠體的諸多特點(diǎn)為葉綠體轉(zhuǎn)化提供優(yōu)勢(shì)，如

葉綠體基因組小，功能清晰，使基因操作方便；葉綠體具有自我復(fù)制功能，一個(gè)植物細(xì)胞可含

有多個(gè)葉綠體，每個(gè)葉綠體中含有多個(gè)基因組，可大大提高—；另外，葉綠體基因位于細(xì)胞

質(zhì)中，可有效避免—。

6.科研人員利用圖1所示材料構(gòu)建重組質(zhì)粒并導(dǎo)入大腸桿菌，以期獲得能監(jiān)測(cè)生物組織或環(huán)

境中四環(huán)素水平的“報(bào)警器”。限制酶識(shí)別序列及切割位點(diǎn)如下表。TetR基因是一種轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)基

因，GFp基因?yàn)榫G色熒光蛋白基因，Ampr為氨葦青霉素抗性基因，ori為復(fù)制原點(diǎn)。請(qǐng)回答下

列問(wèn)題：

DNA片段1

DNA片段2

限制酶EcoRIXbaISpeIBamHI

5'…GJAATTC...3，5'...T1CTAGA...3'5'...AICTAGT...3'5，...G|GATCC...3/

識(shí)別序列及切割位點(diǎn)

3'...CTTATG…5'3'...AGATCTT...5,3，…TGATCTA..53'...CCTAGTG…5'

（1）使用工具酶拼接DNA片段1和2,拼接后的片段連接處部分序列為5'—3,（寫(xiě)出6

個(gè)堿基），TetR基因和GFP基因轉(zhuǎn)錄的模板鏈—（“是”或“不是"）該拼接DNM的同一條鏈。

（2）構(gòu)建重組質(zhì)粒時(shí)，選擇—對(duì)質(zhì)粒和拼接的DNA片段進(jìn)行酶切，在DNA連接酶的作

用下恢復(fù)—鍵。再根據(jù)—的結(jié)果判斷重組質(zhì)粒的大小是否符合預(yù)期。

（3）將重組質(zhì)粒導(dǎo)入經(jīng)—理的大腸桿菌后，在含—的固體培養(yǎng)基中篩選出工程菌。

（4）工程菌監(jiān)測(cè)四環(huán)素的原理如圖2,當(dāng)環(huán)境中含四環(huán)素時(shí)，該大腸桿菌工程菌—（能/不

能）發(fā)出熒光，其原因是

素

四

環(huán)

—

TetR蛋白

I

圖注：

-A促進(jìn)

——I抑制

啟動(dòng)子1TetR基因啟動(dòng)子2GFP基因

圖2

7.細(xì)菌中的蛋白激酶Y感受外界刺激后，利用ATP將特異性底物A蛋白磷酸化，改變A蛋

白的活性從而應(yīng)答外界刺激，調(diào)控細(xì)菌的生長(zhǎng)。研究者將Y基因（編碼蛋白激酶Y）與GFP基因

（編碼綠色熒光蛋白）拼接成Y-GFP融合基因（Y-GFP基因），導(dǎo)入載體,并表達(dá)出融合蛋白（Y-GFP

蛋白），以分析蛋白激酶Y的功能，實(shí)驗(yàn)過(guò)程如圖所示?；卮鹣铝袉?wèn)題。

啟動(dòng)子EcorI735bp

BamH1

XhoI丫基因茨

終止子EcorI

53'GFP基因

3

步

瞿一

Y-GFP基因累二IIIIIIIIIIIIIL「3'

復(fù)制原廣5Z

I酶切，連接，轉(zhuǎn)化大腸桿菌

篩選菌株，純化Y-GFP蛋白

注：“+”表示有,Y-GFP蛋白與A蛋白等反應(yīng)，檢測(cè)結(jié)果

“一”表示無(wú)

Y-GFP蛋白++

A蛋白-+

步-ATP+

建53.OkDaY-GFP蛋白

AS蚩白

25.OkDaA蛋白ATPADP

泳道①②③④

(1)Y基因含有735個(gè)堿基對(duì)(bp),其編碼的肽鏈含有個(gè)氨基酸。通過(guò)PCR分別擴(kuò)

