臨床微生物實驗室血培養操作規范WS/T

503-2017臨床微生物實驗室血培養操作規范的范圍是？(P5)臨床微生物實驗室血培養操作規范的術語和定義包括？(P6)可疑感染患者的采血指征是？(P7)臨床微生物實驗室血培養如何進行檢驗申請？(P8)進行血樣采集和培養瓶接種時，正確的采血時間是？(P9)進行血樣采集和培養瓶接種時，正確的采集套數是？(P10)進行血樣采集和培養瓶接種時，正確的采血量是？(P11)進行血樣采集和培養瓶接種時，正確的采集方法是？(P12-14)血培養瓶如何進行運送？(P15)血培養瓶如何進行接收？(P16)2內

容臨床微生物實驗室對血培養的操作方法有哪些？(P17)臨床微生物實驗室對血培養加入添加劑的操作方法和流程是？(P18)臨床微生物實驗室對血培養進行手工培養法的操作方法和流程是？(P19-22)臨床微生物實驗室對血培養進行自動化儀器培養法的操作方法和流程是？(P23)臨床微生物實驗室對血培養進行室內質控法的操作方法和流程是？(P24)發生導管相關血流感染如何進行血培養？(P25-27)發生感染性心內膜炎，如何進行血培養？(P28)血培養特殊病原體的處理流程是？(P29-30)血培養污染后的處理流程是？(P31)血培養報告程序是？(P32-33)3內

容血培養安全防護包括？(P34-37)血培養菌株如何保存？(P38)4內

容本標準規定了血培養臨床微生物檢驗的技術要求。本標準適用于開展血培養的臨床微生物實驗室。（來源：臨床微生物實驗室血培養操作規范WS/T

503-2017

1范圍）5下列術語和定義適用于本文件。一套血培養

one

set

of

blood

culture：從同一穿刺點采集的血液標本，通常分別注入需氧和厭氧培養瓶。輸液港

access

ports：完全植入人體內的閉合輸液裝置，包括尖端位于上腔靜脈的導管部分及埋植于皮下的注射座。血培養污染率

rate

of

blood

culture

contamination：污染的血培養標本數占同期的血培養標本總數的比例。計算公式∶（來源：臨床微生物實驗室血培養操作規范

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2

術語和定義）6可疑感染患者出現以下任一指征時，可考慮采集血培養∶a）體溫>38

℃或<36

℃;寒戰;外固血白細胞計數增多（計數>10.0×109

/L，特別有"核左移"時）或減少（計數<4.0×109

/L）;呼吸頻率>20

次/min

或動脈血二氧化碳分壓（PaCO2

）<32

mmHg;e）心率>90

次/min;f）皮膚黏膜出血;g）昏迷;h）多器官功能障礙;i）血壓降低;j）炎癥反應參數如

C反應蛋白、降鈣素原（PCT）、1，3-β-D-葡聚糖（G

試驗）升高等。（來源：臨床微生物實驗室血培養操作規范

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3

血樣采集和培養瓶接種

3.1

采血指征）7申請單應明確標識患者基本信息、申請醫師信息、標本類型、采集部位申請項目、臨床診斷、采血時間，并盡可能提供其他治療相關信息，如抗菌藥物使用情況。（來源：臨床微生物實驗室血培養操作規范

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3

血樣采集和培養瓶接種

3.2

檢驗申請）8寒戰或發熱初起時采集。抗菌藥物應用之前采集最佳。（來源：臨床微生物實驗室血培養操作規范

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3

血樣采集和培養瓶接種

3.3

采血時間）91.成人每次應采集

2

套～3

套，每套從不同穿刺點進行采集，2

d～5

d內無需重復采集。如懷疑感染性心內膜炎，應重復采集多套。兒童通常僅采集需氧瓶。有以下高危因素時應考慮厭氧瓶培養∶其母產褥期患腹膜炎，或慢性口腔炎或鼻竇炎、蜂窩組織炎、有腹腔感染的癥狀和體癥、咬傷、接受類固醇治療的粒細胞缺乏患兒。考慮肺炎鏈球菌菌血癥時，宜同時做腦脊液培養。（來源：臨床微生物實驗室血培養操作規范

