藥品質量標準研究專題講座

藥品質量標準研究藥品質量標準研究第一部分

2010版GMP

實施指南—— QC實驗室

原料藥藥品質量標準研究3質量控制體系與質量控制實驗室關鍵質量控制原料藥無菌藥品

口服固體制劑中藥制劑生物制品/血液制品/疫苗2010版GMP質量控制藥品質量標準研究4全面的藥品生產質量管理體系模型,包括:管理職責產品質量實現質量保證要素變更管理GMP實施指南:質量管理體系系統持續改進質量風險管理質量管理系統文件術語/關鍵詞藥品質量標準研究5GC實驗室:GC實驗室總體描述取樣試劑及試液的管理標準品/對照品分析儀器的確認分析儀器的校準/維護GMP實施指南:質量控制實驗室分析方法的驗證和確認穩定性試驗超出標準及超趨勢的實驗結果調查原始數據的管理物料及產品的檢驗微生物檢驗藥品質量標準研究6GMP實施指南:原料藥前言質量管理人員廠房與設施設備文件與記錄物料管理生產和過程控制原料藥和中間體的包裝和貼簽儲存和分發實驗室控制驗證變更控制拒收和物料的再利用投訴與召回委托生產和委托檢驗代理/中間/貿易/分銷/分裝/再貼簽商采用發酵工藝生產原料藥的特殊要求用于臨床研究的原料藥無菌原料藥藥品質量標準研究7一、QC實驗室分析方法的驗證與確認分析方法方法驗證方法確認適用范圍方法驗證的一般原則需要驗證的檢驗項目方法驗證內容7.1準確度;7.2

精密度;7.3專屬性;7.4檢測限;7.5定量限;7.6/7線性與范圍;7.8耐用性方法確認方法再驗證文件管理藥品質量標準研究8分析方法驗證相關指南藥品質量標準研究91.分析方法分析方法

——詳細描述完成分析檢驗的每一步驟,一般包括:方法原理;儀器及其參數;試劑;供試品溶液與對照溶液的制備;計算公式及檢測限度

——可采用化學分析法和儀器分析法同一方法用于不同的檢驗項目時,驗證內容不同HPLC:鑒別:專屬性 有關物質檢查:專屬性,準確度,定量限等藥品質量標準研究10方法驗證 ——新方法的建立定義:

依據標準檢驗項目的要求,設定驗證的內容,

設計合理的試驗方案并完成操作的過程目的: 證明方法能夠滿足檢驗項目的要求作用:

方法建立的依據;制定質量標準的基礎方法確認 ——已驗證(如藥典)方法的應用/方法轉移目的:

證明在本實驗室條件下的適用性,部分驗證:

?鑒別(專屬性);含量測定(+重現性);雜質檢查(+靈/重)2.分析方法驗證與確認藥品質量標準研究11適用于化學藥品質量控制的理化分析法驗證

——物料,中間體與中間過程控制;產品質量檢驗清潔驗證方法的驗證不適用于化學藥品質量控制的微生物分析法(參見第17章)生物制品質量控制方法驗證3.適用范圍藥品質量標準研究12需驗證的方法鑒別;雜質檢查(限度或定量);含量測定(檢查性定量)驗證內容根據檢驗項目要求與分析方法特點確定無需驗證的檢驗項目與方法外觀,密度,酸值,pH,……氯化物,硫酸鹽,干燥失重,熾灼殘渣,……重量差異,崩解時限,裝量,裝量差異,……需特殊或非常規驗證的方法粒度分布;旋光度;熔點;硬度4.方法驗證的一般原則藥品質量標準研究135.需要驗證的檢驗項目鑒別定性方法——專屬性,耐用性檢查限度檢查——專屬性,檢測限,耐用性定量測定——微量分析:所有項目(檢測限)含量測定常量定量分析——除定量限與檢測限外所有項目藥品質量標準研究14表11-1《中國藥典》2010版中規定的檢驗項目與驗證內容驗證內容檢驗項目鑒別雜質測定含量/含量均勻度/溶出度測定限度定量準確度××√√精密度重復性××√√中間精密度××√(1)√(1)專屬性(2)√√√√檢測限×√√(3)×定量限××√×線性××√√范圍××√√耐用性√√√√