增Y基因與GFP基因，配制的兩個(gè)反應(yīng)體系中不同的有(填標(biāo)號(hào))。

a.模板b.引物c.DNA聚合酶d.反應(yīng)緩沖液

(2)構(gòu)建Y基因與GFP基因的融合基因時(shí)，應(yīng)將Y基因中編碼終止密碼子的序列刪除，理

由是0

(3)據(jù)圖步驟一分析，為確保Y-GFP基因插入載體后完整表達(dá)，在構(gòu)建重組基因表達(dá)載體

時(shí)不能選擇EcoRI限制酶，理由是o

(4)為檢測(cè)Y-GFP蛋白的激酶活性，用Y-GFP蛋白、A蛋白和ATP組合實(shí)驗(yàn)，四組實(shí)驗(yàn)的

條件及電泳結(jié)果如圖步驟二所示。磷酸化的A蛋白可被磷酸化抗體特異性識(shí)別。若Y-GFP蛋

白有激酶活性，則后續(xù)實(shí)驗(yàn)用磷酸化抗體檢測(cè)，能從電泳條帶檢測(cè)到信號(hào)的是泳道(從

泳道①-④中選填序號(hào))，從Y-GFP蛋白功能角度分析，理由是,利用表達(dá)的具

有綠色熒光的Y-GFP蛋白還可開(kāi)展的實(shí)驗(yàn)有(答出1個(gè)即可)。

8.石油進(jìn)入土壤后，會(huì)破壞土結(jié)構(gòu)，分散土粒，使土壤的透水性降低，而且石油中的有毒物

質(zhì)能通過(guò)農(nóng)作物進(jìn)入食物鏈，最終危害人類(lèi)。為解決石油污染問(wèn)題，某科研小組從被石油污染

較嚴(yán)重的土壤中分離出了高效分解石油的細(xì)菌操作過(guò)程如圖1所示。欲將高效分解石油的目的

基因?qū)氪竽c桿菌中。目的基因(轉(zhuǎn)錄時(shí)以乙鏈為模板)和運(yùn)載體質(zhì)粒的結(jié)構(gòu)如圖2所示，LacZ

基因編碼產(chǎn)生的酶可以催化無(wú)色的X-gal分解產(chǎn)生藍(lán)色物質(zhì)，使菌落呈現(xiàn)藍(lán)色，否則菌落為白

色。不同限制酶的識(shí)別序列及切割位點(diǎn)如表所示?；卮鹣铝袉?wèn)題:

取樣測(cè)

定石油

石油污染接種的含量

過(guò)的土壤

④無(wú)機(jī)固體

①制成細(xì)②擴(kuò)大③無(wú)機(jī)液體培養(yǎng)基+石油

菌總液培養(yǎng)培養(yǎng)基+石油恒溫培養(yǎng)⑤無(wú)機(jī)液體培養(yǎng)基+

振蕩培養(yǎng)石油振蕩培養(yǎng)

圖1

BamHIEcoRIMfeIHindm

甲鏈5'

乙鏈3'

KpnIW基因

注%/為氨茉青霉素抗性基因、ZacZ為夕半乳糖甘酶基因。

圖2

限制酶BamHIEcoRIMfeIKpnIHindlll

識(shí)別序列和切割位點(diǎn)GJGATTCGJAATTCCJAATTGGGTACJCAJAGCTT

⑴圖1中過(guò)程②配制培養(yǎng)基時(shí)，向培養(yǎng)基中加入的唯一碳源是。

⑵將石油污染過(guò)的土壤樣品進(jìn)行圖1中過(guò)程④的操作，目的是。

⑶根據(jù)題干提供的信息，在構(gòu)建重組質(zhì)粒前，應(yīng)選擇限制酶分別對(duì)質(zhì)粒和目的基因

進(jìn)行切割，依據(jù)是o

(4)若用EcoRI和MfeI對(duì)按上述要求構(gòu)建好的一個(gè)重組質(zhì)粒進(jìn)行完全酶切，會(huì)切成

個(gè)片段。

(5)將重組質(zhì)粒導(dǎo)入大腸桿菌后，接種到添加了等成分的培養(yǎng)基上，若呈現(xiàn)_____色的

菌落，即為含有重組質(zhì)粒的大腸桿菌菌落。

9.某自花傳粉植物的藥物P的合成依次受染色體上顯性基因A、B、D控制。研究人員通過(guò)

基因工程構(gòu)建含質(zhì)粒-A-B-D的大腸桿菌生產(chǎn)藥物P,下圖為基因表達(dá)載體的構(gòu)建過(guò)程，其中

AmpR代表氨葦青霉素抗性基因，TetR表示四環(huán)素抗性基因。引物1序列為5,-GGTCTAGACCTAGG-

3S引物2序列為5,-GGCCATGGGGTTCC-3,。限制酶的識(shí)別序列及切割位點(diǎn)(從左向右均為5—3，)

