丙二醛（MDA）含量檢測試劑盒（熒光法）原理丙二醛（Malondialdehyde，MDA）是脂質過氧化物分解后形成的一種化合物，用于檢測脂質氧化水平，該指標在氧化應激、鐵死亡等領域的研究中被廣泛使用。CheKine?Pro丙二醛（MDA）含量檢測試劑盒（熒光法）可檢測動植物組織，細胞、血清（漿）等生物樣本。在該試劑盒中，MDA在酸性和高溫環境下，可與硫代巴比妥酸（Thiobarbituricacid，TBA）縮合，生成TBA復合體，通過測定其熒光強度來檢測樣本中的MDA。包裝清單試劑盒組分規格儲存條件48T96TExtractionBufferⅠ60mL120mL4℃ExtractionBufferII24mL48mL4℃ReagentⅠ300μL600μL4℃，避光保存ReagentII52mL104mL4℃ReagentIII36mL72mL4℃，避光保存ReagentIVPowder×1vialPowder×1vial4℃，避光保存ReagentV20mL40mL4℃Standard(4.05mmol/mL)400μL400μL4℃，避光保存注意：正式檢測前，建議選擇2-3個預期差異較大的樣本進行預實驗。自備耗材·熒光酶標儀(激發波長520nm，發射波長550nm)·96孔全黑板、可調節式移液槍及槍頭、1.5mL離心管·恒溫箱、制冰機、低溫離心機·去離子水·勻漿器或研缽（如果是組織樣本）試劑準備ExtractionBufferⅠ：即用型；使用前，平衡到室溫。4℃保存。ExtractionBufferII：即用型；4℃保存。ReagentI：即用型；使用前，平衡到室溫。4℃避光保存。ReagentII：即用型；使用前，平衡到室溫。4℃保存。ReagentIII：即用型；使用前，平衡到室溫。4℃避光保存。WorkingReagentIV：臨用前配制，將ReagentII全部轉移至ReagentIV中，充分溶解。用不完的試劑-20℃避光分裝保存6個月，避免反復凍融。ReagentV：即用型；使用前，平衡到室溫。4℃保存。WorkingReagentⅠ：每孔準備600μL工作液，現配現用。按照ReagentIII：WorkingReagentIV=200μL：400μL的比例，混合均勻。WorkingReagentII：每孔準備600μL工作液，現配現用。按照ReagentIII：ReagentV=200μL：400μL的比例，混合均勻。Standard(4.05mmol/mL)：即用型；使用前，平衡到室溫。4℃避光保存。注意：ReagentI、ReagentIII、ReagentIV和Standard有刺激性氣味，建議在通風櫥進行實驗。標準品制備：100nmol/mLStandard：20μL4.05mmol/mLStandard用61μL去離子水稀釋得1mmol/mLStandard；10μL1mmol/mLStandard用990μL去離子水稀釋得10μmol/mLStandard；10μL10μmol/mLStandard用990μL去離子水稀釋得100nmol/mLStandard；使用100nmol/mLStandard，按照下表所示，進一步稀釋成標準品：序號100nmol/mLStandard體積（μL）去離子水體積（μL）濃度（nmol/mL）Std.11099010Std.289928Std.369946Std.449964Std.529982Std.619991Std.70.5999.50.5Blank01,0000注意：每次實驗，請使用新配制的標準品；配制好的標準品需要在4h之內使用。樣本制備注意：建議使用新鮮樣本。如果不立即使用，可將樣品在-80℃下保存一個月。測定時，應控制解凍的溫度和時間。室溫環境下解凍時，需在4h內完成樣品解凍。組織：稱取約0.1g樣本，加入1mLExtractionBufferⅠ，用勻漿器或研缽冰浴勻漿，10,000g，4℃離心10min，取上清液，置冰上待測。細胞：收集500萬細胞到離心管內，用冷PBS清洗細胞，離心后棄上清，加入0.4mLExtractionBufferII，混勻后放置在冰上裂解5min，每2min混勻一次，直接置于冰上待測。血清（漿）等液體樣本：直接檢測。注意：如需測定蛋白濃度，推薦使用Abbkine貨號：KTD3001的蛋白質定量試劑盒（BCA法）進行樣本蛋白質濃度測定。實驗步驟熒光酶標儀預熱30min以上，調節激發波長到520nm，發射波長到550nm。操作表（下述操作在1.5mL離心管中操作）：試劑空白管（μL）標準管（μL）測定管（μL）對照管（μL）樣本00200200Standard020000去離子水200000ReagentI2222WorkingReagentⅠ6006006000WorkingReagentII000600混勻后，95℃水浴反應50min，取出后流水冷卻，10,000g離心10min，取200μL上清至96孔全黑板，記錄各孔的熒光值RFU，熒光激發波長520nm，熒光發射波長550nm，空白孔記為RFU空白，標準孔記為RFU標準，測定孔記為RFU測定，對照孔記為RFU對照。計算ΔRFU測定=RFU測定-RFU對照，ΔRFU標準=RFU標準-RFU空白。注意：空白管和標準管只需做1-2次。如果樣本不存在溶血、脂血現象，則對照管可以不測，用空白管來代替對照管。實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本稀釋成不同濃度做預實驗，根據預實驗的結果，結合本試劑盒的線性范圍：0.04-10μM，選擇合適的稀釋倍數對樣本進行檢測。結果計算注意：我們為您提供的計算公式，包括推導過程計算公式和簡潔計算公式。兩者完全相等。建議以加粗的簡潔計算公式為最終計算公式。標準曲線的繪制以標準溶液濃度為x軸，ΔRFU標準為y軸，繪制標準曲線，得到標準方程，將ΔRFU測定帶入方程得到x(nmol/mL)。MDA含量的計算：按樣本蛋白濃度計算MDA(nmol/mgprot)=x÷Cpr按樣本鮮重計算：MDA(nmol/g鮮重)=x÷(W÷V1)=x÷W按照細胞數量計算MDA(nmol/104cell)=x÷(n÷V2)=0.4x÷n按樣本體積計算：MDA(nmol/mL)=xV1：加入ExtractionBufferⅠ體積，1mL；V2：加入ExtractionBufferII體積，0.4mL；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/mL；W：樣本質量，g；n：細胞數量，以萬計。注意事項如果待測組織樣本勻漿中存在絮狀物，可多次離心取上清，避免測值不穩定，復孔差異大。每次檢測都需要建立新的標準曲線。如果RFU測定較低或ΔRFU測定為負值，可適當增加樣本量或延長反應時間，但不得超過100min。如果樣本測不出值，建議取新鮮樣本，重新檢測。結果展示以下數據僅供參考，實驗者需根據自己的實驗對樣品進行檢測。Figure1.(a)MDA標準曲線。(b)本試劑盒測定兔腎臟和玉米葉中MDA的含量。相關產品CatalogNo.ProductNameKTB9300