ICS

CCS

團體標準

T/FJASXXX—XXXX

游離DNA保存采血管

CellFreeDNAPreservativeTubes

（征求意見稿）

2023-xx-xx發布2023-xx-xx實施

福建省標準化協會發布

游離DNA保存采血管

1范圍

本標準規定了游離DNA保存采血管的產品總體要求、試驗方法、檢驗規則及色標、生產

商提供的信息、生產條件、運輸及貯存、有效期等要求。

本標準適應于游離DNA保存采血管制造商、開展游離DNA生物學功能及臨床應用研究的

科研院所、開展游離DNA檢測（如NIPT、腫瘤液體活檢、病原微生物宏基因組檢測等）的

醫學檢驗實驗室等。

2規范性引用文件

下列文件中的條款通過本條款的引用而成為本標準的條款。凡是注日期的引用文件，其

隨后所有的修改單（不包括勘誤的內容）或修改版均不適用于本標準，凡是不注日期的引用

文件，其最新版本適用于本標準。

WS/T224-2018真空采血管的性能驗證

YY/T0314-2021一次性使用人體靜脈血樣采集容器

GB15979-2002一次性使用衛生用品衛生標準

3術語和定義

下列術語和定義適用于本標準。

3.1

游離DNAcell-freeDNA

存在于外周血中、游離于細胞外的機體內源性DNA。

3.2

游離DNA保存液cellfreeDNApreservationsolution

為了進行預定的檢驗，放置在采血管內的便于血樣中游離DNA保存的物質（不包括用于

內表面處理的不能清除掉的物質）。

3.3

保存容器container

采血管上除去附加物和丁基膠塞、安全帽用于裝血樣的部分。

3.4

丁基膠塞butylrubberclosures

1

用丁基橡膠制成用于密閉保存容器的組件。

3.5

安全帽protectivecap

避免手指或機械裝置觸及到丁基膠塞與血樣接觸的部分，以免造成污染所設計的屏障，

一般為塑料注塑件。

3.6

保水性water-retainingproperty

容器保存液體和防止液體流失、揮發方面的性能。

3.7

無創產前基因檢測NIPTNoninvasiveprenataltesting

通過抽取孕婦外周血，提取血漿中的游離DNA，采用高通量測序技術，結合生物信息分

析方法，評估胎兒患21三體綜合征、18三體綜合征和13三體綜合征疾病風險的臨床檢驗

方法。

3.8

腫瘤液體活檢LiquidBiopsy

通過檢測或分析外周血等體液中腫瘤細胞來源的游離DNA的相關信息，實現對腫瘤的早

篩、診斷、預后評估和治療指導等。

3.9

病原微生物宏基因組檢測mNGSMetagenomicsNextGenerationSequencing

對感染樣本（包括血液樣本）中微生物的核酸(DNA/RNA)進行高通量測序，將獲得的序

列與微生物數據庫進行比對，從而確定樣本中存在的病原體，為臨床疑似感染病例的診斷提

供病原學證據。

3.10

YY/T0314-2021中確定的術語和定義適用于本標準。

4總體要求

4.1材料及結構

4.1.1丁基膠塞和安全帽，應光亮潔凈無銳邊；保存容器外觀應無雜質，沒有會導致使用者

的皮膚或手套受到意外劃傷、刺破或磨傷的銳邊、毛刺或粗糙表面。

4.1.2保存容器與丁基膠塞配合不應松動，安全帽應完全蓋住丁基膠塞，塞子與保存容器

2

緊密結合；應能經受至少4次取下和裝上塞子，不出現泄漏。

4.1.3需要對保存容器、丁基膠塞的材料和預期的適用性進行確認，充分考慮其材料的可承

受離心力、耐壓、防摔、抗凍、耐輻照等性能。按規定的方法進行試驗時，采血管縱軸方向