為KpnI(GGTAC」C)、XbaI(T’CTAGA)、BamHI(G’GATCC)、NeoI(C’CATGG)?；駼和D轉(zhuǎn)錄

的模板分別是a鏈和d鏈。根據(jù)所學(xué)知識(shí)回答下列問(wèn)題：

(l)PCR擴(kuò)增目的基因時(shí)，引物的作用是—。常采用—來(lái)鑒定PCR的產(chǎn)物。

(2)為保證A基因正確連接到質(zhì)粒上，需利用PCR1對(duì)A基因進(jìn)行改造，所用引物1和引

物2上分別含有一酶的識(shí)別序列，則據(jù)圖判斷A基因轉(zhuǎn)錄的模板鏈可能是一。一個(gè)A基

因經(jīng)過(guò)4輪循環(huán)后,得到的子代DNA分子中，只含有1種引物的DNA分子所占的比例為。

(3)為了實(shí)現(xiàn)圖中B基因和D基因的重疊延伸，PCR2和PCR3過(guò)程中需要分別在引物―

的5,端添加互補(bǔ)序列。過(guò)程②復(fù)性過(guò)程中會(huì)形成多種雜交雙鏈，其中能延伸得到B-D融合基因

的為圖中(填字母)雜交形成的DNAo

(4)為保證B-D融合基因與質(zhì)粒-A按圖中方式連接，需要在引物3和引物5中分別添加限

制酶—的識(shí)別序列。若篩選導(dǎo)入基因A-B-D的大腸桿菌，可將大腸桿菌依次放在含有氨茉

青霉素、四環(huán)素的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，篩選的大腸桿菌即為目的菌。

題組三細(xì)胞工程與胚胎工程

1.細(xì)胞培養(yǎng)人造肉是指在特定的培養(yǎng)條件下，在培養(yǎng)基中利用動(dòng)物干細(xì)胞培養(yǎng)出來(lái)的動(dòng)物肉。

這種肉和真正的肉類(lèi)有很多相似之處，目前尚處于研究階段。科研人員使用豬肌肉干細(xì)胞，成

功研發(fā)出了我國(guó)第一塊細(xì)胞培養(yǎng)人造肉。有關(guān)敘述錯(cuò)誤的是()

A.培養(yǎng)豬肌肉干細(xì)胞時(shí)使用液體培養(yǎng)基，通常需加入血清等天然成分

B.在培養(yǎng)豬肌肉干細(xì)胞時(shí)需要在95%空氣和5%CO2的混合氣體培養(yǎng)箱中培養(yǎng)

C.用于傳代培養(yǎng)的細(xì)胞都需要用胰蛋白酶等處理后再用離心法收集

D.幼齡動(dòng)物的肌肉干細(xì)胞增殖能力強(qiáng)，可用于培養(yǎng)人造肉

易錯(cuò)分析：傳代培養(yǎng)指的是將分瓶后的細(xì)胞培養(yǎng)稱(chēng)為傳代培養(yǎng)。在進(jìn)行傳代培養(yǎng)時(shí)，懸浮

培養(yǎng)的細(xì)胞直接用離心法收集；貼壁細(xì)胞需要重新用胰蛋白酶等處理，使之分散成單個(gè)細(xì)胞，

然后再用離心法收集。之后，將收集的細(xì)胞制成細(xì)胞懸液，分瓶培養(yǎng)。

2.動(dòng)物體細(xì)胞融合后染色體核型不穩(wěn)定，來(lái)自某一方的染色體往往隨機(jī)丟失一至多條這種現(xiàn)

