ICS13.020.01CCSZ003401IDB3401/T231—2021前言 2規范性引用文件 3術語和定義 4一般要求 2人員 2場所與設備 2安全防護 2記錄 25管理流程 2流程概述 2采購 2驗收 2保藏 2期間核查 2制備 3銷毀 4附錄A（資料性）菌株的代數、使用類型、繼承關系 5附錄B（規范性）標準菌株管理流程 6附錄C（資料性）記錄表 7附錄D（規范性）標準儲備菌株制備流程 附錄E（規范性）儲備菌株制備流程 附錄F（規范性）工作菌株制備流程 DB3401/T231—2021本文件按照GB/T1.1—2020《標準化工作導則第1部分：標準化文件的結構和起草規則》的規定起草。請注意本文件的某些內容可能涉及專利。本文件的發布機構不承擔識別專利的責任。本文件由合肥市生態環境局提出并歸口。本文件起草單位：安徽海峰分析測試科技有限公司、中國建材檢驗認證集團安徽有限公司、合肥市環境監測中心站、肥西縣環境監測站、安徽國測檢測技術有限公司、安徽海恒檢測技術有限公司、安徽省環境檢測行業協會、合肥志鵬環保職業培訓學校有限公司。本文件主要起草人：丁月、王家菊、程燕、劉莎莎、夏晴、夏俊雅、戴光玉、李偉、楊圣廣、張漢昌、孫美慧、王莉莉、牛俊、崔建雙。1DB3401/T231—2021生態環境檢測實驗室標準菌株管理規范本文件規定了生態環境檢測實驗室標準菌株管理的一般要求和流程。本文件適用于生態環境檢測實驗室標準菌株的管理。2規范性引用文件下列文件中的內容通過文中的規范性引用而構成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB19489實驗室生物安全通用要求GB/T27405-2008實驗室質量控制規范食品微生物檢測GB50346生物安全實驗室建筑技術規范SN/T2660食品微生物實驗室菌種保藏方法3術語和定義GB/T27405-2008界定的以及下列術語和定義適用于本文件。標準菌株referencestrain至少定義到屬或種水平的菌株。按其特性進行分類和描述，有明確的來源。[來源：GB/T27405-2008，3.10]標準儲備菌株referencestocks標準菌株經過一代轉接后獲得的同種菌株。[來源：GB/T27405-2008，3.11]儲備菌株stockculture標準儲備菌株經過轉接后獲得的同種菌株。工作菌株workingcultures由標準菌株、標準儲備菌株、儲備菌株或4代以內經過轉接獲得的同種菌株，直接用于培養基檢驗、人員比對、陰性及陽性對照等實驗活動。代generation將微生物接種至新鮮培養基上或培養基內培養生長一次即為一代。注：按照菌株的傳代過程，對各代菌株的代數、使用類型、繼24.1人員3DB3401/T231—2021制備5.6.1制備要求5.6.1.1制備過程應在無菌條件下進行。5.6.1.2培養條件應按照供應商提供的使用說明書要求進行。5.6.1.3培養物應進行標識，標識內容應包括名稱、菌種號、傳代日期和代數及使用類型等信息。5.6.1.4應記錄制備信息，制備記錄表參見附錄C中的表C.4。5.6.2制備過程5.6.2.1復蘇拆開標準菌株的包裝，按照供應商提供的使用說明書要求對標準菌株進行復蘇。5.6.2.2平板分離采用非選擇性平板對復蘇后的標準菌株進行分離、純化。5.6.2.3確認對平板分離出的菌落進行存活性、純度確認。確認合格后，方可進行制備。如確認不合格，應及時滅菌銷毀。5.6.2.4標準儲備菌株制備挑取純菌落進行分裝保藏，即得到標準儲備菌株（第2代）。標準儲備菌株制備流程按照附錄D執行。標準儲備菌株不應作為標準菌株使用。5.6.2.5儲備菌株制備取標準儲備菌株，在非選擇性平板上轉種培養并驗證合格，挑取純菌落進行分裝保藏，即得到儲備菌株（第3代）。儲備菌株制備流程按照附錄E執行。儲備菌株不應作為標準儲備菌株或標準菌株使用。5.6.2.6工作菌株制備5.6.2.6.1由標準菌株制備工作菌株（第3代）取標準菌株，在復蘇、分離確認合格后，挑取純菌落轉接于斜面進行培養，即得到工作菌株（第3代）。制備流程按照附錄F圖F.1執行。工作菌株不應作為儲備菌株、標準儲備菌株或標準菌株使用。5.6.2.6.2由標準儲備菌株制備工作菌株(第4代)取標準儲備菌株，在非選擇性平板上轉種培養并驗證合格，挑取純菌落轉接于斜面進行培養，即得到工作菌株（第4代）。制備流程按照附錄F圖F.2執行。5.6.2.6.3由儲備菌株制備工作菌株(第5代)取儲備菌株，在非選擇性平板上轉種培養并驗證合格，挑取純菌落轉接于斜面進行培養，即得到工作菌株（第5代）。