應能承受最小3000g的離心加速度，且無斷裂、坍塌、裂縫或其他可見缺陷。

注：無菌管采用輻射（輻照）的滅菌方法，要求其材料滿足耐輻照的能力，輻照應是一個確

認的過程。

4.2游離DNA保存液

4.2.1應為清亮透明液體，不得有沉淀、顆?；蛐鯛钗锛绑w積變少等現象。

4.2.2應充分考慮保存液的穩定性，pH值、光照、貯存溫度和時間等因素對其影響，PH值

5.5±10%。

4.2.3保存液的體積應在規定體積的90%-110%之間。

4.3非無菌、無菌和無DNA管

4.3.1非無菌管

4.3.1.1采血管內部的細菌菌落數≤10cfu/mL。

4.3.1.2采血管內部不得檢測出大腸菌群。

4.3.1.3采血管內部不得檢測出致病性化膿菌（綠膿桿菌、金黃色葡萄球菌與溶血性鏈球

菌）。

4.3.1.4采血管內部的真菌菌落數≤10cfu/mL。

4.3.2無菌管

用輻照滅菌方式實現，在產品有效期內應是無菌的。

注：對于無菌管，通常采用輻射（輻照）的滅菌方法，具體的滅菌過程確認和常規控制，參

見GB18280（ISO11137）

4.3.3無DNA管

采血管內部不得檢測出DNA殘留。

4.4抽吸體積

抽吸體積加上游離DNA保存液的體積應在公稱容量的90%-110%以內。

4.5保存有效期

游離DNA保存液應能在常溫（6℃-37℃）靜置條件下保存人體靜脈血樣本中游離DNA

至少7天，常溫（6℃-37℃）運輸條件下保存人體靜脈血樣本中游離DNA至少4天。

4.6凝血和溶血要求

3

4.6.1按照正確的采血步驟使用采血管采血后，充分混勻的樣本在保存有效期內在采血管中

不應出現凝塊。

4.6.2按照正確的采血步驟使用采血管采血后，充分混勻的樣本在保存有效期內進行離心，

血漿不應出現溶血現象（臨床原因除外）。

4.7游離DNA保存效果

4.7.1使用采血管收集靜脈血并離心獲得血漿，提取血漿游離DNA，每1mL血漿中獲得的游

離DNA應不少于10ng（除提取因素外）。

4.7.2對提取的游離DNA進行片段大小檢測，主峰應在166bp左右，且無大片段污染。

4.7.3臨床檢測項目可根據該項目的行業或企業標準來判定是否滿足臨床檢測需求。

5試驗方法

5.1材料及結構

5.1.1在平均照度為300lx～750lx范圍內且無放大條件下，以目力和手感檢測的方法進

行檢驗。

5.1.2保存容器與丁基膠塞配合采用拉拔試驗進行測試；安全帽是否完全蓋住丁基膠塞以目

測的方法進行；熒光泄漏試驗方法參考YY/T0314-2021附錄C。

5.1.3管體強度檢測方法參考WS/T224—20184.3。

5.2游離DNA保存液

5.2.1保存液外觀用目力檢測的方法進行。

5.2.2在溫度25℃條件下，用經校準的pH計對保存液進行pH值檢測。

5.2.3保存液體積測量方法

5.2.3.1儀器

經校準的電子天平，精確至小數點后三位，即0.001g。

架子，在稱重期間保持采血管直立且處于正確方位。

移液槍、離心機。

5.2.3.2試驗步驟

5.2.3.2.1將采血管置于天平上，稱皮重（置零），記錄下數據A。

5.2.3.2.2將稱重后的采血管置于離心機中，3000g離心1mim，取下采血管。

5.2.3.2.3輕輕打開采血管的安全帽，使用移液槍緩慢吸取游離DNA保存液，直至完全吸盡

為止后蓋上安全帽。

4

5.2.3.2.4將無游離DNA保存液的空采血管置于電子天平上，稱重（置零），記錄下數據B。

5.2.3.2.5數據A-B即為游離DNA保存液質量，再用V=M/ρ換算成體積。

5.3非無菌、無菌和無DNA管