象常應(yīng)用于基因的定位。在甲型流感單克隆抗體的制備過(guò)程中，雜交瘤細(xì)胞在克隆化培養(yǎng)過(guò)程

中來(lái)自B淋巴細(xì)胞的染色體往往出現(xiàn)隨機(jī)丟失現(xiàn)象。下列敘述正確的是（）

A.注射甲型流感疫苗后，應(yīng)立即從相關(guān)動(dòng)物的脾臟中獲得B淋巴細(xì)胞

B.雜交瘤細(xì)胞在培養(yǎng)過(guò)程中出現(xiàn)接觸抑制現(xiàn)象時(shí)可使用胰蛋白酶處理

C.若雜交瘤細(xì)胞丟失某染色體后不能分泌單克隆抗體，則該基因位于該染色體上

D.利用抗體檢測(cè)篩選的雜交瘤細(xì)胞克隆化培養(yǎng)將具有持續(xù)產(chǎn)生甲型流感抗體的能力

3.天山雪蓮是我國(guó)特有瀕危物種，含有黃酮類(lèi)等多種次生代謝物，具有多種醫(yī)療功效。研究

人員通過(guò)植物細(xì)胞工程技術(shù)對(duì)天山雪蓮進(jìn)行了開(kāi)發(fā)、利用。下列敘述錯(cuò)誤的是（）

A.可取雪蓮的愈傷組織在培養(yǎng)基上培養(yǎng)，誘導(dǎo)其長(zhǎng)出芽和根，進(jìn)而發(fā)育成完整植株

B.植物組織培養(yǎng)不同階段的培養(yǎng)基中植物激素的濃度及比例有所不同

C.利用植物組織培養(yǎng)技術(shù)快速繁殖雪蓮不受季節(jié)、氣候等自然因素的限制

D.利用雪蓮任何部位的細(xì)胞進(jìn)行植物細(xì)胞培養(yǎng)均可持續(xù)獲得黃酮類(lèi)物質(zhì)

4.下列有關(guān)細(xì)胞工程技術(shù)的敘述正確的是（）

A.動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中加入血清的培養(yǎng)基需要進(jìn)行高壓蒸汽滅菌

B.大量制備一種單克隆抗體需要大量的B細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞

C.核移植中的“去核”是指去除卵母細(xì)胞中的紡錘體-染色體復(fù)合物

D.受體母畜對(duì)移入子宮的外來(lái)胚胎會(huì)發(fā)生免疫排斥反應(yīng)

5.我國(guó)科學(xué)家利用體細(xì)胞核移植技術(shù)成功克隆了瀕臨滅絕的某地方牛種。下列敘述錯(cuò)誤的是

（）

A.從該牛種耳上取的體細(xì)胞培養(yǎng)室需在合成培養(yǎng)基中加入血清

B.從牛卵巢中采集的卵母細(xì)胞需要在體外培養(yǎng)至Mil期

C.代孕母牛為重構(gòu)胚發(fā)育提供空間和營(yíng)養(yǎng)，不會(huì)影響犢牛的遺傳物質(zhì)

D.胚胎移植前需要對(duì)供體牛與受體牛進(jìn)行同期發(fā)情處理

易錯(cuò)分析：體細(xì)胞核移植技術(shù)中，通常不需要對(duì)供體進(jìn)行同期發(fā)處理。

6.科學(xué)家用蝸牛提取液處理煙草葉片和擬南芥根得到原生質(zhì)體，兩種原生質(zhì)體經(jīng)PEG處理后

篩選出雜種細(xì)胞，其分裂產(chǎn)生的愈傷組織經(jīng)誘導(dǎo)形成再生植株。經(jīng)鑒定，再生植株同時(shí)表現(xiàn)出

煙草和擬南芥的部分性狀。下列敘述錯(cuò)誤的是（）

A.蝸牛提取液具有纖維素酶和果膠酶活性，可去除細(xì)胞壁獲得原生質(zhì)體

B.利用PEG處理可提高細(xì)胞膜的流動(dòng)性，從而促進(jìn)兩種原生質(zhì)體的融合

C.用較高濃度的細(xì)胞分裂素處理雜種細(xì)胞產(chǎn)生的愈傷組織，有利于根的分化

D.雜種細(xì)胞誘導(dǎo)形成具有雙親部分性狀的再生植株是基因選擇性表達(dá)的結(jié)果

7.我國(guó)已將利妥昔單抗、重組人凝血因子VM、重組人生長(zhǎng)激素等多款生物藥納入藥品集中大

量采購(gòu)。利妥昔單抗主要用于治療多種淋巴癌，下列有關(guān)單克隆抗體制備的敘述，正確的是（）

A.制備單克隆抗體時(shí)要用到骨髓瘤細(xì)胞，是因?yàn)槠淠軣o(wú)限增殖

B.細(xì)胞融合結(jié)束后，兩兩融合的細(xì)胞都能在選擇培養(yǎng)基上存活

C.利妥昔單抗能準(zhǔn)確識(shí)別抗原，只能用于淋巴癌的治療，不能用于淋巴癌的診斷

D.給小鼠反復(fù)注射淋巴癌細(xì)胞，從小鼠血清中分離出的抗體為利妥昔單抗

8.科研人員研究了不同濃度的聚乙二醇（PEG）對(duì)沙打旺和紫花苜蓿原生質(zhì)體融合率的影響，實(shí)

