CD16：架起CAR-NK療法與NK細胞毒性作用之間的橋梁前言CAR-T細胞治療技術獲得快速發展，但不同的患者耐受力差別較大，甚至會產生神經毒性和細胞因子風暴，在實體瘤治療中沒有顯著效果。為了找到一種更加有效的治療技術，科學家用NK細胞替代T細胞，開發出CAR-NK細胞療法。1CAR-NK細胞療法優勢CAR-NK通過基因工程修飾使其表達CAR，將識別靶細胞表面抗原的抗體與激活免疫細胞所需的信號分子鏈接，突破抑制性受體的限制，激活NK細胞，增強NK細胞對靶細胞的特異性殺傷。CAR-NK細胞治療流程（源自參考文獻）CAR-NK具有更多腫瘤殺傷途徑，不會引起移植物抗宿主病。CAR-NK不分泌IL-1、IL-6等炎癥因子，不會誘發細胞因子風暴。CAR-NK對細菌、真菌及其他病毒病原體也有防御作用。CAR-NK在體內存活周期短，不易產生長期的不良反應。實體瘤對未修飾的NK細胞具有耐受性，但對抗原依賴型CAR-NK較敏感，因此CAR-NK對實體瘤治療具有明顯優勢。從美國臨床試驗注冊中心網站公示信息所知，目前已有多種CAR-NK臨床試驗在開展，大部分位于臨床Ⅰ/Ⅱ階段。從靶點來看，多數CAR-NK產品靶向常見的惡性血液腫瘤靶點，如CD19、CD22、BCMA、CD33等，也有部分靶向實體瘤相關靶點，如PSMA、MSLN、ROBO1、NKG2D等。2ADCC作用機制NK細胞發揮殺傷作用的機制主要有：執行細胞脫粒，如分泌穿孔素、顆粒酶等細胞毒性顆粒；表達腫瘤壞死因子（如FasL、TRAIL等），激活細胞凋亡；通過表達FcγRIII(CD16)與腫瘤抗原特異性抗體Fc段結合，介導抗體依賴性的細胞毒性作用（ADCC）。NK細胞發揮殺傷作用的機制（源自參考文獻）ADCC過程是抗體通過抗原結合部位識別并結合腫瘤細胞表面抗原以及Fc部位結合免疫效應細胞表面的Fc受體（FcR），免疫效應細胞得到激活，殺死腫瘤靶細胞。Fc受體主要有3種：FcγRI(CD64)、FcγRII(CD32)和FcγRIII(CD16)。與ADCC效應密切相關的是CD16a（激活型）以及CD32b（抑制型）兩個受體。當通過CD16a識別抗體時，NK細胞釋放不同的細胞毒性分子，從而引發靶細胞的死亡。CD16a是一種跨膜受體，具有兩個細胞外Ig樣結構域，細胞內部分不具有任何信號成分，為了傳遞信號，需要兩條帶有免疫受體酪氨酸基激活基序（ITAM）的信號鏈：CD3ζ和FcγRI。CD16a結合后，激酶LcK被激活，ITAM結構域磷酸化，將PIP2轉化為PIP3，釋放IP3和DAG。IP3誘導鈣從內質網釋放，觸發ADCC。其他如ERK2、MAPK通路也參與激活ADCC。3增強ADCC的策略用促炎細胞因子刺激NK細胞能夠提高ADCC活性。已有臨床試驗證實通過輸注細胞因子誘導記憶樣NK細胞，比傳統NK細胞表達更多的IFN-γ，對白血病細胞和原發性急性髓系白血病母細胞顯示出優越的細胞毒性。最常用的細胞因子組合包括IL-12、IL-15和IL-18。抑制ADAM17進而增強ADCC活性。ADAM17是激活后CD16a下調的主要驅動因素。通過靶向ADAM17來防止CD16a脫落，改善NK細胞ADCC。研究發現，對NK細胞中使用CRISPR/Cas9技術敲除ADAM17，顯示出更好的IFN-γ生成和體內外ADCC活性。工程化改造Fc，增強其對CD16a的親和力，進而改善ADCC。如GASDALIE由Fc中的4個替換（G236A/S239D/A330L/I332E）組成，對CD16a親和力顯著增加，而不影響與CD32b的親和力。還有突變體18（F243L/R292P/Y300L/V305I/P396L），ADCC顯著增加。另外抗體FcN-聚糖的去糖基化修飾，能夠增加與CD16a的結合，改善ADCC。雙特異性或三特異性抗體由scFv通過連接序列組成，一個單鏈抗體靶向CD16a，其它的靶向腫瘤抗原，使NK細胞重新定位到腫瘤細胞，增強針對靶細胞的ADCC作用。AFM13是一種靶向CD16a和CD30的雙特異性抗體，目前處于臨床Ⅱ期，用于治療外周T細胞淋巴瘤、轉化型蕈樣變性和霍奇金淋巴瘤。