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3

血樣采集和培養瓶接種

3.4

采集套數）101.成人每瓶采血量

8

mL～10

mL，或按照說明書采集；嬰幼兒及兒童采血量不應超過患者總血量的

1%，具體采血量參考說明書。若采血量充足，注射器采集的血液先注入厭氧瓶，后注入需氧瓶，碟形針采集的血液反之。若采血量不足，優先注入需氧瓶。（來源：臨床微生物實驗室血培養操作規范

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3

血樣采集和培養瓶接種

3.5

采血量）111.采集靜脈血;僅在評估導管相關性血流感染時采集導管血。血培養宜單獨采血，與其他檢測項目同時采血，應先接種血培養瓶，以避免污染。采集前做好手衛生，靜脈穿刺點選定后，去除血培養瓶的塑料瓶帽，切勿打開金屬封口環和膠塞，使用75%乙醇或

70%異丙醇消毒，自然干燥

60

s。注意采血前檢查血培養瓶是否完好無損、是否過期。在穿刺前或穿刺期間，為防止靜脈滑動，應戴無菌乳膠手套固定靜脈。（來源：臨床微生物實驗室血培養操作規范

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3

血樣采集和培養瓶接種

3.6

采集方法）124.穿刺點皮膚消毒∶a）三步法∶第一步∶75%乙醇擦拭靜脈穿刺部位，待干

30

s

以上;第二步∶1%～2%碘酊作用

30

s

或

1%碘伏作用

60

s，從穿刺點向外畫圈消毒，消毒區域直徑達3

cm

以上;第三步∶75

%乙醇擦拭碘酊或碘伏消毒過的區域進行脫碘。對碘過敏的患者，在第一步基礎上再用

75%乙醇消毒

60

s，待酒精揮發干燥后采血。b）一步法∶0.5%葡萄糖酸洗必泰作用

30

s（不適用于2

個月以內的新生兒），或70%異丙醇消毒后自然干燥（適用于2個月以內的新生兒）。注意穿刺點消毒后不可再碰觸。注∶

其他消毒劑需要進行消毒能力和適用性驗證后才可使用。（來源：臨床微生物實驗室血培養操作規范

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血樣采集和培養瓶接種

3.6

采集方法）135.用注射器無菌穿刺取血后，勿換針頭（如行第二次穿刺，換針頭），直接注入血培養瓶，不應將抗凝血注入血培養瓶。血液接種到培養瓶后，輕輕顛倒混勻以防血液凝固。完成工作后洗手。污染率評估;實驗室應定期對血培養污染率進行評估，污染率應控制在

3%以下。（來源：臨床微生物實驗室血培養操作規范

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3

血樣采集和培養瓶接種

3.6

采集方法）141.血培養瓶應在

2

h

之內送至實驗室孵育或上機；如不能及時送檢，應將血培養瓶置于室溫下，切勿冷藏或冷凍。應采用密封的塑料袋和硬質防漏的容器運送標本。若運送到參考實驗室，應使用符合生物安全規定的包裝。（來源：臨床微生物實驗室血培養操作規范

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血培養瓶運送）15實驗室收到血培養瓶后，應盡快接收并評估和記錄標本質量（如采集時間、血標本量、瓶數、轉運時間和條件、申請單信息和標識等），評估合格后立即孵育。若培養瓶延遲送檢而提示已有細菌生長，則應直接進行涂片鏡檢。經評估后不合格血培養瓶（如血培養瓶標識錯誤或無標識，破碎，損壞，滲漏，凝血等情況），應拒收并盡快告知申請醫師。以下情況可以接收但應告知申請醫師∶a）采血量不足;血培養瓶套數或瓶數不夠;成人樣本僅接種需氧或厭氧瓶。3.特殊情況∶實驗室應有緊急預案，如在常規血培養系統故障時，如何對血培養瓶處理和孵育等。（來源：臨床微生物實驗室血培養操作規范WS/T