驗(yàn)結(jié)果如圖，虛線(xiàn)代表最高融合率，異源融合率是指不同種的原生質(zhì)體發(fā)生融合的概率，已知

PEG濃度較高時(shí)對(duì)細(xì)胞有毒害作用。下列敘述錯(cuò)誤的是（）

記七異源融合率/%

PEG濃度/%

A.PEG融合法還可用于誘導(dǎo)骨髓瘤細(xì)胞與B細(xì)胞融合

B.不同種的原生質(zhì)體的融合依賴(lài)于細(xì)胞膜具有一定的流動(dòng)性

C.據(jù)圖可知，不同PEG濃度下同源融合率均大于異源融合率

D.PEG濃度為35%時(shí)誘導(dǎo)紫花苜蓿與沙打旺原生質(zhì)體融合的效果最好

9.成體組織細(xì)胞能夠被用于兩種不同意義的“克隆”，具體流程如圖所示。下列有關(guān)克隆的敘

述正確的是（）

■生殖性克隆

■0----牛犢

胚胎春入代孕

成體組織細(xì)胞

母體（子宮中）

細(xì)胞細(xì)胞

來(lái)自早期胚胎的細(xì)胞

分裂題

轉(zhuǎn)入培養(yǎng)皿中

胚胎

成年母體的去核細(xì)胞

卵母細(xì)胞I囂?）

治療性克隆

A.圖中含“紡錘體”的細(xì)胞為Mil期卵母細(xì)胞，圖中代孕母體不需要處理即可植入胚胎

B.經(jīng)“細(xì)胞融合”形成的重組細(xì)胞中，細(xì)胞質(zhì)中的遺傳物質(zhì)僅來(lái)自成年母體的卵母細(xì)胞

C.圖中“早期胚胎”內(nèi)部的空腔為囊胚腔，圖中兩種“克隆”均需要胚胎移植過(guò)程

D.圖中成體組織細(xì)胞需要培養(yǎng)，在培養(yǎng)前可用機(jī)械方法或用胰蛋白酶處理一段時(shí)間

10.隨著動(dòng)物細(xì)胞工程和胚胎工程的迅猛發(fā)展，用引進(jìn)的良種奶牛大量、快速繁殖滿(mǎn)足了我國(guó)

對(duì)奶類(lèi)的大量需求。下圖表示畜牧業(yè)生產(chǎn)上培育某種優(yōu)良種牛的兩種方法，相關(guān)分析錯(cuò)誤的是

（）

方法I

公牛（A牛）-------?精子\

V-受精卵----?胚胎一［I-E牛

激素「卵子/1

處理丹it?自

良種奶牛（B牛）三母牛子呂

芳濟(jì)￡..........匚苑每個(gè)'細(xì)遛稼.............

細(xì)胞,去核卵母細(xì)胞’

，―重構(gòu)胚」牛

良種奶牛（C牛）一＞乳腺細(xì)胞一細(xì)胞核/

A.通過(guò)方法I、n培育優(yōu)良種牛E和F的本質(zhì)都是有性生殖

B.方法I中B牛的卵子需培育到MH期才具備與精子受精的能力

C.在卵細(xì)胞膜和透明帶的間隙觀察到兩個(gè)極體可作為受精的標(biāo)志

D.方法I、II獲得的胚胎通常需培養(yǎng)至囊胚階段再移植入D牛的子宮內(nèi)

11.胚胎工程技術(shù)的應(yīng)用為優(yōu)良牲畜的大量繁殖提供了有效的解決辦法，如奶?；铙w采卵一體

外胚胎生產(chǎn)（OPU-IVP）技術(shù)，該技術(shù)流程如圖。已知雄性奶牛Y染色體上有一段雄性特異的高

度重復(fù)序列，依據(jù)該重復(fù)序列設(shè)計(jì)弓I物，建立了用于奶牛胚胎性別鑒定的PCR體系（SRY-PCR）。

下列敘述錯(cuò)誤的是（）

A.體外受精后，在透明帶和卵細(xì)胞膜間觀察到兩個(gè)極體說(shuō)明受精成功

B.活體采卵前誘導(dǎo)母牛超數(shù)排卵所注射的激素只能作用于特定細(xì)胞

C.取滋養(yǎng)層細(xì)胞進(jìn)行SRY-PCR,應(yīng)選擇結(jié)果為陽(yáng)性的胚胎進(jìn)行移植

D.受體母牛不會(huì)發(fā)生免疫排斥反應(yīng)，所以移植前不需要進(jìn)行免疫檢查

12.生物技術(shù)的進(jìn)步在給人類(lèi)帶來(lái)福祉的同時(shí)，也引起人們對(duì)它安全性及倫理問(wèn)題的關(guān)注。下