有重現性驗證，不需驗證中間精密度；一種方法專屬性不夠，可有其他方法予以補充；視具體情況予以驗證。藥品質量標準研究15表11-2EC,WHO,USP,ICH和ChP(2010)方法驗證內容對比驗證項目鑒別試驗雜質含量測定限度檢查定量測定EWUICEWUICEWUICEWUIC精密度RRRRRRRRR準確度TTTRRRRRRRRR專屬性RRRRRRRRRRRRRRRRRRR檢測限RRRRRRRTT定量限RRRR線性RRRRRRRRR范圍RRTRRRRRRRRR耐用性RRRRRRRRRRRRRRRR=需驗證內容；T=可視具體檢測而定的內容E=EC:分析方法驗證,指南,III,844/87,最終版,1989(歐共體)（1993,EU）W=WHO:分析方法驗證-用于原料藥的測定,1992U=USP:USP<1225>I=ICH:分析方法驗證Q2（R1）C=ChP:藥品質量標準分析方法驗證指導原則,ChP（2010）附錄XIXA5.需要驗證的檢驗項目藥品質量標準研究166.方法驗證內容方法驗證內容主要依據《中國藥典》(2010年版)附錄XIXA“藥品質量標準分析方法驗證指導原則”藥品質量標準研究176.方法驗證內容6-1準確度測定結果與真實值/參考值接近的程度用回收率(%)表示在規定范圍內驗證(限度±20%)驗證方法80%,100%(限度),120%×3;方法見下表(11-3)數據要求9次測量值的平均回收率%及RSD%或平均值的RE(回收率%-100%)及測量值的RSD%或可信限藥品質量標準研究18表11-3準確度驗證方法檢驗項目原料藥制劑備注主成分含量測定方法1：用已知純度的對照品或供試品進行測試方法2：用本法所得結果與已知準確度的另一方法測定結果比較方法1：用已知含量待測物的各組分混合物進行測試方法2：如不能得到制劑處方組分，向制劑中加入已知量待測物進行測定方法3：用本法所得結果與已知準確度方法的測定結果比較如方法已經測試并求出精密度、線性和專屬性，在準確度(無法直接驗證但)可推算的情況下，準確度可不必驗證雜質定量測定方法1：可在原料藥或制劑中加入已知量雜質進行測試方法2：如不能得到雜質或降解產物，可用本法測定結果與另一方法（如藥典方法或經驗證的方法）測定的結果比較如不能得到雜質或降解產物的響應因子或對原料藥的相對響應因子，可用原料藥的響應因子明確單個雜質和總量相當于主成分的重量比或面積比6.方法驗證內容藥品質量標準研究196.方法驗證內容6-2精密度多次測定同一均勻樣品的結果之間的接近程度用SD或RSD%表示在規定范圍內驗證(限度±20%)驗證方法同一實驗室:

重復性(連續);中間精密度(不連續);不同實驗室:

重現性(方法轉移);方法見下表(11-4)數據要求9次測量值的SD或RSD%或平均值的可信限藥品質量標準研究206.方法驗證內容藥品質量標準研究216.方法驗證內容藥品質量標準研究226.方法驗證內容6-3專屬性其它成分(如:有關物質,降解產物,制劑輔料)存在時,方法的響應信號不受干擾的特性如,手性異構體:手性色譜/非手性色譜+旋光度驗證方法方法見下表(11-5)應用所有項目:鑒別,檢查,含量測定均驗證專屬性藥品質量標準研究236.方法驗證內容雜質檢查已知并可獲得雜質(中間體)——樣品中加入雜質未知或不能獲得雜質(副產物,降解產物)與標準方法比較雜質數——粗品/結晶母液擬驗證方法峰分離——粗品/結晶母液;降解樣品藥品質量標準研究24含量測定已知并可獲得雜質雜質的分離——樣品加雜質后主峰與各雜質峰分離?主峰的純度——樣品加雜質前后的含量,DAD/MS未知或不能獲得雜質與標準方法比較含量——粗品/降解樣品(?滴定/色譜)驗證方法峰分離——粗品/降解樣品;峰參數/DAD,MS6.方法驗證內容藥品質量標準研究25驗證方法目視法——非儀器法:TLC法;顯色等化學法信噪比法——可直觀顯示噪音強度的儀器法:HPLC法標準偏差法——無法顯示噪音強度的儀器法:UV法6.方法驗證內容6-4檢測限(LOD)定義:

樣品中被分析物可檢出的最低量應用:雜質檢查項,根據具體情況確定是否驗證限度試驗——驗證定量測定——根據定量限(LOQ)與報告限確定驗證方法:方法見下表(11-6)藥品質量標準研究266.方法驗證內容標準偏差法ICHQ2R1:LOD=3.3s/f(s=響應值標準差;f=曲線斜率)響應值s的獲取:空白響應值的標準偏差樣品曲線截距標準偏差/剩余標準偏差數據要求:測試結果與圖譜藥品質量標準研究276.方法驗證內容6-5定量限(LOQ)定義:

樣品中被分析物可定量測定的最低量

——測定結果的準確度與精密度符合要求應用:雜質定量測定(有關物質檢查方法學研究)驗證方法:信噪比法——S/N≥10標準偏差法——LOQ=10s/f藥品質量標準研究286-6線性與范圍定義:線性:

項目要求的濃度范圍內,信號呈正比例程度范圍:

滿足準確度,精密度和線性要求的濃度區間應用:定量分析項目(雜質定量測定與主成份含量測定)驗證方法:5~6濃度×3？濃度x,信號強度y,最小二乘法含量(均勻度)測定——40%~200%(50%~150%)溶出度(釋放度)測定——下限-20%~上限+20%雜質測定——10%/LOQ~150%(20%/LOQ~120%)6.方法驗證內容藥品質量標準研究296.方法驗證內容藥品質量標準研究306.方法驗證內容6-8耐用性定義:

測定結果不受影響,條件允許變動范圍

——測定結果的準確度與精密度符合要求應用:所有項目(與專屬性一樣)結果體現:范圍窄——如HPLC柱溫25±2℃,標注為25℃范圍寬——如HPLC柱溫10~30℃,無需標注藥品質量標準研究316.方法驗證內容藥品質量標準研究326-8-1溶液穩定性示例對照溶液:

室溫,冰箱冷藏/進樣室溫度(2~8℃)供試溶液:室溫/進樣室溫度(2~8℃)方法:與新制對照溶液比較——對照溶液穩定性與初始測定結果比較——供試溶液穩定性6.方法驗證內容藥品質量標準研究33有機相±5%(~10%)柱溫±5℃(~10℃)pH±0.5(~1.0)填料同一型號,如:hypersil(無定形硅膠基質);SpherisorbODS1(球形硅膠基質,不封端)6.方法驗證內容6-8-2HPLC條件示例藥品質量標準研究347.實例分析下表為某制藥公司分析方法驗證的接受標準藥品質量標準研究357.實例分析表11-11分析方法驗證接受標準示例檢驗項目驗證內容接受標準鑒別專屬性HPLC/TLC:色譜峰/斑點分離IR/UV:與標準相同;類似物區分溶出度檢查精密度重復性RSD≤2.0%(n≥6)中間精密度同上專屬性色譜法:峰分離UV法:空白片≤3.0%線性r≥0.990(n≥6)截距≤5.0%(1)剩余標準差≤2.5%(2)范圍限度-20%~標示量120%準確度(回收率%)95%~105%(RSD≤2.5%)穩定性對照溶液/供試溶液≤2.0%截距的絕對值相當于標示量(100%溶出)的回歸值y的百分數剩余標準偏差值相當于標示量的回歸值y的百分數藥品質量標準研究367.實例分析表11-11分析方法驗證接受標準示例檢驗項目驗證內容接受標準含量測定(HPLC/UV)精密度重復性RSD≤2.0%(制劑)/1.0%(原料藥)(n≥6)中間精密度RSD≤2.0%(n≥4)專屬性(必要時峰純度)色譜法:峰分離UV法:空白片≤3.0%線性r≥0.998(n≥6)截距≤2.0%剩余標準差≤2.0%