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血培養瓶接收）161.添加劑手工培養法；自動化儀器培養法；室內質控。（來源：臨床微生物實驗室血培養操作規范

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6

實驗室操作方法及流程）171.抗凝劑抗凝劑使用聚茴香腦磺酸鈉（SPS），濃度為

0.025%～0.05%。肝素、檸檬酸鹽和乙二胺四乙酸（EDTA）不能作為抗凝劑加入血培養瓶中，但在檢測分枝桿菌時，也可選用肝素或檸檬酸鹽抗凝。2.抗生素吸附劑推薦使用樹脂。（來源：臨床微生物實驗室血培養操作規范

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6

實驗室操作方法及流程

6.1

添加劑）181.培養基①傳統肉湯培養基傳統肉湯體積應為

18

mL～100

mL。需氧培養基;胰酶消化大豆肉湯，腦心浸液肉湯，哥倫比亞肉湯。微需氧或厭氧菌培養需添加硫醇，硫基乙酸鹽；苛養菌培養需添加溶血素、維生素

K1

和

L

型半胱氨酸。②雙相培養基同時含有瓊脂和肉湯的血培養瓶，可用于成人或兒童患者的需氧菌、厭氧菌和分枝桿菌培養。血液注入后顛倒培養瓶，使血液和肉湯混合物沖刷瓊脂表面，再將培養瓶垂直孵育，觀察肉湯和瓊脂表面有無微生物生長。（來源：臨床微生物實驗室血培養操作規范

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6

實驗室操作方法及流程

6.2

手工培養法

）19③溶血肉湯培養基使微生物從裂解的血液中釋放出來后，通過離心將其與血液成分分離，沉淀物轉種固體培養基進行孵育。④真菌培養基應用上述三種培養基都可檢出酵母菌，但雙相真菌和絲狀真菌宜用雙相培養基和溶血肉湯培養基。糠秕馬拉色菌需要在培養基中添加油脂（如橄欖油）。⑤分枝桿菌培養基分枝桿菌如在傳統肉湯培養基中延長孵育時間也能生長。在肉湯中添加脂肪酸（如不飽和脂肪酸）、白蛋白和

CO2

更適合分枝桿菌生長。分枝桿菌中某些種（日內瓦分枝桿菌和嗜血分枝桿菌）生長時需要添加劑（分枝桿菌生長素、溶血素、血紅蛋白或檸檬酸鐵胺）。（來源：臨床微生物實驗室血培養操作規范

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6

實驗室操作方法及流程

6.2

手工培養法

）202.培養方法①一般情況推薦

35

℃～37

℃孵育

7d，一些緩慢生長的苛養菌（如巴爾通體、李斯特菌屬、布魯菌屬和奴卡菌屬等）和雙相真菌需要更長的孵育時間。手工法應每天或更頻繁地觀察肉眼可見的微生物生長，特別注意孵育

48

h

內的生長跡象。使用明亮的熒光燈泡或白熾燈，觀察濁度、溶血、產氣、表面菌落形成和血液顏色的改變，發現有微生物生長跡象進行涂片革蘭染色和轉種，根據涂片染色結果選擇培養基類型。②真菌酵母菌在需氧瓶中易生長，搖動肉湯培養可提高酵母菌的檢出率。多數酵母菌孵育

2

d～5d可檢測出，某些酵母菌如新型隱球菌需延長孵育時間。懷疑雙相真菌或絲狀真菌感染，孵育時間需延長

2

w～4

w。雙相培養瓶在孵育的最初

24

h

內，應輕輕搖動。27

℃～30

℃和

35

℃～37

℃同時孵育。（來源：臨床微生物實驗室血培養操作規范

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6

實驗室操作方法及流程

6.2

手工培養法

）212.培養方法①一般情況推薦

35

℃～37

℃孵育

7d，一些緩慢生長的苛養菌（如巴爾通體、李斯特菌屬、布魯菌屬和奴卡菌屬等）和雙相真菌需要更長的孵育時間。手工法應每天或更頻繁地觀察肉眼可見的微生物生長，特別注意孵育