列敘述正確的是（）

A.證明轉(zhuǎn)基因食品安全比證明其不安全更容易

B.可用口味、顏色指標(biāo)判斷是否是轉(zhuǎn)基因作物

C.不允許、不接受進(jìn)行任何生殖性克隆人實(shí)驗(yàn)

D.在特殊情況下可利用轉(zhuǎn)基因技術(shù)制造致病菌

13.［多選］駱駝蓬分布在干旱和半干旱地區(qū)，能防風(fēng)固沙。駱駝蓬合成的多種生物堿具有抗腫

瘤作用?？蒲腥藛T利用駱駝蓬下胚軸進(jìn)行育苗和生物堿提取，過(guò)程如下圖。下列說(shuō)法錯(cuò)誤的是

（）

工簿胞一國(guó)1gg

__________

舞著髓旦回朝更嘉空繇望金遁

A.下胚軸切段需依次用酒精和次氯酸鈉進(jìn)行消毒處理

B.除培養(yǎng)基中植物激素比例不同外，進(jìn)行過(guò)程①③的其他條件相同

C.由無(wú)毒下胚軸經(jīng)組織培養(yǎng)獲得的駱駝蓬無(wú)毒幼苗可抵抗病毒的侵染

D.在①②③過(guò)程中利用PEG處理培養(yǎng)物，可以獲得染色體數(shù)加倍的駱駝蓬

14.［多選］華西牛是我國(guó)育種專(zhuān)家培育的具有完全自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)的專(zhuān)門(mén)化肉牛新品種，打破了

我國(guó)肉牛種源嚴(yán)重依賴(lài)進(jìn)口的局面。科研人員在生產(chǎn)中采取胚胎工程的手段實(shí)現(xiàn)了華西牛的快

速繁育。下列敘述正確的是（）

A.采集的華西牛精子需要進(jìn)行獲能處理后在適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)液中完成受精

B.可以采用孕激素對(duì)華西牛母牛進(jìn)行超數(shù)排卵處理，以發(fā)揮其繁殖潛力

C.受體母牛需健康且具有正常的繁殖能力，胚胎移植前需要對(duì)其進(jìn)行同期發(fā)情處理

D.犢牛的遺傳性狀由華西牛公牛及母牛決定，不受受體母牛的影響

15.“人造精子”是一種可替代精子使卵細(xì)胞“受精”的單倍體胚胎干細(xì)胞?？茖W(xué)家將某種動(dòng)物單

倍體胚胎干細(xì)胞注射到卵細(xì)胞中成功培育出健康的該種動(dòng)物。該技術(shù)不僅為動(dòng)物模型的獲得提

供了新手段，同時(shí)也為動(dòng)物生殖、遺傳與發(fā)育調(diào)控機(jī)理研究提供了新思路。右圖是科研人員利

用胚胎操作技術(shù)，通過(guò)兩種方式獲得重組細(xì)胞，進(jìn)而培育出該種動(dòng)物“人造精子”的流程。請(qǐng)回

答下列問(wèn)題:

減數(shù)分裂n中期0

卵母細(xì)胞單倍體擴(kuò)增總單倍體胚胎

細(xì)胞分選0干細(xì)胞系

⑴方式一成功獲得“人造精子”的關(guān)鍵操作是及時(shí)去除—的細(xì)胞核。

(2)方式二中選擇卵母細(xì)胞作為受體細(xì)胞的原因是卵母細(xì)胞具有(答兩點(diǎn))的優(yōu)點(diǎn)，操

作中注入完整的精子而非精子的細(xì)胞核，原因是—。

(3)目前，構(gòu)建成功的該動(dòng)物單倍體胚胎干細(xì)胞系，均為性染色為X染色體的細(xì)胞系，無(wú)

法獲得性染色體為Y的單倍體胚胎干細(xì)胞系，這與該生物Y染色體比X染色體短小有關(guān)。據(jù)

此推測(cè)可能的原因是。若將成功構(gòu)建的“人造精子”與卵細(xì)胞結(jié)合繁殖正常的二倍

體動(dòng)物，該動(dòng)物的性別是。

16.生命孕育的過(guò)程是神奇和復(fù)雜的，包括受精卵的形成和胚胎發(fā)育?；卮鹣铝袉?wèn)題：

(1)在受精過(guò)程中，為保證1個(gè)卵母細(xì)胞只結(jié)合1個(gè)精子，卵細(xì)胞會(huì)發(fā)生相關(guān)生理反應(yīng)，

