關鍵詞：細胞增殖、EdU、CCK8、染料、抗體飛躍的載體干貨|細胞增殖多維檢測，尋找做細胞增殖的你當我們做細胞實驗，包括：藥物篩選、病毒轉染、疾病模型、靶細胞殺傷實驗，細胞增殖狀態的定性和定量，成為細胞學研究伙伴們地不二之選。當我們需要對增殖細胞進行準確定量，那么CCK8將會在電子耦合試劑存在的情況下，可以為線粒體內的活性脫氫酶驗明正身；當我們需要觀察增殖細胞形態并定量，那么EdU代替大腕胸腺嘧啶出演武打戲的戲碼（合成DNA）,然后曝光在媒體的鎂光燈（免疫熒光、流式細胞術檢測）下，進入我們的視野。當然，對于研究細胞增殖，還有眾多的兄弟姊妹共同上陣，現在我們來對它們進行一個詳細的比較吧。細胞增殖八種方法比較類型方法優點缺點直接計數法利用計數板或計數儀得出細胞的數目簡單，省錢，試劑和儀器普通，結果準確不適合樣品數量多的情況，不適合評估特定的亞群3H-TdR滲入法同位素3H標記的TdR作為DNA合成的前體摻入DNA合成過程，從而被液體閃爍計數器檢測到。3H-TdR摻入法敏感性高，客觀性強，重復性好。需變性或酶切DNA才可以孵育抗體；變性條件可能破壞細胞、組織形態；實驗步驟繁瑣；有一定細胞毒性，不適合長期活體研究。Brdu檢測法BrdU代替胸腺嘧啶合成DNA，并用熒光標記。經抗原抗體反應可放大信號，可結合其他標記進行同步研究。需變性或酶切DNA才可以孵育抗體;變性條件可能破壞細胞、組織形態;實驗步驟繁瑣;有一定細胞毒性，不適合長期活體研究。EdU檢測法EdU代替胸腺嘧啶合成DNA，并用熒光標記。利用Click反應可以快速進行檢測，不依賴于抗體，不需變性DNA，同樣適合多重標記分析。步驟簡單具有較強的細胞毒性，不適合長期活體研究。MTT檢測法活性脫氫酶將黃色的MTT分解成藍紫色的水不溶性的甲瓚，并沉積在活細胞中，死細胞無此功能。DMSO能溶解細胞中的甲瓚，在490nm波長處測定其光吸收值受藥物本身的顏色、培養基的顏色、血清的濃度使結果的變異較大價格便宜，使用廣泛。CCK-8檢測法MTT的升級版，細胞增殖越多越快，則顏色越深；細胞毒性越大，則顏色越淺。CCK-8生成的formazan是水溶性的，不需要再吸出培養液加入有機溶劑溶解這個步驟，因此可以減少一定的誤差。重復性優于MTT；對細胞毒性小；為1瓶溶液，毋需預制，即開即用。CCK-8價格相對于MTT，比較昂貴CFSE檢測法一種可穿透細胞膜的熒光染料，可以不可逆地與細胞內的氨基結合偶聯到細胞蛋白質上，是一種良好的細胞標記物。熒光信號強，細胞毒性低。通常用于長時程追蹤細胞的增殖狀況（或者細胞示蹤），并且兼容活體動物實驗。最終的數據采集，需要借助流式細胞儀。而數據分析，也需要使用特殊的帶有增殖分析功能的軟件來擬合曲線。核抗原Ki‐67染色法Ki-67染色，研究人員可以評估處于細胞周期所有活躍期的總增殖細胞的百分比。類似石蠟切片、冰凍切片等已經失去活性的樣本，就只能利用免疫染色的方法來觀察活躍增殖分子標記對固定細胞進行觀察。細胞增殖會產生諸多重要改變，包括DNA的合成、細胞代謝增加、增殖特異性蛋白的表達等。基于新一代AbFluor?熒光染色技術，Abbkine開發出能直接從DNA水平精準檢測細胞增殖狀態的EdU試劑盒（貨號KTA2030和KTA2031）；同時，還開發出通過細胞代謝水平實現高通量檢測細胞增殖狀態的CCK8試劑盒(貨號KTA1020和KTC011001)。基于以上原理，我們應廣大客戶的需要，我們還開發出細胞增殖檢測雞尾酒套裝(貨號KTD103-CN)，包含經專利設計的細胞毒性陽性對照品，可完美解決目前增殖檢測結果的非標準化問題。