48

h

內的生長跡象。使用明亮的熒光燈泡或白熾燈，觀察濁度、溶血、產氣、表面菌落形成和血液顏色的改變，發現有微生物生長跡象進行涂片革蘭染色和轉種，根據涂片染色結果選擇培養基類型。②真菌酵母菌在需氧瓶中易生長，搖動肉湯培養可提高酵母菌的檢出率。多數酵母菌孵育

2

d～5d可檢測出，某些酵母菌如新型隱球菌需延長孵育時間。懷疑雙相真菌或絲狀真菌感染，孵育時間需延長

2

w～4

w。雙相培養瓶在孵育的最初

24

h

內，應輕輕搖動。27

℃～30

℃和

35

℃～37

℃同時孵育。③分枝桿菌：由于分枝桿菌繁殖緩慢，所有培養瓶應至少孵育6

w。（來源：臨床微生物實驗室血培養操作規范

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6

實驗室操作方法及流程

6.2

手工培養法

）221.培養基商品化培養瓶包括需氧瓶、厭氧瓶、兒童瓶真菌培養瓶及分枝桿菌培養瓶。2.培養方法①一般情況：35

℃～37

℃孵育

5

d，一些緩慢生長的苛養菌（如巴爾通體

、李斯特菌屬和奴卡菌屬等）和雙相真菌需要延長孵育時間。自動化血培養系統每間隔一定時間自動通過電子感應器檢測微生物生長代謝過程中產生的CO2

。濃度或氣壓變化，陽性報警后需要立即處理。對于已經培養5

d

的陰性瓶不需要常規盲傳或終點轉種。②真菌：宜采用真菌培養瓶。③分枝桿菌：宜采用分枝桿菌培養瓶。（來源：臨床微生物實驗室血培養操作規范

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6

實驗室操作方法及流程

6.3

自動化儀器培養法）231.手工培養法對培養基、革蘭染色、鑒定試劑、藥敏試驗、結果審核和報告解釋等每個項目制訂相應的質控標準操作程序。2.自動化儀器培養法按廠商推薦的方法進行。（來源：臨床微生物實驗室血培養操作規范

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實驗室操作方法及流程

6.4

室內質控

）241.短期外周導管的血培養采集

2

套外周靜脈血培養。無菌操作拔除導管，剪切導管尖端5

cm，采用

Maki半定量培養。結果解釋如下∶如1套或以上血培養陽性，并且導管尖端培養陽性（≥15

個菌落），血培養與導管尖端培養菌種相同，提示為導管相關性血流感染（CRBSI）;如1套或以上血培養陽性，并且導管尖端培養陰性，無法判斷;但如血培養分離株為金黃色葡萄球菌或念珠菌屬，并且沒有其他明確的感染源，提示為

CRBSI;如

2

套血培養陰性，但導管培養陽性，提示為導管定植;如

2

套血培養和導管尖端培養均為陰性，不考慮

CRBSI。（來源：臨床微生物實驗室血培養操作規范

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實驗室操作方法及流程

7

導管相關血流感染）252.中心靜脈導管及靜脈輸液港（VAP）的血培養①保留導管的患者血培養至少采集

1套靜脈外周血培養，同時應盡快采集等量的1套導管血培養。結果解釋如下;如

2

套血培養得到的菌株其鑒定結果和藥敏譜均相同，并且沒有其他明確感染源，提示為CRBSI。如

2

套血培養均陽性并且分離的菌種相同，導管血陽性報警時間比外周血陽性報警時間早≥120

min，又沒有其他明確感染源，則提示為

CRBSI（如導管血陽性報警時間比外周血陽性報警時間早<120

min；2

套血培養獲得鑒定與藥敏譜相同的分離株，也可能為

CRBSI）。如僅導管血培養陽性，提示導管有細菌定植或污染。如僅外周血培養陽性;不能確定為CRBSI。若血培養陽性株為金黃色葡萄葡球菌或念珠菌屬，并且沒有其他明確的感染源，則可能為