發(fā)生這些生理反應(yīng)的結(jié)構(gòu)依次為、o

(2)受精卵形成后即在(填“卵巢”“輸卵管”或“子宮”)內(nèi)進(jìn)行有絲分裂，這一階段在透

明帶內(nèi)進(jìn)行，細(xì)胞只分裂不生長(zhǎng)，胚胎體積,以確保胚胎順利從受精場(chǎng)所適時(shí)輸出。

隨后，透明帶破裂、胚胎從中伸展出來(lái)繼續(xù)發(fā)育，這一過(guò)程稱(chēng)為o

⑶胚胎發(fā)育時(shí)，母體通過(guò)形成透明纖維層，防止胚胎細(xì)胞植入過(guò)深而損傷子宮內(nèi)膜；胚

胎的胎盤(pán)細(xì)胞則分泌人絨毛膜促性腺激素(HCG),抑制母體淋巴細(xì)胞的活動(dòng)；此后胎兒為了獲

得更多的養(yǎng)料，還會(huì)導(dǎo)致母體的血壓升高，促進(jìn)更多血液流入子宮，以獲得更多的營(yíng)養(yǎng)。

①胎盤(pán)是由囊胚的發(fā)育而成的。

②母體對(duì)胎兒不會(huì)發(fā)生免疫排斥反應(yīng)，由題分析，其原因可能是e

③HCG可通過(guò)腎小球從尿液中排出。用抗HCG單克隆抗體做成的“早早孕診斷試劑盒”,

在妊娠第8天就可以通過(guò)檢查尿液作出診斷。請(qǐng)簡(jiǎn)述利用從經(jīng)HCG免疫的小鼠體內(nèi)采集的B

淋巴細(xì)胞(簡(jiǎn)稱(chēng)B淋巴細(xì)胞)、小鼠骨髓瘤細(xì)胞制備抗HCG單克隆抗體的主要流程：(用

箭頭和文字表示)。

題組四生物與技術(shù)與工程綜合

1.(2024.北京?高考真題)啤酒經(jīng)酵母菌發(fā)酵釀制而成。生產(chǎn)中，需從密閉的發(fā)酵罐中采集酵母

菌用于再發(fā)酵，而直接開(kāi)罐采集的傳統(tǒng)方式會(huì)損失一些占比很低的獨(dú)特菌種。研究者探究了不

同氧氣含量下酵母菌的生長(zhǎng)繁殖及相關(guān)調(diào)控，以?xún)?yōu)化采集條件。

(1)酵母菌是兼性厭氧微生物，在密閉發(fā)酵罐中會(huì)產(chǎn)生________和CO2。有氧培養(yǎng)時(shí)，酵母

菌增殖速度明顯快于無(wú)氧培養(yǎng)，原因是酵母菌進(jìn)行有氧呼吸，產(chǎn)生大量_______。

(2)本實(shí)驗(yàn)中，采集是指取樣并培養(yǎng)4天。在不同的氣體條件下從發(fā)酵罐中采集酵母菌，

統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)(圖甲)。由結(jié)果可知，有利于保留占比很低菌種的采集條件是—o

700

有氧：18%02

500低氧:6%。2

300

3

0

有氧/有氧有氧/低氧無(wú)氧/低氧無(wú)氧/無(wú)氧

氣體條件(取樣培養(yǎng))

甲

(3)根據(jù)上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知，米集酵母菌時(shí)02濃度的陡然變化會(huì)導(dǎo)致部分菌體死亡。研究

者推測(cè)，酵母菌接觸02的最初階段，細(xì)胞產(chǎn)生的過(guò)氧化氫(H2O2)濃度會(huì)持續(xù)上升，使酵母菌

受損。已知H2O2能擴(kuò)散進(jìn)出細(xì)胞。研究者在無(wú)氧條件下從發(fā)酵罐中取出酵母菌，分別接種至

含不同濃度H2O2的培養(yǎng)基上，無(wú)氧培養(yǎng)后得到如圖乙所示結(jié)果。請(qǐng)判斷該實(shí)驗(yàn)?zāi)芊裢耆C實(shí)

