血液和尿液中秋水仙堿的液相色譜-質譜定性定量檢驗方法22)內標工作溶液：1μg/mL的內標工作溶液由符合5.1i)1)的內標儲備溶液用甲醇稀釋得到。密封，置于冰箱中冷藏保存，有效期3個月。5.2儀器和設備儀器和設備及要求如下。a)液相色譜-串聯質譜儀：配有電噴霧離子源(ESI)。b)電子天平：分度值≤0.1ng。d)恒溫水浴鍋。e)渦旋混合器。f)移液器。6定性分析6.1樣品前處理6.1.1檢材樣品取血液(或尿液)0.5mL,加內標工作溶液10μL,加硼砂溶液0.5mL,渦旋混勻，再加入乙酸乙酯3mL,渦旋混勻，2500r/min離心3min,取有機層于50℃水浴中吹干，殘留物用甲醇：含0.1%甲酸的20mmol/L乙酸銨緩沖溶液(體積比8:2)200山復溶，供液相色譜-串聯質譜儀分析。6.1.2空白樣品取空白血液(或尿液)0.5L作為空白樣品，按6.1.1的方法，與檢材樣品平行操作。6.1.3添加樣品取空自血液(或尿液)0.5mL,添加標準物質工作溶液，配制成0.2ng/mL的添加樣品，然后按6.1.1的方法，與檢材樣品平行操作。6.2儀器檢測6.2.1儀器條件6.2.1.1液相色譜條件以下為參考條件，可根據不同品牌儀器等實際情況進行調整。a)色譜柱：C18柱(150m×2.1mm,5μm)或其他等效柱。b)流動相：流動相A為含0.1%甲酸的20mmol/L乙酸銨緩沖溶液，流動相B為甲醇：采用等度洗脫方法，流動相A:流動相B=20:80.c)流速：0.2mL/min。d)柱溫：室溫。6.2.1.2質譜條件6.2.1.2.1以下為參考條件，可根據不同品牌儀器等實際情況進行調整。a)離子源：電噴霧電離-正離子模式(ESI+)。b)檢測方式：多反應監測(MRM)。c)離子源電壓：5500V。d)碰撞氣、氣簾氣、霧化氣和輔助氣均為高純氮氣，使用前調節各氣流流量以使質譜靈敏度達到檢測要求。e)去簇電壓和碰撞能量應優化至最佳靈敏度。6.2.1.2.2在符合6.2.1.1和6.2.1.2的液相色譜條件和質譜條件下，目標物和內標物的質譜參數和保留時間參見表1。3表1目標物和內標物的質譜參數和保留時間目標物V丁丙諾啡(內標物)分別吸取空白樣品提取液、檢材樣品提取液和添加樣品提取液，按6.2.1的條件進樣分析。記錄空白樣品、檢材樣品和添加樣品中目標物可疑色譜峰的保留時間、質譜特征離子對以保留時間、質譜特征離子對峰和離子對豐度比作為定性判斷依據。若檢材樣品中出現目標物的兩對定性離子對的色譜峰，保留時間與添加樣品中相應目標物的色譜峰保留時間比較，相對誤差在±2.5%內，且定性離子對豐度比與添加樣品的離子對超過表2規定的范圍，則可判斷檢材樣品中檢出該種目標物。取檢材樣品血液(或尿液)0.5L兩份，按6.1.1的方法操作。另取空白血液(或尿液)樣品若干份，添加標準物質工作溶液適量，制得系列質量濃度或單點質量檢材樣品中目標物的質量濃度應在工作曲線的線性范圍內。配制單點質量濃度的添加樣樣品中目標物質量濃度應在添加樣品目標物質量濃度的(100±50)%范圍內。記錄檢材樣品、系列質量濃度的添加樣品或單點質量濃度的添加樣品中目標物及內標物定量離子對的峰面積值，然后計算檢材樣品中目標物的質量濃度。4在系列質量濃度的添加樣品中，以目標物與內標物定量離子對的峰面積比值(D為縱坐標、目標根據檢材樣品中目標物及內標物定量離子對的峰面積比值。按式(1)計算檢材樣品中目標物的質C——檢材樣品中目標物的質量濃度。單位為納克每毫升(K—檢材樣品中目標物與內標物定量離子對的峰面積比值：a——線性方程的截距：b——線性方程的斜率。根據檢材樣品和添加樣品中目標物與內標物定量離子對的峰面積比值，按式(2)計算檢材樣品中C—檢材樣品中目標物的質量濃度，單位為納克每毫升(ng/mL);A——檢材樣品中目標物與內標物的峰面積比值；A'——添加樣品中目標物與內標物的峰面積比值；c——添加樣品中目標物的質量濃度，單位為納克每毫升(ng/mL)。檢材樣品平行測定兩份，相對相差按式(3)計算。G、C—兩份檢材樣品中目標物的質量濃度，單位為納克每毫升(ng/mL);c兩份檢材樣品中目標物質量濃度的平均值(C+C?)/2,單位為8.1.1陰性結果評價a)若檢材樣品中僅檢出內標物，未檢出目標物，且添加樣品中檢出目標物，則陰性結果可靠；b)若檢材樣品中未檢出內標物，或添加樣品中未檢出目標物，則陰性結果不