制備流程按照附錄F圖F.3執行。5.6.2.6.4由工作菌株(第3代)制備工作菌株（第4代）4DB3401/T231—2021取工作菌株（第3代），挑取純菌落轉接于斜面進行培養，即得到工作菌株（第4代）。制備流程按照附錄F圖F.4執行。5.6.2.6.5由工作菌株(第4代)制備工作菌株（第5代）取工作菌株（第4代），挑取純菌落轉接于斜面進行培養，即得到工作菌株（第5代）。制備流程按照附錄F圖F.5執行。銷毀5.7.1銷毀工作應由兩人共同操作，并對銷毀過程進行嚴格監督。5.7.2將需要銷毀的菌株和使用過的帶菌耗材經121℃高壓滅菌至少30min，再放入實驗室生物廢棄物處理桶。需要銷毀的菌株包括但不限于：a)解凍使用后的標準儲備菌株、儲備菌株；b)經確認或驗證不合格的菌株；c)超過保存期限的菌株；d)其他應廢棄的菌株。5.7.3廢棄物應按GB19489中廢物處置規定進行處理。5.7.4銷毀記錄表參見附錄C中的表C.5。5DB3401/T231—2021（資料性）菌株的代數、使用類型、繼承關系各代菌株的代數、使用類型、繼承關系見表A.1。表A.1各代菌株的代數、使用類型、繼承關系- 注：從標準菌株到標準儲備菌株、儲備菌株和工作菌株傳代培養次數不超過5次。6DB3401/T231—2021（規范性）標準菌株管理流程標準菌株管理流程見圖B.1。采購申請記錄合同 啟動工作計劃采購申請記錄合同 啟動工作計劃采購驗收記錄 驗收記錄驗收保藏、期間核查保藏、領用記錄期間核查記錄保藏、期間核查制備制備記錄制備銷毀銷毀記錄銷毀工作結束工作結束圖B.1標準菌株管理流程圖7DB3401/T231—2021記錄表C.1驗收記錄表見表C.1。表C.1驗收記錄表序號標準菌株名稱標準菌株來源菌株編號批號采購日期驗收日期驗收評價驗收人備注規格數量有效期包裝標識說明書證書存活性純度8DB3401/T231—2021C.2保藏與領用記錄表見表C.2。表C.2保藏與領用記錄表9DB3401/T231—2021C.3期間核查記錄表見表C.3。表C.3期間核查記錄表序號菌株名稱菌株來源菌株編號批號代數及使用類型保藏日期核查日期核查結果核查人備注外觀保藏條件有效期文件資料存活性純度關鍵生化特性DB3401/T231—2021C.4制備記錄表見表C.4。表C.4制備記錄表DB3401/T231—2021C.5銷毀記錄表見表C.5。表C.5銷毀記錄表注：廢棄菌株應標明編號、數量。DB3401/T231—2021（規范性）標準儲備菌株制備流程標準儲備菌株制備流程見圖D.1。標準菌株（第0標準菌株（第0代）按說明書要求復蘇（第1代）按說明書要求的培養條件，在非選擇性平板上分離（第2代）對分離出的菌落進行存活性、純度確認否否銷毀符合銷毀符合是挑取純菌落，用合適的保存介質進行分裝保藏標準儲備菌株（第標準儲備菌株（第2代）圖D.1標準儲備菌株制備流程圖DB3401/T231—2021（規范性）儲備菌株制備流程儲備菌株制備流程見圖E.1。標準儲備菌株（第標準儲備菌株（第2代）按說明書要求的培養條件，在非選擇性平板上分離（第3代）對分離出的菌落進行存活性、純度確認否銷毀符合否銷毀符合是挑取純菌落，用合適的保存介質進行分裝保藏儲備菌株（第儲備菌株（第3代）圖E.1儲備菌株制備流程圖DB3401/T231—2021（規范性）工作菌株制備流程F.1標準菌株制備工作菌株流程見圖F.1。標準菌株（第標準菌株（第0代）按說明書要求復蘇（第1代）按說明書要求的培養條件，在非選擇性平板上分離（第2代）對分離出的菌落進行存活性、純度確認銷毀否銷毀符合是挑取純菌落轉接于斜面培養生長工作菌株（第工作菌株（第3代）圖F.1標準菌株制備工作菌株流程圖DB3401/T231—2021F.2標準儲備菌株制備工作菌株流程見圖F.2。標準儲備菌株（第2標準儲備菌株（第2代）按說明書要求的培養條件，在非選擇性平板上分離（第3代）對分離出的菌落進行存活性、純度確認否符合銷毀否符合銷毀是挑取純菌落轉接于斜面培養生長工作菌株（第工作菌株（第4代）圖F.2標準儲備菌株制備工作菌株流程圖DB3401/T231—2021F.3儲備菌株制備工作菌株流程見圖F.3。儲備菌株（第3儲備菌株（第3代）按說明書要求的培養條件，在非選擇性平板上分離（第4代）對分離出的菌落進行存活性、純度確認否否銷毀符合銷毀符合是挑取純菌落轉接于斜面培養生長工作菌株（第工作菌株（第5代）圖F.3儲備菌株制備工作菌株流程圖DB3401/T231—2