JJF(津)3024-2023CalibrationSpecif天津市市場監(jiān)督管理委員會發(fā)布核酸定量熒光計CalibrationSpecificationforJJF(津)3024-2023JJF(津)3024-2023本規(guī)范主要起草人：常子棟(天津市計量監(jiān)督檢測科學(xué)研究院)趙雨佳(北京市計量檢測科學(xué)研究院)王曉冰(河北省計量監(jiān)督檢測研究院)參加起草人：姚堯(天津市計量監(jiān)督檢測科學(xué)研究院)王志鵬(天津市計量監(jiān)督檢測科學(xué)研究院)白玉潔(天津市計量監(jiān)督檢測科學(xué)研究院)I 1范圍 2概述 3計量特性 4校準(zhǔn)條件 4.1環(huán)境條件 4.2測量標(biāo)準(zhǔn)及其他設(shè)備 5校準(zhǔn)項目和校準(zhǔn)方法 5.2測量重復(fù)性 6校準(zhǔn)結(jié)果表達(dá) 7復(fù)校時間間隔 附錄A校準(zhǔn)記錄格式(推薦) 附錄B校準(zhǔn)證書內(nèi)頁格式(推薦) 附錄C示值誤差的不確定度評定示例 JJF1071-2010《國家計量校準(zhǔn)規(guī)范編寫規(guī)則》、JJF1001-2011《通用計量術(shù)語及定義》、JJF1059.1-2012《測量不確定度評定與表示》共同構(gòu)成支撐本規(guī)范制修訂工作的基礎(chǔ)性系列規(guī)范。本規(guī)范的制定，參考了JJF1836-2020《微量分光光度計校準(zhǔn)規(guī)范》和JJF1828-2020《ATP熒光檢測儀校準(zhǔn)規(guī)范》相關(guān)內(nèi)容。本規(guī)范為首次發(fā)布。1本規(guī)范適用于測量雙鏈DNA濃度在(10~100)ng/μL范圍的非擴(kuò)增型核酸定量熒光計的校準(zhǔn)。核酸定量熒光計(以下簡稱熒光計)的原理是熒光染料和核酸分子特異性結(jié)合后在特定波長下發(fā)光，發(fā)光強度與核酸濃度成正比，根據(jù)熒光強度可以推算出樣本中的核酸濃度。熒光計由光源、檢測倉、控制面板以及數(shù)據(jù)采集信號處理系統(tǒng)組成。儀器各項計量特性指標(biāo)見表1。計量項目計量特性示值誤差不超過±20%測量重復(fù)性注：以上計量特性要求是基于雙鏈DNA測量模式得到，僅供參考，不作為判定依據(jù)。4.1.1環(huán)境溫度：(15～30)℃。4.1.2相對濕度：(15～70)%。4.1.3供電電源：電壓(220±22)V,頻率(50±1)Hz。4.2.1核酸標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)：國家有證雙鏈DNA標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，濃度(10～100)ng/HL,相對擴(kuò)4.2.2移液器：(1～10)μL、(20～200)μL,經(jīng)計量檢定合格。2質(zhì)，每種標(biāo)物檢測3次，按照公式(1)計算。X——儀器3次測量值的算術(shù)平均值，ng/μL;該樣品重復(fù)檢測10次，按照公式(2)計算測量重復(fù)性。X——儀器10次測量值的算術(shù)平均值，ng/μL;3e)客戶的名稱和地址；f)被校對象的描述和明確標(biāo)識；收日期；h)如果與校準(zhǔn)結(jié)果的有效性和應(yīng)用有關(guān)時，應(yīng)對被校樣品的抽樣程序進(jìn)行說明；i)校準(zhǔn)所依據(jù)的技術(shù)規(guī)范的標(biāo)識，包括名稱及代號；j)本次校準(zhǔn)所用測量標(biāo)準(zhǔn)的溯源性及有效性說明；k)校準(zhǔn)環(huán)境的描述；1)校準(zhǔn)結(jié)果及其測量不確定度的說明；m)對校準(zhǔn)規(guī)范偏離的說明；n)校準(zhǔn)證書簽發(fā)人的簽名、職務(wù)或等效標(biāo)識以及簽發(fā)日期；o)校準(zhǔn)結(jié)果僅對被校對象有效的聲明；p)未經(jīng)實驗室書面批準(zhǔn)，不得部分復(fù)制證書或報告的聲明。建議復(fù)校時間間隔一般不超過一年。