上述推測(cè)，并說(shuō)明理由。

0mmol?L_,3.75mmol?L-15.00mmol?L達(dá)。?濃度

乙

（4）上述推測(cè)經(jīng)證實(shí)后，研究者在有氧條件下從發(fā)酵罐中取樣并分為兩組，A組菌液直接

滴加到H2O2溶液中，無(wú)氣泡產(chǎn)生；B組菌液有氧培養(yǎng)4天后，取與A組活菌數(shù)相同的菌液,

滴加到H2O2溶液中，出現(xiàn)明顯氣泡。結(jié)果說(shuō)明，酵母菌可通過(guò)產(chǎn)生______以抵抗H2O2的傷

害。

2.嵌合抗原受體-T細(xì)胞（CAR-T細(xì)胞）療法在人類(lèi)腫瘤治療中取得了重要突破。CAR-T細(xì)胞療

法是將CAR基因?qū)隩細(xì)胞成為CAR-T細(xì)胞，通過(guò)CAR蛋白上的scFv肽鏈（小肽不足以發(fā)

揮抗原作用，但能發(fā)揮抗體識(shí)別作用）特異性識(shí)別腫瘤細(xì)胞膜上的抗原，并通過(guò)CAR蛋白上的

其它肽鏈結(jié)構(gòu)激活CAR-T細(xì)胞繼而殺傷腫瘤細(xì)胞?；卮鹣铝袉?wèn)題：

⑴獲得含有scFv肽鏈的單克隆抗體，流程如圖。

丫4類(lèi)

驅(qū)動(dòng)細(xì)胞（人正常乳腺細(xì)胞）測(cè)試細(xì)胞

抽取腹水

反復(fù)免疫

第一組小鼠,取脾細(xì)胞，制

作雜交瘤細(xì)胞v*

------------?丫4類(lèi)

第二組小鼠

第一組小鼠反復(fù)免疫

第二組小鼠

抽取腹水

菜能

孵育.<

K類(lèi)、丫2類(lèi)、丫3類(lèi)+

測(cè)試細(xì)胞

（人乳腺癌細(xì)胞）

①圖中通過(guò)驅(qū)動(dòng)細(xì)胞和測(cè)試細(xì)胞反復(fù)免疫小鼠產(chǎn)生抗體的過(guò)程屬于（填“細(xì)胞”或

“體液”）免疫，參與該過(guò)程的免疫細(xì)胞來(lái)源于小鼠骨髓O實(shí)驗(yàn)小鼠機(jī)體產(chǎn)生免疫應(yīng)答的

過(guò)程中，輔助性T細(xì)胞的主要作用是o該實(shí)驗(yàn)最適用于篩選_____（填標(biāo)號(hào)）。

A.大鼠肝細(xì)胞區(qū)別于兔肝細(xì)胞特殊抗原的抗體

B.正常細(xì)胞區(qū)別于感染HIV細(xì)胞內(nèi)特殊抗原的抗體

C.衰老神經(jīng)細(xì)胞區(qū)別于正常神經(jīng)細(xì)胞抗原的抗體

②取第二組小鼠分離脾細(xì)胞，加入誘導(dǎo)脾細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞的融合。

(2)CAR基因的構(gòu)建，流程如下圖。

scFv基因片段多步操作________技術(shù)

----------,?|-P--C-R------1

雜交瘤細(xì)胞高特異性特異性高、結(jié)合激活T細(xì)胞激活T細(xì)胞

抗體DNA能力盅的scFv基因片段1基因片段2

基因片段

完整CAR基因

在設(shè)計(jì)添加CAR基因兩端限制酶識(shí)別序列并與表達(dá)載體正確連接的過(guò)程中，必須考慮的

有(填標(biāo)號(hào))。

A.PCR使用的上、下游引物需含限制酶識(shí)別序列

B.CAR基因內(nèi)可以含有引物所含限制酶識(shí)別序列

C.限制酶識(shí)別序列需位于載體啟動(dòng)子、復(fù)制原點(diǎn)和標(biāo)記基因內(nèi)

D.上、下游引物所含限制酶識(shí)別序列不同

E.CAR基因插入載體位點(diǎn)需位于啟動(dòng)子下游

(3)從免疫學(xué)角度分析，如果用高特異性抗體DNA直接構(gòu)建CAR基因，再通過(guò)載體導(dǎo)入

T細(xì)胞并穩(wěn)定表達(dá)，不但會(huì)使治療效果大幅降低，同時(shí)還會(huì)______o

3.研究人員利用基因編輯技術(shù)和體細(xì)胞克隆技術(shù)成功獲得了載脂蛋白E(ApoE)基因和低密度

脂蛋白受體(LDLR)基因雙敲除(即兩個(gè)基因都失活)的五指山小型豬，該小型豬在飼喂普通飼料

的情況下會(huì)出現(xiàn)高血脂，并能自發(fā)產(chǎn)生明顯的動(dòng)脈粥樣硬化(