2019年9月1日發布2019年9月1日實施能力驗證提供者認可準則在微生物領域的應用說明 2 3 3 3 4 8附錄A均勻性和穩定性檢驗 附錄B統計分析和能力評定 附錄C微生物能力驗證統計分析示例 CNAS-CL03-A001:2019CNAS-CL03:2010中章、節條款號和名稱，解釋和說明內容在CNAS-CL03-A001:2019能力驗證提供者認可準則在微生物領域的應用說明GB/T28043利用實驗室間比對進行能力驗證的統計方法（ISO13528,ISO/TS22117食品和動物飼料微生物能力驗證特定要求和指南(Microbiologyoffoodandanimaguidanceforproficiencytestingbyinterlaboratoryc3.3標準菌株referencestrainCNAS-CL03-A001:2019進行定性微生物檢測時，能檢測到但無法給出精確數值的微生物的最小量），開展新能力驗證計劃前通常應進行預試驗，預試驗應考慮微生物CNAS-CL03-A001:2019e）明確目標微生物是定性檢測和/或定——在使用前應確認目標微生物的特性,應根據能力驗證的目標采用適當的——能力驗證樣品中存在背景菌群尤其是疑似目標微生物時，提供者應考慮背菌群對目標微生物檢測的影響，應通過確認試驗保證樣品指定值的準確可j）有防止串通或偽造結果的措施，如多水平、多樣本設計，參加者返回應建立微生物能力驗證樣品的制備、貯存、處置的程序，包括檢畢CNAS-CL03-A001:2019）；——樣品的數量（要考慮完成結果評價之后，參加者對能力驗證樣品穩定）；篩選、選擇分離和鑒定階段的能力。對定量和定性能力驗證樣品，應建立均勻性和穩定性判定原則（附錄A）。微生物能力驗證樣品應進行穩定性評定。必要時，應將穩定性量化考慮作為能力驗證樣品指定值測量不確定度的補充分量，在能力評定中予以考檢測時間間隔及頻次取決于已知的穩定性信CNAS-CL03-A001:2019注1：開展過多輪次定量微生物能力驗證計劃的提供者，可使用經驗值作注2:通常最大可能數（mostprobablenumber,MPN）計數方法和平板菌落注3:定性微生物能力驗證計劃通常直接將參加者結果與指定值進行比較提供者應將確定微生物定性和定量計劃指定值（平均值、中位值b）給參加者的指導書應包括以CNAS-CL03-A001:2019提供者應控制微生物樣品的包裝，確保符合國家、地區或國適用時，文件控制程序應包括基于病原微生物安——使用前應確認目標微生物的特性,應根據能力驗證的目標采用適當的標CNAS-CL03-A001:2019適用時，記錄控制程序應包括基于病原微生物安全考慮的質量/技術記微生物水平較高時，可使用單因子方差分析和Ss0.3準則（Ss為樣品間比如根據經驗值或先期同類能力驗證計劃獲得的值，可利用Ss0.3進行評當微生物水平較低時，樣品間微生物計數差異可能會比較大，可能不滿足Ss0.3的要求，在后續評價參加者能力時可考慮在能力評定標準差中加入樣 nj1j1 mxxi/m2019年9月1日發布2019年9月1日實施均方自由度n=m-1n?=N-n若F<自由度(n,n2)及給定顯著性水平α(通常α=0.05)的臨界值Fa(n,n)(查表1F分布表),則表明樣品內樣品間無顯著差異，樣品是均勻的。899(摘自GB4086.4-1983統計分布數值表F分布)A.1.1.2Ss≤0.3σ準則性條件下測試j次（j=1、2、……n）。按A.1.1.1計偏差Ss：SsSs(MS1MS2)/n若Ss0.3，則使用的樣品可以認為是均勻的。通常從微生物能力驗證樣品總體中隨機抽取足夠具有代表性的品進行穩定x2x1 CNAS-CLO3-A001:2019第13頁共22頁n?—第一次測試次數；n?—第二次測試次數若t<顯著性水平α(通常α=0.05)自由度為n?+n?-2的臨界值tg(+2-2)(查表2t分布表),則兩個平均值之間無顯著差異，表明樣品是穩定的。P{t(n)>t(n)}=α表2t分布表自由度臨界值自由度臨界值自由度臨界值A.1.2.2x-y≤0.3o準則若x-y≤0.3o成立，則認為樣品是穩定的。式中：x—均勻性檢驗的總平均值y穩定性檢驗的測試平均值。對于定性計劃樣品的均勻性和穩定性檢驗，其取樣和測試程序基本上和定量計劃相同，通常核查測試結果是否和樣品制備時指定值一致，如一致可判定樣品滿足要求，如不一致可判定為不滿足要求，需核查原因或重新制樣。另外，也可利用以上定量計劃的評定準則，采用目標微生物和背景菌群計數來進行均勻性和穩定性評定。B.2.1利用Z值評定zxX其中x為參加的結果，X為指定值,能力評定標準差。當參加者使用的測試方法有可靠的重復性限r和再現性限R時,可根據GB/T11 2R2r2(n1)n參加者在重復條件下n次測試的平均值x與指定值X之差|xX|小于臨界為測試方法的再現性標準差。根據ISO4833，常規30℃需氧培養的固體培養基上的菌落計數，其方法重復性限r為0.25，再現性限R為0.45，計算CD值約為0.29?！谥付ㄖ怠?（含邊界）范圍內：——在指定值±5（含邊界）范圍外：之間的變異會逐漸減小，趨近于方法本身的變異，評價參加者結果的MPN對數值接受限可根據實際情況縮小。如英格蘭衛生局經過兩年多輪次能力驗證計劃運作之后，將參加者MPN對以某次乳粉中菌落總數測定能力驗證為例。參加者使用的測試方法為ISO表4菌落總數測試結果（CFU/g）測試結果x1測試結果x2x14.6994.62324.7244.70834.7784.73244.6724.60254.6994.74864.6334.70874.6534.68184.6634.71694.6814.6724.6994.6234.685F9F臨界值F0.05(9,10)=3.02。計算的F值為1.67，該值＜臨界值，這初步表明也可利用A.1.1.2Ss0.3表6模擬運輸條件放置30天后測試結果（CFU/g）12345x1x2s2txyxy0.3值的差值x1x2為0.002。以經驗值0.25為能力評定標準xxy0.3CFU/g值利用CD值|xX|＜0.291710004.8512550004.7403420004.62341800005.25556280004.4477410004.6138500004.6999310004.491520004.716541004.733175004.243475004.677495004.695450004.6530390004.591330004.519220004.342650004.813200004.301500004.699340004.531450004.6530350004.544700004.845將參加者結果進行對數轉換，以中位值為指定值X，以標準化四分位距為CNAS-CL03-A001:2019能力評定標準差，計算指定值X為4.653，能力評定標準差為0.137。CNAS-CL03-A001:2019