第十章色譜法概論薄層色譜法第三節(jié)

平面色譜法是組分在平面上展開的一種色譜分離方法，故分離過程又被稱為展開，流動相被稱為展開劑。平面色譜法主要包括薄層色譜法和紙色譜法。第三節(jié)薄層色譜法1.基本原理

將含有A、B組分的混合溶液點(diǎn)在薄層板的一端，在密閉的容器中用適當(dāng)?shù)恼归_劑預(yù)飽和后展開，A、B兩種組分首先被吸附劑吸附，然后被展開劑溶解而解吸并隨展開劑向前移動，反復(fù)不斷地進(jìn)行吸附和解吸的過程。

若組分B的吸附系數(shù)大于組分A，吸附劑對組分B的吸附作用強(qiáng)，其在薄層板上的遷移速度較慢，組分A則遷移速度較快，A、B兩種組分形成差速遷移，兩者間的距離逐漸增大，經(jīng)過一段時間后，在薄層板上形成互相分離的兩個斑點(diǎn)。薄層色譜展開示意圖

第三節(jié)薄層色譜法2.比移值和相對比移值

展開劑的選擇遵循“相似相溶”原則。

通常先用單一溶劑展開，然后根據(jù)分離效果再改變展開劑的極性或采用混合溶劑展開。

在多元溶劑中，占比例較大的溶劑起到溶解、分離的作用，比例小的溶劑起調(diào)節(jié)溶劑極性、改善Rf的作用。與吸附柱色譜法的吸附劑相似，顆粒更細(xì)，分離效率更高。

常用硅膠、氧化鋁、硅藻土、微晶纖維素和聚酰胺等，以硅膠為吸附劑的薄層色譜應(yīng)用最廣。第三節(jié)薄層色譜法3.吸附劑的選擇4.展開劑的選擇薄層色譜法的操作可分為制板、點(diǎn)樣、展開、斑點(diǎn)定位4個步驟。（1）制板：選取、涂鋪、活化。第三節(jié)薄層色譜法5.操作方法1.吸附劑薄層2.涂布器3.玻璃夾板4.玻璃板5.玻璃夾板（2）點(diǎn)樣：畫基線、標(biāo)記試樣點(diǎn)、點(diǎn)樣。第三節(jié)薄層色譜法點(diǎn)樣毛細(xì)管平頭微量點(diǎn)樣器注意：①動作要輕，勿損傷薄層板表面；②若需多次點(diǎn)樣，每次點(diǎn)樣后將樣品點(diǎn)晾干或吹干后，再二次點(diǎn)樣，樣點(diǎn)直徑2-4mm；③展開后斑點(diǎn)集中，各點(diǎn)面積大小基本一致。（3）展開①預(yù)飽和：先進(jìn)行預(yù)飽和，避免邊緣效應(yīng)。②展開：單向展開、雙向展開、多次展開。第三節(jié)薄層色譜法預(yù)飽和展開前沿

??1.5~2.0cm12（4）斑點(diǎn)定位①物理方法②化學(xué)方法

常用的顯色劑分通用型和專屬型兩種。

常見的顯色方法有蒸氣顯色法、浸漬顯色法、加熱顯色法和噴霧顯色法。第三節(jié)薄層色譜法有顏色物質(zhì)紫外光下顯色紫外光下發(fā)熒光（1）定性鑒別

①利用Rf值定性。②利用Rr值定性：組分的Rr值定性比Rf值更為可靠。（2）雜質(zhì)檢查①雜質(zhì)對照品比較法。②主成分自身對照法。（3）定量分析

①目視比色法。②洗脫法。③薄層掃描法。第三節(jié)薄層色譜法6.定性定量分析雙波長雙光束薄層色譜掃描儀的基本光路示意圖

應(yīng)用于物質(zhì)的分離與鑒定，也可用于小量物質(zhì)的提純和精制。在藥學(xué)領(lǐng)域，可用于藥品的純度控制和雜質(zhì)檢查、中藥的定性鑒定和天然藥物有效成分的分離與測定。

例如：頭孢拉定為廣譜抗生素，可用于呼吸道、泌尿道、皮膚和軟組織等的感染。《中國藥典》（2015年版）二部采用薄層色譜法對頭孢拉定進(jìn)行鑒別。具體操作：取本品與頭孢拉定對照品適量，分別加水溶解并稀釋制成每1ml中約含6mg的溶液，作為供試品溶液與對照品溶液。吸取上述兩種溶液各5μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板，經(jīng)105℃活化后，置5%（ml/ml）正十四烷的正己烷溶液中，展開至薄層板的頂部，晾干，以0.1mol/L枸櫞酸溶液-0.2mol/L磷酸氫二鈉溶液-丙酮（60∶40∶1.5）為展開劑，展開，取出，于105℃加熱5分鐘，立即噴以用展開劑制成的0.1%茚三酮溶液，在105℃加熱15分鐘后，檢視。供試品溶液所顯主斑點(diǎn)的位置和顏色應(yīng)與對照品溶液所顯主斑點(diǎn)的位置和顏色相同。第三節(jié)薄層色譜法7.應(yīng)用實(shí)例紙色譜法第四節(jié)

以紙為載體，固定相通常是濾紙上吸著的水，流動相是含水的有機(jī)溶劑。

紙色譜法一般為正相分配色譜，依據(jù)組分在兩相間的分配系數(shù)不同而實(shí)現(xiàn)分離。

2.操作方法（1）濾紙的選擇。（2）點(diǎn)樣：畫基線、標(biāo)記試樣點(diǎn)和點(diǎn)樣。（3）展開：常用上行展開。（4）斑點(diǎn)定位：不能在高溫下顯色，也不能使用腐蝕性顯色劑。

3.