GTB-3550是一種CD16/CD33/IL-15的TRiKE形式，目前正在進行多種類型白血病的I/II期試驗研究（NCT03214666）。增強NK細胞治療的ADCC策略（源自參考文獻）靶向CD16a有助于解決當前癌癥免疫治療抗體的一些局限性，從而最大限度地提高ADCC，促進臨床效果。表達CD16a的CAR-NK細胞與高親和力Fc受體CD64(FcγRI)重組，顯示出更穩定且更強的ADCC效應。將CAR-NK細胞與抗體免疫療法結合使用，能夠克服NK細胞的損傷。其中CAR-NK細胞可以通過CAR獨立殺死靶細胞，也可以作為CD16陽性效應細胞介導ADCC。NK細胞是一組獨特的抗腫瘤效應細胞，具有不受MHC限制的細胞毒性、產生細胞因子和免疫記憶等功能，使其成為先天性和適應性免疫反應系統中的關鍵角色。對CD16a生物學進行深入了解有助于我們找到增強ADCC的策略，從而提高NK細胞的抗腫瘤活性。義翹神州CD16相關精品義翹神州已開發出多種CD16a、CD16b和CD64重組蛋白，覆蓋多種屬，且均經過活性驗證，以支持癌癥免疫治療研究。HumanCD16aProtein,Cat:10389-H08H1高純度>95%asdeterminedbySEC-HPLC具有結合活性ImmobilizedHumanCD16a(V176)canbindhumanIgG1(Cat:10702-HNAC)義翹神州CD16蛋白產品貨號靶點種屬純度及活性10389-H08C1CD16aHuman>95%，Active10389-H08H1Human>95%，Active10389-H27H1-BHuman>95%，Active80017-R08HRat>97%，Active90013-C08H1-BCynomolgus>90%11046-H08H1CD16bHuman>95%，Active11046-H27H1-BHuman>95%，Active11046-HNAE-BHuman>95%，Active義翹神州人CD16抗體產品貨號抗原類別Ig類型應用10389-H08C1CD16MouseMAbMouseIgG1FCM10389-R221RabbitMAbRabbitIgGFCM10389-MM02CD16aMouseMAbMouseIgG1ELISA10389-MM04MouseMAbMouseIgG1IHC-P10389-MM41-FMouseMAbMouseIgG1FCM11046-MM01CD16bMouseMAbMouseIgG2aELISA【參考文獻】1.FromCD16aBiologytoAntibody-DependentCell-MediatedCytotoxicityImprovement.FrontImmunol,2022.2.CAR-NKCell:anewparadigmintumorimmunotherapy,FrontiersinOncology,2021.3.Reimaginingantibody-dependentcellularcytotoxicityincancer:thepotentialofnaturalkillercellengagers.TrendsImmunol,2022.4.CAR-NKCells:FromNaturalBasistoDesignforKill.FrontImmunol,2021.5.NKcellsandsolidtumors:therapeuticpotentialandpersistingobstacles.MolCancer,20226.OutlookforNewCAR-BasedTherapieswithaFocusonCARNKCells:WhatLiesBeyondCAR-EngineeredTCellsintheRaceagainstCancer.CancerDiscov,2022.7.CAR-NKcellsforcancerimmunot