(相當于r2≥0.999)范圍標示量80%~120%準確度(制劑回收率%)98%~102%(RSD≤2.0%;n=3×3)穩定性對照溶液/供試溶液≤2.0%耐用性方法通過系統適用性試驗藥品質量標準研究377.實例分析表11-11分析方法驗證接受標準示例檢驗項目驗證內容接受標準含量均勻度(HPLC/UV)精密度重復性RSD≤2.0%(n≥6)中間精密度RSD≤3.0%(n≥4)專屬性(必要時峰純度)色譜法:峰分離UV法:空白片≤3.0%線性r≥0.990(n≥6)截距≤5.0%剩余標準差≤2.0%

(相當于r2≥0.999)范圍標示量70%~130%準確度(制劑回收率%)98%~102%(RSD≤2.0%;n=3×3)穩定性對照溶液/供試溶液≤2.0%耐用性方法通過系統適用性試驗藥品質量標準研究387.實例分析表11-11分析方法驗證接受標準示例檢驗項目驗證內容接受標準雜質定量(HPLC)精密度重復性(n≥6)L＜0.1%;RSD≤30%0.1≤L＜0.2%;RSD≤20%0.2≤L＜0.5%;RSD≤10%0.5≤L＜5.0%;RSD≤5.0%L≥5.0%;RSD≤2.5%中間精密度L＜0.1%;RSD≤40%0.1≤L＜0.2%;RSD≤30%0.2≤L＜0.5%;RSD≤15%0.5≤L＜5.0%;RSD≤7.5%L≥5.0%;RSD≤4.0%專屬性(必要時峰純度)色譜峰基線分離藥品質量標準研究39表11-11分析方法驗證接受標準示例檢驗項目驗證內容接受標準雜質定量(HPLC)線性r≥0.990(制劑);r=0.998(原料藥)截距≤25%(3)剩余標準差≤10%(L＜0.5%)≤5.0%(0.5%≤L＜5.0%)≤2.5%(L≥5.0%)范圍雜質報告限/LOQ~質控限度+20%檢測限(LOD)RSD≤20%(S/N≥3,n≥5)定量限(LOQ)RSD≤10%(S/N≥10,n≥5)截距的絕對值相當于雜質限量(100%限度)的回歸值y的百分數7.實例分析藥品質量標準研究40表11-11分析方法驗證接受標準示例檢驗項目驗證內容接受標準雜質定量(HPLC)準確度(n≥3×3)平均回收率L＜0.5%;80%~120%0.5≤L＜5.0%;90%~110%L≥5.0%;95%~105%RSD%L＜0.5%;RSD≤10%0.5≤L＜5.0%;RSD≤5.0%L≥5.0%;RSD≤2.5%穩定性供試溶液L＜0.5%;RSD≤20%0.5≤L＜5.0%;RSD≤10%L≥5.0%;RSD≤5.0%沒有新的色譜峰出現對照溶液RE≤±5.0%;RSD≤5.0%7.實例分析藥品質量標準研究417.實例分析FDA質量控制實驗室檢查指南“15.方法驗證”中指出,許多含量測定和雜質檢查的方法采用HPLC法,對于這些方法的精密度的要求希望小于或等于系統適用性試驗的相對標準偏差USP<621>色譜法中系統適用性試驗RSD要求:——含量測定標準溶液或其他標準溶液連續進樣5次,除另有規定外,其峰面積測量值的相對相對標準偏差應不大于2.0%;若大于2.0%,可連續進洋6次,其峰面積測量值的相對相對標準偏差應不大于2.0%藥品質量標準研究428.方法確認與再驗證(p12)藥品質量標準研究438.方法確認與再驗證藥品質量標準研究449.文件管理藥品質量標準研究45【實例分析】

