第二節微生物的培養技術及應用一微生物的基本培養技術人教版（2019）

高中生物選擇性必修三學習目標闡明微生物的基本培養技術，簡述微生物培養基的配方，舉例說明微生物純培養。1.文化基礎：微生物培養的條件和提純。2.自主發展：掌握微生物的實驗室培養和提純3.社會參與：運用相關技術解決生產生活中有關實際問題從社會中來食用自制酸奶導致腸胃不適屢見不鮮發酵物混入雜菌葡萄酒變酸1．培養基人們按照微生物對_________________的不同需求，配制出供其___________________的營養基質。一、培養基的配制營養物質生長繁殖按物理性質分類液體培養基：不含凝固劑、曾液體狀態的培養基固體培養基：呈固體狀態的培養基（加入凝固劑：如瓊脂）2．培養基的種類標準培養基類型配制特點主要應用物理狀態固體培養基加入瓊脂較多菌種分離,鑒定,計數半固體培養基加入瓊脂較少菌種保存液體培養基不加入瓊脂工業生產，連續培養成分合成培養基由已知成分配制而成，培養基成分明確菌種分類、鑒定天然培養基由天然成分配制而成，培養基成分不明確工業生產,降低成本用途，功能鑒別培養基添加某種指示劑或化學藥劑菌種的鑒別選擇培養基添加（或缺少）某種化學成分菌種的選擇，分離碳源氮源凝固劑3．培養基的營養組成各種培養基一般都含有水、_________、_________和無機鹽等營養物質，此外還需要滿足微生物生長對_________、特殊營養物質以及_________的需求。例如：乳酸桿菌霉菌細菌厭氧微生物培養基特殊處理碳源氮源PHO2添加維生素調至酸性調至中性或弱堿性提供無氧條件培養基的成分及功能營養物質作用功能主要來源碳源能為微生物代謝提供碳元素構成生物體的細胞物質和一些代謝產物，有些是異養生物的能源物質無機碳源：CO2、NaHCO3等；有機碳源：糖類、脂質、蛋白質、有機酸等氮源能為微生物的代謝提供氮元素合成蛋白質、核酸以及含氮的代謝產物無機化合物：N2、NH3、銨鹽、硝酸鹽等；有機氮源：尿素、牛肉膏、蛋白胨等水是生命活動所必需的不僅是優良的溶劑，而且可維持生物大分子結構的穩定外界攝入無機鹽為微生物提供除碳、氮以外的各種重要元素，包括大量元素細胞內的組成成分，生理調節物質，某些化能自養菌的能源，酶的激活劑無機化合物二、無菌技術1．獲得純凈的微生物培養物的關鍵：防止___________________。2．消毒和滅菌消毒和滅菌主要工作包括兩個方面：（1）對操作的空間、操作者的衣著和手進行清潔和消毒。（2）將用于微生物培養的器皿、接種用具和培養基等進行滅菌。雜菌污染（4）避免已滅菌處理的材料用具與周圍物品相接觸。（3）為避免周圍微生物污染，實驗操作應在酒精燈火焰附近進行相關儀器高壓蒸汽滅菌鍋干熱滅菌箱超凈工作臺比較消毒和滅菌

消毒滅菌概念使用較為____________的物理、化學或生物等方法殺死物體________或內部一部分微生物使用___________的理化方法殺死物體內外__________的微生物，包括_______________。常用方法________消毒法、巴氏消毒法、化學藥物消毒法、紫外線消毒法__________滅菌、干熱滅菌、__________滅菌適用對象操作空間、雙手等接種環、接種針、玻璃器皿、培養基等溫和表面強烈所有芽孢和孢子煮沸濕熱灼燒常用方法對象作用消毒煮沸消毒法：在100℃下煮沸5-6min一般物品巴氏消毒法：70-75℃煮30min或在80℃下煮15min一些不耐高溫的液體,如牛奶化學藥劑消毒法如酒精擦拭雙手，氯氣消毒水源等紫外線消毒法：30W紫外燈照射30min。照射前，適量噴灑石碳酸或煤酚皂溶液等消毒液，可以加強消毒效果接種室、接種箱、超凈工作臺等消毒的具體方法殺死微生物的營養細胞和一部分芽孢殺死絕大多數微生物，不破壞牛奶營養成分使微生物的蛋白質變性，失去正常功能而死亡殺死物體表面或空氣中的微生物常用方法對象作用滅菌灼燒滅菌：酒精燈火焰的充分燃燒層接種工具，如接種環、接種針或其他金屬用具干熱滅菌：160-170℃下加熱1-2h能耐高溫的、需要保持干燥的物品，如玻璃器皿（吸管、培養皿）和金屬用具高壓蒸汽滅菌：壓力為100kPa，溫度為121℃下滅菌15-30min培養基的滅菌(2)滅菌的具體方法：殺死物體內外所有的微生物，包括芽孢和孢子3．用于生物消毒的微生物具有什么特點？1.無菌技術除了用來防止實驗室的培養物被其他外來微生物污染外，還有什么目的？提示：無菌技術還能有效避免操作者被微生物感染。2．對培養基、培養皿、接種環、實驗者的雙手、空氣和牛奶常采用的滅菌或消毒方法分別是什么？提示：分別為高壓蒸汽滅菌、干熱滅菌、灼燒滅菌、化學藥物消毒、紫外線消毒、巴氏消毒。提示：用于生物消毒的微生物能產生殺死其他微生物的代謝產物或是寄生性的微生物。思考與討論培養物純培養物純培養概念三、微生物的純培養將接種于培養基內，合適條件下形成的含特定種類微生物的群體由單個體繁殖所獲得的微生物群體獲得純培養物的過程酵母菌的純培養(1)菌落：分散的微生物在適宜的________________表面或內部可以繁殖形成肉眼可見的、有一定形態結構的___________________。