5.3.1非無菌管

5.3.1.1采血管內部的細菌菌落總數

按照GB15979-2002附錄B2方法進行檢驗。

5.3.1.2采血管內部的大腸菌群

按照GB15979-2002附錄B3方法進行檢驗。

5.3.1.3采血管內部的致病性化膿菌

5.3.1.3.1綠膿桿菌

按照GB15979-2002附錄B4方法進行檢驗。

5.3.1.3.2金黃色葡萄球菌

按照GB15979-2002附錄B5方法進行檢驗。

5.3.1.3.3溶血性鏈球菌

按照GB15979-2002附錄B6方法進行檢驗。

5.3.1.4采血管內部的真菌菌落數

按照GB15979-2002附錄B7方法進行檢驗。

5.3.2無菌管

無菌及驗證方法按WS/T224-2018中4.7條規定的方法進行檢驗。

5.3.3無DNA管

任意抽取需檢測的無DNA采血管3支，用10mL0.9%無菌氯化鈉溶液進行振蕩溶解，

作為供試液備用。取2mL供試液提取供試DNA樣本。取2mL0.9%無菌氯化鈉溶液作為陰性

對照。取人細胞或大腸埃希菌DNA作為陽性對照。用SYBRGreen熒光PCR法分別檢測供試

DNA樣本、陰性對照和陽性對照（引物參見附錄A）。供試品管和陰性對照熒光PCR法檢測

結果Ct值≥40或無Ct值，且陽性對照結果﹤30時，供試品管為合格。供試品管Ct值﹤40，

陰性對照Ct值≥40或無Ct值，陽性對照Ct值﹤30時，供試品管為不合格。陰性對照Ct

值﹤40或陽性對照Ct值≥30或無Ct值時，實驗無效。

5.4抽吸體積

抽吸體積的驗證按WS/T224—2018中4.2條規定的方法進行檢驗。

5.5保存有效期

5

對抽取人體靜脈血樣本的采血管常溫（6℃-37℃）靜置貯存7天或常溫（6℃-37℃）運

輸4天后，通過5.7游離DNA保存效果試驗進行判斷。

5.6凝血和溶血要求

5.6.1按照正確的采血步驟進行采血后，充分混勻血液樣本，在樣本保存有效期內任意一天，

在顯微鏡下觀察血液樣本應無凝塊。

5.6.2按照正確的采血步驟進行采血后，充分混勻血液樣本，在樣本保存有效期內任意一天，

對血液樣本進行離心，目力檢測上層血漿，不應出現溶血現象（臨床原因除外）。

5.7游離DNA保存效果

5.7.1采血管對游離DNA的保存效果受到采血后樣本保存的時間、環境（溫濕度等）、采血

管批次等方面的影響，需要對采血管的性能進行充分驗證：

a)模擬臨床樣本的采集、運輸及試驗過程，比較在預定的條件和采集樣本后立即檢測兩種

情況下，通過對比實驗參數判斷采血管在預定的條件下是否滿足要求。

b)模擬臨床樣本的采集、運輸及試驗過程，通過比較考察管與比對管的差異，進行采血管

的性能驗證，必要時可建立新的樣本采集、運輸及保存的方式。

5.7.2檢測方法

5.7.2.1儀器

低溫離心機、核酸定量熒光計、毛細管電泳核酸分析儀。

5.7.2.2試劑

游離DNA提取試劑、熒光計配套的熒光染料法核酸檢測試劑、毛細管電泳核酸分析儀配套耗

材和試劑。

5.7.2.3檢測步驟

5.7.2.3.1采集3例以上血液樣本。

5.7.2.3.2將采血管在4℃條件下1600g離心10分鐘，將上清轉移至新的離心管中，注意不

要吸取到中間層白細胞；將所得上清在4℃條件下16000g離心10分鐘，將血漿轉移到一個

新的離心管中備用。

5.7.2.3.3使用游離DNA提取試劑從4mL血漿中的提取游離DNA。

5.7.2.3.4使用熒光染料法核酸檢測試劑和核酸定量熒光計檢測游離DNA的濃度，結果應符

合4.7.1的要求。

5.7.2.3.5使用毛細管電泳核酸分析儀進行游離DNA片段大小檢測，結果應符合4.7.2的要