CRBSI。如

2套血培養均陰性，不考慮

CRBSI。（來源：臨床微生物實驗室血培養操作規范

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實驗室操作方法及流程

7

導管相關血流感染）26②擬拔除導管的患者血培養至少采集

1套外周血培養。無菌操作拔除導管，剪切導管尖端5

cm，采用

Maki半定量培養。結果解釋如下∶如

1套以上血培養和導管尖端培養陽性，并且菌種鑒定與藥敏譜相同，提示為

CRBSI。如

1

套以上血培養陽性且導管尖端培養陰性，若血培養陽性株為金黃色葡萄球菌或念珠菌屬，則可能為

CRSBI。如需要進行確認，要求進一步采集其他外周血培養，獲得陽性且為同一菌種，沒有其他明確的感染源，提示為

CRBSI。如血培養陰性，導管尖端培養陽性，提示定植。如外周血培養和導管尖端培養均為陰性，不考慮

CRBSI。（來源：臨床微生物實驗室血培養操作規范

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導管相關血流感染）271.采集血培養時機及數量：①急性心內膜炎：應立即采集血培養。宜在經驗用藥前

30

min

內不同部位采集

2～3

套血培養。②亞急性心內膜炎：宜每隔

0.5

h～1h采集1套血培養，不同部位共采集

3

套血培養。如

24h培養陰性，宜加做

2

套血培養。假陽性：假陽性最常見的原因是皮膚寄生菌污染。因此可疑感染性心內膜炎患者采集血培養應對采集點皮膚進行徹底消毒，且不應從留置導管處采血，避免出現假陽性結果。假陰性：假陰性最常見原因是在采血時患者已使用抗菌藥物，為降低假陰性，宜使用含樹脂的血培養瓶。另一個原因是營養變異鏈球菌（如毗鄰顆粒鏈菌、乏養菌屬）感染。孵育時間：常見病原體

5

d內培養陽性。如培養

5

d仍陰性，而臨床懷疑感染性心內膜炎，則應傳種至不含抗菌藥物的巧克力平皿，5%

CO2

培養。（來源：臨床微生物實驗室血培養操作規范

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8

感染性心內膜炎）281.乏養菌屬和顆粒鏈菌屬：這類菌在大豆胰蛋白胨血瓊脂平板上不生長，次代培養時要求血培養基中補充吡哆醛或L

型半胱氨酸;或同時接種金黃色葡萄球菌，該菌呈"衛星"生長現象;或采用巧克力培養基、厭氧血瓊脂等營養豐富的培養基進行培養。巴爾通體：血培養陽性率低，推薦血清學和分子生物學方法檢測。布魯菌屬：大多數布魯菌需氧瓶培養

3

d

內陽性，很少超過

7

d。彎曲菌屬：空腸彎曲菌可在血培養中出現，其在傳種后

42

℃生長較快，微需氧孵育48

h后可看到微小菌落。5.弗朗西斯菌屬：不同菌株生長速度不同，孵育時間不定。由于其菌體微小，形態多樣，革蘭染色易漏檢。土拉熱弗朗西斯菌可在標準血培養瓶中生長，初代培養可在標準羊血瓊脂生長，次代培養不生長。有些菌株初代僅在巧克力瓊脂平板生長。（來源：臨床微生物實驗室血培養操作規范

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9

血培養特殊病原體的處理流程）296.HACEK

菌群：包括嗜血桿菌屬（H）、放線桿菌屬（A）、心桿菌屬（C）、艾肯菌屬（E）和金氏桿菌屬（K）。多數血培養可在

7d內陽性報警。如高度懷疑心內膜炎是由

HACEK

細菌引起的，而

5

d后血培養仍為陰性，應延長培養時間或盲傳。螺桿菌屬：螺桿菌屬感染多發生于免疫缺陷患者中。血培養瓶通常孵育

5

d以上，并且在培養結束后，盲傳至血平板，微需氧孵育。軍團菌屬：肺炎繼發菌血癥少見，孵育培養

5

d后，采用溶解-離心系統傳種于活性炭酵母浸膏（BCYE）培養基培養。鉤端螺旋體：血培養中難分離。支原體：人型支原體偶爾可從血培養中分離出來，添加補充明膠或精氨酸，可以提高檢出率，生長緩慢并采用專用培養基。可疑肺炎支原體和人型支原體感染血液可以直接接種

pH4.5

SP4

葡萄糖培養基。（來源：臨床微生物實驗室血培養操作規范

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血培養特殊病原體的處理流程）301.即便嚴格遵守無菌操作，仍有