以下為某制藥公司分析方法驗證/確認的文件管理流程，僅供參考。藥品質量標準研究469.文件管理藥品質量標準研究479.文件管理藥品質量標準研究489.文件管理藥品質量標準研究499.文件管理FDA關于分析方法驗證內容設置不合理的警告信依據統計,FDA發給中國企業的警告信涉及分析方法驗證和清潔驗證;其中,最多的是分析方法驗證,尤以驗證內容設置不合理或缺少最為常見如:2000年FDA發給中國一企業的警告信: …… (2)用于穩定性檢測的分析方法不指示穩定性;另外,沒有確立XX的雜質譜 調查顯示你們公司用于檢測XX的USP滴定法不是一個穩定性指示的方法;另外,你們公司沒有確立這個API的雜質譜雜質譜——鑒定或定性分析界定(tR)及可檢測到雜質的范圍和每個鑒定雜質的分類(無機,有機,溶劑等)藥品質量標準研究5010.要點【要點備忘】在進行方法驗證或確認前,應已建立分析方法分析方法應經驗證或確認分析方法驗證或確認的方案與報告應長期保存分析方法在實際使用過程中,應與驗證或確認報告的內容一致藥品質量標準研究51二、原料藥質量控制前言質量管理人員廠房與設施設備文件與記錄物料管理生產和過程控制原料藥和中間體的包裝和貼簽儲存和分發實驗室控制驗證變更控制拒收和物料的再利用投訴與召回委托生產和委托檢驗代理/中間/貿易/分銷/分裝/再貼簽商采用發酵工藝生產原料藥的特殊要求用于臨床研究的原料藥無菌原料藥藥品質量標準研究52原料生產中GMP適用范圍藥品質量標準研究53原料藥合成的起始物料藥品質量標準研究54起始物料藥品質量標準研究55起始物料藥品質量標準研究56起始物料藥品質量標準研究57起始物料藥品質量標準研究58起始物料藥品質量標準研究59起始物料藥品質量標準研究60實驗室控制藥品質量標準研究61實驗室控制藥品質量標準研究621.質量標準【背景介紹】質量標準是質量評價的基礎,質量標準以工藝開發為基礎制定;企業可以制定高于注冊標準的內控標準,最低限度與注冊標準一致原料藥質量標準包括:常規的檢測項目:性狀,鑒別,檢查,含量測定專屬性檢測項目:物理常數,粒度,多晶型,手性原料藥試驗,水分,無機雜質,微生物限度雜質通常分為有機雜質,無機雜質和殘留溶劑藥品質量標準研究631.質量標準【實施指導】D.有機雜質的質量標準:原料藥質量標準中關于有機雜質的內容包括但不限于:特定的已鑒定雜質的鑒別與限量;未鑒定雜質的限量;任何不大于(小于或等于)鑒定閾值認可標準的非特定雜質的限量;雜質總和限量藥品質量標準研究641.質量標準【實施指導】E.殘留溶劑的限度:按照ICHQ3C中的定義,溶劑分為3類:第一類:可導致不被接受的毒性,避免使用;第二類:有一定毒性,限制使用;第三類:低毒溶劑;關于苯在原料藥中的殘留量工藝不產生苯——工藝使用溶劑的標準中限制苯工藝可能產生苯——原料藥標準增加限量控制藥品質量標準研究651.質量標準——【實例分析】藥品質量標準研究661.質量標準——【要點備忘】藥品質量標準研究672.分析方法驗證藥品質量標準研究682.分析方法驗證——【實施指導】藥品質量標準研究692.分析方法驗證——【實施指導】藥品質量標準研究702.分析方法驗證——【實施指導】藥品質量標準研究712.分析方法驗證——【實施指導】藥品質量標準研究722.分析方法驗證——【實施指導】藥品質量標準研究732.分析方法驗證——【實施指導】藥品質量標準研究742.分析方法驗證——【實例分析】藥品質量標準研究752.分析方法驗證——【要點備忘】藥品質量標準研究第二部分