求。

6

6檢驗規則

6.1檢驗要求

有下列情況時都應進行檢驗：

a)在新產品投產前或準備用于臨床之前、轉廠生產，應對要求中的所有指標進行充分檢驗。

b)產品正常生產時，每年應至少對要求中的所有指標進行檢驗一次。

c)原料、工藝、配方有重大改變時，應對可能影響的指標進行檢驗。

d）停產一年后恢復生產時。

e)新的批次在出廠和使用前應進行抽檢。

f）省級以上藥品監督管理部門對產品質量進行監督抽查時。

6.2判定規則

檢驗有一項不合格，可加倍抽樣檢驗，經復驗合格該批產品檢驗合格，若復驗仍有一項

不合格，則該批產品檢驗不合格。

7色標、生產商提供的信息、生產條件、運輸及貯存、有效期

7.1色標

游離DNA保存采血管應與其他真空采血管區分，安全帽及標簽色彩部分使用紫色PANTONE

236C。

注1：色號參考國際標準色號：PANTONEColor（潘通色卡）。

注2：標簽的色標不是指整個標簽的顏色，而是指其色彩部分。

注3：安全帽顏色是指安全帽的外觀顏色，不包括安全帽內部的塞子顏色。

注4：本標準中的色標為推薦色標。

7.2生產商提供的信息

7.2.1采血管應附有便于使用者能夠快速識別產品的信息，將產品的正確使用方法、功能、

要求方面的信息傳遞給使用者。這些信息應標注在采血管的標簽上和（或）一個采血管或多

個采血管的包裝上（內）。

7.2.2采血管的標簽不應將采血管全部環繞。標簽內容正確，清晰易辨識，粘貼平整，無皺

褶翹邊、劃破、污漬。

7.2.3最小銷售單元標簽應符合《醫療器械說明書和標簽管理規定》（國家食品藥品監督管

理總局令第6號）要求，標簽上應標明必要信息，包含但不限于以下內容：

a)制造商名稱或商標和地址；

b)保存液的識別或用途；

c)相應的“無菌”標識，表明特定微生物狀態或潔凈程度說明；

7

d)避免二次使用標識；

e)生產許可證編號、產品技術要求編號及注冊證編號；

f)批號，以批（LOT）開頭或系列號；

g)采血管或其部件能安全有效使用的陳述，即有效期，以年月日（CCYYMMDD）表示；

h)公稱液體容量；

i)充裝線；

j)特殊存儲條件和（或）處置條件；

k)如必要可有相應的警示及其他特殊信息。

7.2.4應在采血管標簽上給出內裝添加劑保存液及用途的說明，并用顏色進行標識。

注：標簽上顏色部分應與安全帽色標一致。

7.3生產條件

游離DNA保存采血管生產應嚴格按照《醫療器械生產質量管理規范》要求進行生產，生

產車間應符合GB50073-2013《潔凈廠房設計規范》和YY/T0033-2000《無菌醫療器具生產

管理規范》中十萬級（100000級）的相關規定，實驗室區域應符合萬級（10000級）的規定，

其他檢驗設施設備應符合相應要求。

7.4運輸及貯存

7.4.1未使用過的采血管應在制造商規定的溫度下（一般為常溫6℃-37℃）避光運輸和貯存。

7.4.2采血后，可在6℃-37℃保存和運輸，溫度保持恒定。

7.5有效期

游離DNA保存采血管保質期為1年。

8

附錄

（資料性附錄）

熒光PCR引物

物種序列名稱序列

正向引物5'-GTACACACCGCCCGTC-3'

18SrRNA

反向引物5'-TGATCCTTCTGCAGGTTCACCTAC-3'

正向引物5'-CCTAYGGGRBGCASCAG-3'

16SrRNA

反向引物5'-TTACCGCGGCTGCTGGCAC-3'

9

參考文獻

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