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DB21Thetechnicalspecificationsfordiagnosistechnologyofcaninecoronavirusdisease遼寧省市場監督管理局發布I 1 1 1 1 1 1 1 1 2 2 2 2 3 4 4 4淼、張旭、章春燕、俞向前、張建平、馬強、高靜薦1犬冠狀病毒病診斷技術規范本標準規定了犬冠狀病毒病診斷的技術方法、步驟和結果判件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改版本）適用于本文件。GB/T6682分析實驗室用水規格和NY/T541獸醫診斷樣品采集、保存與運輸技術規范3.1犬冠狀病毒Caninecoronavir屬于冠狀病毒科冠狀病毒屬，呈圓形或橢圓形，有囊膜，囊膜表面有纖突，病毒核酸為單股RNA病3.2犬冠狀病毒病Caninecoronavirusd3.4CRTCapillaryfil疫學（CCV膠體金檢測試紙）和分子生物學（RT-PCR病毒基4.1流行病學診斷24.1.1病犬和帶毒犬是主要傳染源，病犬和帶毒犬糞便中含有大量CC4.1.3本病一年四季均可發生，但冬季多發；該病的發生和嚴重程度常與斷乳、運輸、氣溫驟變、飼4.2臨床癥狀診斷4.2.5腹瀉：嘔吐的同時，出現腹瀉，糞便由糊狀、半糊狀變至水樣，其顏色由暗綠色或灰綠色逐漸兩前肢觸地，低頭拱背而坐的姿勢，后期，肛門括約肌松弛，4.2.7血常規檢查：白細胞計數大多正常或偏低，也有少數升高者，時有淋巴細胞增高或出現變異型4.2.8全身變化：發病后期，病犬眼球深陷，CRT時間延長，呼/create/edit/?eid=6034396&sid=6247400&secid=64.3病理學診斷4.3.2組織學變化：表現為小腸絨毛萎縮變短并融合，粘膜固有層細胞成份增多，隱窩加深，上皮細4.4應用現代免疫學（CCV膠體金檢測試紙）診斷用棉簽取適量新鮮糞便；將棉簽浸入樣品3將未開封的試紙卡和檢測樣品恢復至室溫；將試紙卡水平放置，用滴管向試紙卡孔緩慢逐滴陽性：C線顯示紅色色帶，T線也4.5.1檢測試劑和儀器預冷）、DEPC水（1000mL雙蒸水中加入1mLDEPC，室溫下持續攪拌過夜，121℃高壓滅菌25min）、RNA酶抑制劑（40U/μL）、TaqDNA聚合酶（5U/μL）、dNTP(2.5mmol羥甲基氨基甲烷-乙酸電泳緩沖液、溴化乙錠、DL2000DNA本規范中使用的設備：PCR擴增儀，高速冷凍離心機，核酸電泳儀和水平電泳槽，組織均漿機或研4.5.2病料采集與處理：按照NY/T541獸醫4上游引物：5’-TCCAGATATGTAATGTTCGG-3’下游引物：5’-TCTGTTGAGTAATCACCAGCT-3’被檢樣品電泳出現40

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