Fig.1HEK293andL929cellsinthepositivecontrolgroupwereinducedbycytotoxicityinducerfor30min,whilethecontrolgroupwasnotgivenanytreatment.EnhancedCellCountingKit-8(CCK-8)wasusedtodetectthecytotoxicityofHEK293andL929cellsaftercytotoxicityinduction.Fig.2CellProliferationEdUImageKit(GreenFluorescence)wasusedtodetectthecytotoxicityofHEK293cellsaftercytotoxicityinduction.功能合并后的細胞增殖檢測雞尾酒套裝的優勢如下亮點1.細胞增殖研究的標準化解決方案：經專利設計的細胞毒性陽性對照品，可完美解決目前增殖檢測結果的非標準化問題；2.通用型凋亡檢測套裝：可直接準確地檢測細胞增殖狀態，也可選擇高通量檢測，覆蓋了絕大多數細胞增殖/毒性檢測的需求。如圖所示，細胞增殖檢測雞尾酒套裝組分設計巧妙，可見一斑：上述兩大類方法，均是在活細胞、活組織中進行的。但如果面對的是類似石蠟切片、冰凍切片等已經失去活性的樣本，就只能利用免疫染色的方法來觀察活躍增殖分子標記了。目前最受歡迎和認可的增殖標記是Ki-67（貨號ABM40064）（標準命名MKI67，markerofproliferationKi-67），這個分子標記同時也是多種癌癥病理診斷指標之一，下圖為下圖為人子宮癌組織的Ki-67免疫組化染色。在胞漿胞核和質膜上均有表達。此外，PCNA（proliferatingcellnuclearantigen,貨號A01040）也是常用的活躍增殖標記。它在細胞核中穩定表達，也常常運用于WB細胞核內參抗體。值得一提的是，CFSE染料（5(6)-CFDA,SE，貨號BMD00066）也是檢測細胞增殖的良好標記物，它進入細胞后，可以不可逆地與細胞內的氨基結合偶聯到細胞蛋白質上。當細胞分裂時，CFSE標記熒光可平均分配至兩個子代細胞中，因此其熒光強度是親代細胞的一。在一個增殖的細胞群中，各連續代細胞的熒光強度呈對遞減，利用流式細胞儀在488nm激發光和熒光檢測通道可對其進行分析。相關產品推薦：產品名稱應用貨號規格【CCK8】細胞增殖/毒性檢測試劑盒細胞增殖/毒性檢測KTA1020200T/1000T/10000T乳酸脫氫酶細胞毒性檢測試劑盒細胞增殖/毒性檢測KTA103096T/480T細胞增殖成像分析試劑盒（EdU法）(綠色熒光)細胞增殖/毒性檢測KTA203050T/100T/500T細胞增殖成像分析試劑盒（EdU法）(橘紅色熒光)細胞增殖/毒性分析KTA203150T/100T/500TPCNA小鼠單克隆抗體(1D7)IF,IHC-P,WBA0104050μL/200μL/200μL×5細胞增殖標志物Ki67單克隆抗體IHC-P,IFABM4006430μL/100μL/200μL5(6)-CFDA,SE細胞增殖體外檢測/體內示蹤BMD0006650mg/100mg歡迎廣大“因粉”多多關注Abbkine公眾號，還會有更多科研驚喜等著大家喲。同時，Abbkine的技術專家為了給廣大讀者提供學習生物知識的平臺，經過不懈努力，將多種高端生物實驗的干貨整理出來，后期陸續在微信公眾號中刊登，請廣大熱愛科學的讀者持續關注Abbkine公眾號。Abbkine專注于蛋白學和細胞學領域，致力于創新和研發各類抗體、蛋白質、分析試劑與試劑盒，以期成為生命科學研究發展、藥物研發等領域的關鍵推動者。我們為您提供蛋白和免疫研究用戶最喜愛的產品，從免疫學基礎產品，如蛋白提取定量，到免