3%～5%的血培養瓶中培養出皮膚（如表皮葡萄球菌、痤瘡丙酸桿菌、梭菌、類白喉棒狀桿菌）或周圍環境（如不動桿菌屬、芽孢桿菌屬）中常見菌。這些菌大部分為污染菌，但出現以下情況考慮可能為致病菌∶不同部位血培養標本培養出同一種菌;多次分離出同一種菌，且藥敏結果相同。污染菌不需做藥敏試驗，但應向臨床報告，并提示可能污染，如痤瘡丙酸桿菌（皮膚寄生菌）。血培養中兩種或兩種以上細菌生長，可能是復數菌菌血癥，如厭氧菌菌血癥時可能有多種病原菌感染;也可能是污染所致。（來源：臨床微生物實驗室血培養操作規范

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10

血培養污染）311.血培養陽性報告程序①

一級報告（初步報告）血培養陽性，應立即進行涂片和革蘭染色，盡量在

1

h

內報告給臨床醫師，包括∶患者姓名、陽性血培養瓶類型、瓶數、報警時間、涂片革蘭染色特性及形態，詢問患者目前感染情況和抗菌藥物使用情況并記錄，可向醫師提出治療建議。此外，還應記錄報告時間、接收報告者信息和報告者信息。同時將陽性培養液傳種適當培養基。各單位可根據自身醫療需求，決定是否基于涂片結果用培養液進行直接藥敏試驗。②二級報告（補充報告）將初步鑒定結果及時報告醫師。如進行直接藥敏試驗，應報告藥敏結果。③三級報告（終報告）包括菌種名稱、血培養陽性時間（以小時計算）和標準藥敏試驗結果。注∶

隨著微生物快速診斷技術如基質輔助激光解吸電藕飛行時間質譜（MALFI-TOF）的應用，菌種鑒定結果有可能在第

1d或第

2d

即可報告。（來源：臨床微生物實驗室血培養操作規范

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11

血培養報告程序）322.血培養陰性報告程序①

報告內容∶"血培養經××天培養陰性"。自動化儀器細菌培養一般設定周期為5

d，真菌14

d，分枝桿菌42

d;手工法細菌培養一般周期設定為7

d，真菌14

d.分枝桿菌

60

d。②可在

72

h培養陰性后，發布初步報告，但應說明"培養

3

d陰性，標本將延長培養至××天，如為陰性可不重復報告"。如

72

h

后陽性，應按血培養陽性報告程序處理，與臨床溝通并補發陽性報告。③手工法血培養在報告培養陰性前，宜將血培養液盲傳至血瓊脂平板和巧克力平板，于

CO，培養箱內孵育

24

h，培養陰性后再報告。3.報告審核實驗室應對陽性血培養涂片口頭報告。應建立初步報告和最終報告的審核制度，并進行定期匯總分析，對實驗室信息系統（LIS）需進行傳輸和性能驗證。實驗室應對以上項目制訂標準操作流程。（來源：臨床微生物實驗室血培養操作規范

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實驗室操作方法及流程

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血培養報告程序）331.安全培訓對實驗室員工進行安全培訓，應涵蓋所有實驗室活動。實驗室質量保證體系的核心內容應包括培訓、監測、事故報告、安全相關文件。實驗室感染針刺傷感染;暴露的皮膚黏膜，接觸氣溶膠或微滴是主要感染途徑。禁止在污染區用嘴吹吸移液管、咬指甲、抽煙、飲食、摘戴隱形眼鏡、手或其他環境表面與眼、鼻、嘴接觸等。防護措施（1）洗手：在戴手套前、摘手套后、工作結束后、離開實驗室和進入清潔區時均應洗手。如直接接觸血液或潛在的感染性物質后應