固體培養基子細胞群體菌落特征：大小、形狀、光澤度、顏色、透明度等。鑒定菌種的重要依據平板劃線稀釋涂布平板(2)獲得單菌落的方法：________________法和_________________法。配置培養基：稱取去皮馬鈴薯200g切塊,加水1000mL,煮爛，用紗布討濾,加20g________，15—20g_________用蒸餾水定容至1000mL。滅菌：配制好的培養基轉移到錐形瓶中進行___________滅菌；培養皿進行滅菌。倒平板：待培養基冷卻至______0C，在__________附近倒平板①制備培養基②接種和分離通過_________在固體培養基表面連續劃線的操作，將聚集的菌種逐步__________到培養基的表面。③培養酵母菌完成平板劃線后，待菌液被培養基吸收，將接種后的平板和______的平板________，放入280C左右的__________的培養24—48h.葡萄糖瓊脂高壓蒸汽50酒精燈火焰接種環稀釋分散未接種倒置恒溫培養箱（3）方法步驟：4.倒平板的具體操作①拔出錐形瓶的棉塞。提示：500C，酒精燈火焰附近②將瓶口迅速通過該火焰③用拇指和食指將培養皿打開一條稍大于瓶口的縫隙，將培養基（10-20ml)倒入培養皿，立即蓋上皿蓋。④等待培養基冷卻凝固后，將培養皿倒過來放置。5.平板劃線法的具體操作①將接種環放在火焰上灼燒，直到接種環的金屬絲燒紅。②在火焰旁冷卻接種環。同時，拔出裝有酵母菌培養液的試管的棉塞。③將試管口通過火焰。④在火焰附近用接種環蘸取一環菌液。⑤將試管口通過火焰，并塞上棉塞。⑥在火焰附近將皿蓋打開一條縫隙，用接種環在培養基表面迅速劃三至五條平行線，蓋上皿蓋。⑦灼燒接種環，待其冷卻后，從第一次劃線的末端開始作第二次劃線。重復以上操作，作第三、四、五次劃線。注意不要將最后一次劃線與第一次的劃線相連。④劃線用力要大小適當，防止用力過大劃破培養基。(1)平板劃線法的注意事項：①接種環的灼燒：a．第一次劃線前：殺死接種環上的微生物，避免污染培養物。b．每次劃線前：殺死殘留菌種，保證每次劃線菌種來自上次劃線末端。c．劃線結束后：殺死殘留菌種，避免污染環境和感染操作者。②灼燒接種之后，要冷卻后再進行操作，以免溫度太高殺死菌種。③劃線時最后一區域不要與第一區域相連。提示：未接種的培養基是不能有菌生長的,如果有菌生,長則說明受到污染或者滅菌不徹底.不僅表面不能有菌生長,內部也不能有菌生長.正確的做法是:配好培養基之后，將培養基放在溫箱里培養24小時觀察,長菌的培養基應該丟棄，無菌生長的方能使用.這樣做的另一個好處是將培養基上的水氣和培養基表面的水蒸發干,不會對細菌培養產生影響。1.在未接種的培養基表面是否有菌落生長?如果有，說明了什么?2.如果你觀察到了不同形態的菌落，你能分析出可能是由哪些原因引起的嗎?提示：培養基滅菌不徹底或接種過程中感染了雜菌。思考與討論四、練習與應用1．下列關于滅菌和消毒的說法不正確的是(

)A．滅菌是指殺死環境中的所有微生物，包括芽孢和孢子B．滅菌和消毒實質上是相同的C