復(fù)校時間間隔的長短是由儀器的使用情況、使用者、儀器本身質(zhì)量等因素決定，送校單位也可根據(jù)實際使用情況自主決定復(fù)校時間間隔。如果儀器經(jīng)維修、更換重要部件或?qū)x器性能有懷疑時，應(yīng)重新校準(zhǔn)。4附錄A校準(zhǔn)記錄格式(推薦)記錄編號：委托單位：儀器名稱：型號：制造廠：出廠編號：環(huán)境溫度：相對濕度：校準(zhǔn)日期：校準(zhǔn)依據(jù)：主要計量標(biāo)準(zhǔn)器名稱測量范圍不確定度/準(zhǔn)確度等級/最大允許誤差檢定/校準(zhǔn)證書編號溯源單位有效期至一、示值誤差標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)值測量值(ng/μL)平均值(ng/μL)示值誤差擴(kuò)展不確定度5值(ng/μL)測量值(ng/μL)平均值擴(kuò)展不確定度6校準(zhǔn)證書內(nèi)頁格式(推薦)校準(zhǔn)結(jié)果校準(zhǔn)項目校準(zhǔn)結(jié)果示值誤差標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)值測量值(ng/μL)擴(kuò)展不確定度測量重復(fù)性標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)值測量值(ng/μL)測量重復(fù)性擴(kuò)展不確定度7附錄C示值誤差的不確定度評定示例要求，通常選擇(10～100)ng/L濃度范圍內(nèi)的核酸標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，重復(fù)測量3次，計算示標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)：國家有證雙鏈DNA標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，濃度范圍(10～100)ng/HL,相對擴(kuò)展不移液器：(1~10)μL、(20～200)μL。,靈敏度系數(shù)8a)測量平均值引入的不確定度分量u(X);b)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的標(biāo)準(zhǔn)值引入的不確定度分量u(X?)。C.4各不確定度分量的評定C.4.1測量平均值引入的不確定度分量u(X)該不確定度分量由測量重復(fù)性引入，在(0～100)ng/uL范圍內(nèi)，選擇濃度為31.4ng/HL,和85.7ng/HL的國家有證雙鏈DNA標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，分別重復(fù)測量10次，數(shù)據(jù)見表C.1。按照貝塞爾公式(C.3)計算標(biāo)準(zhǔn)偏差，計算得出的標(biāo)準(zhǔn)偏差即為單次測量值的不確定度，實際校準(zhǔn)時，儀器示值采用3次測量值的平均值，因此測量平均值的標(biāo)準(zhǔn)不確定度按照公式(C.4)計算，計算結(jié)果見表C.1。標(biāo)準(zhǔn)值測量值(ng/μL)SC.4.2標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的標(biāo)準(zhǔn)值引入的不確定度分量u(X?)標(biāo)準(zhǔn)值的不確定度由標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)證書給出，按照公式(C.5)計算得到標(biāo)準(zhǔn)不確定度u(X?),見表C.2。9標(biāo)準(zhǔn)值相對擴(kuò)展不確定度Ure1(k=2)標(biāo)準(zhǔn)不確定度u(X?)9.8%C.6合成標(biāo)準(zhǔn)不確定度由表C.3中標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的標(biāo)準(zhǔn)值和兩次測量結(jié)果的平均值，分別計算得到靈敏度系數(shù)c?和c?。按照公式(C.2)示值誤差測量結(jié)果的合成標(biāo)準(zhǔn)不確定度見表C.3。標(biāo)準(zhǔn)值測量值(ng/μL)平均值C?u(X?)123C.7擴(kuò)展不確定度