紫外-可見分光光度法的基本原理紫外-可見分光光度法紫外-可見分光光度法的基本原理1.透光率與吸收度

I0＝Ia+It+Ir

I0＝Ia+It

透射光強(qiáng)度It與入射光強(qiáng)度I0的比值稱為透光率或透光度T。透光率的負(fù)對數(shù)為吸光度A。紫外-可見分光光度法的基本原理

概念：以波長λ為橫坐標(biāo)、吸光度A為縱坐標(biāo)所描繪的曲線稱為吸收光譜曲線，簡稱吸收光譜。特點：在相同條件下，同一物質(zhì)的不同濃度的溶液，其吸收光譜曲線相似，且λmax相同。這是定性分析的基礎(chǔ)。

A480520560nm

max=5152.吸收光譜曲線

紫外-可見分光光度法的基本原理3.光的吸收定律

當(dāng)一束平行的單色光通過均勻、無散射的含有吸光性物質(zhì)的溶液時，在入射光的波長、強(qiáng)度及溶液的溫度等條件不變的情況下，該溶液的吸光度A與溶液的濃度c及液層厚度L的乘積成正比，即A＝K·L·c，稱為光的吸收定律（朗伯-比爾定律）。光的吸收定律是定量分析的理論依據(jù)。紫外-可見分光光度法的基本原理

朗伯-比爾定律不僅適用于可見光，而且也適用于紫外光和紅外光；不僅適用于均勻、無散射的溶液，而且也適用于均勻、無散射的固體和氣體。實驗證明，溶液對光的吸光度具有加和性。如果溶液中同時存在兩種或兩種以上的吸光性物質(zhì)，則測得的該溶液的吸光度等于溶液中各吸光性物質(zhì)吸光度的總和，即：

A（a+b+c）＝Aa＋Ab＋Ac

3.光的吸收定律

紫外-可見分光光度法的基本原理4.吸光系數(shù)

（1）摩爾吸光系數(shù)：在入射光波長一定時，溶液濃度為1mol/L，液層厚度為1cm時所測得的吸光度稱為摩爾吸光系數(shù)，常用ε表示，其量綱為L/（mol·cm）。（2）比吸光系數(shù)：在入射光波長一定時，溶液濃度為1g/L，液層厚度為1cm時的吸光度稱為吸收系數(shù)，常用α表示，其量綱為L/(g·cm)。（3）百分吸光系數(shù)：在入射光波長一定時，溶液濃度為1%（g/100ml）、液層厚度為1cm時所測得的吸光度稱為百分吸光系數(shù)，常用表示，其量綱為100ml/（g·cm）根據(jù)上述定義，摩爾吸光系數(shù)和吸收系數(shù)、百分吸光系數(shù)之間的換算關(guān)系是：紫外-可見分光光度法的基本原理例

用氯霉素（相對分子質(zhì)量為323.15）純品配制100ml含2.00mg的溶液，以1.00cm厚的吸收池在278cm波長處測得其透光率為24.3％，試計算氯霉素在278cm波長處的摩爾吸光系數(shù)和百分吸光系數(shù)。解：已知M＝323.15g/mol，ρ＝2.00×10-3%，T＝24.3%。求氯霉素在278cm波長處的摩爾吸光系數(shù)ε和比吸光系數(shù)。∵

∴[100ml/（g·cm）]

L/(mol·cm)4.吸光系數(shù)

紫外-可見分光光度法的基本原理5.偏離光的吸收定律的主要因素

化學(xué)因素：(1)吸光性物質(zhì)溶液的濃度(2)吸光性物質(zhì)的化學(xué)變化(3)溶劑的影響光學(xué)因素：(1)非單色光

(2)雜散光

(3