藥品質量標準制定

研究工作——有關物質檢查

殘留溶劑檢查

含量測定藥品質量標準研究77

藥品標準的建立

基礎——藥物的系統藥學研究 目的——保證藥品生產過程質量可控 藥品臨床使用安全有效藥品標準獲得批準,即具有法律效力藥品標準制定的原則:

科學性;先進性;規范性;權威性一、藥品標準藥品質量標準研究78科學性：充分考慮生產,流通等環節影響藥品質量的因素設置科學的檢測項目

建立可靠的檢測方法

規定合理的判斷標準/限度先進性：充分反映現階段國內外藥品質量控制最新水平

1.藥品標準制定原則藥品質量標準研究79規范性：研究過程規范:照SFDA規范/指導原則要求進行文本規范:體例格式,術語,檢測方法等規范化權威性：國家藥品標準具有法律效力1.藥品標準制定原則藥品質量標準研究802.原料藥和制劑質量研究的特點制劑的質量研究:

根據原料藥的研究結果結合制劑處方工藝進行 更注重藥品的安全性,有效性,均一性和穩定性原料藥的質量研究:

在確證化學結構/組分的基礎上進行 注重理化特性,穩定性,雜質與純度控制藥品質量標準研究81ChP2010與藥品質量研究相關的指導原則藥品質量標準分析方法驗證原料藥與藥物制劑穩定性試驗藥品雜質分析藥物引濕性3.相關指導原則藥品質量標準研究82原料藥的結構確證——波譜分析藥物的命名——INN藥物的性狀——溶解度;引濕性;物理常數藥物的鑒別——化學;UV;IR;TLC;HPLC藥物的檢查——有關物質(HPLC)

殘留溶劑(GC)藥物的含量/效價測定——滴定;HPLC二、藥品質量研究藥品質量標準研究83(一)原料藥的結構確證樣品要求采用精制品純度應大于99.0%,雜質總量應小于0.5%結構確證方案一般項目:有機光譜分析法,結構特征手性藥物:立體選擇性方法,確證絕對構型晶型測定:粉末X-衍射,IR,熔點,熱分析,偏光顯微鏡法等,反映晶型特征結晶溶劑:熱分析,水分(干燥失重),或單晶X-衍射藥品質量標準研究84

特定雜質的研究特定雜質的研究規范特定雜質的結構確定有機雜質的檢查雜質的檢查方法雜質檢查方法的建立雜質的歸屬雜質的定量方法與限度確定(二)有機雜質的檢查藥品質量標準研究85

特定雜質的研究規范特定雜質的結構確認1.特定雜質的研究藥品質量標準研究86(1)特定雜質的研究規范

獲得有關物質的結構信息,分析其形成過程 合成時可設法避免該雜質的形成 或經純化使之降至可接受的水平 貯藏條件的控制特定雜質研究的意義藥品質量標準研究87

表觀含量在0.1%及以上(等于或高于鑒定限度)的雜質表觀含量在0.1%以下,具強烈生物作用或毒性的雜質需定性/確證結構的特定雜質(1)特定雜質的研究規范藥品質量標準研究88(2)特定雜質的結構確證①合成雜質的結構確認

當樣品中的雜質量小且制備困難時,可根據雜質的初步信息和藥物的結構特性與工藝路線合成可能的雜質 通過比較合成品與樣品中雜質的色譜性質(HPLC),紫外光譜特征(LC-DAD)和質譜信息(LC-MS),

判斷合成品與雜質是否是同一化合物

——確定合成品與藥物中雜質結構的一致性藥品質量標準研究89

鹽酸非索非那定中雜質結構確證色譜條件: 色譜柱:ODSC18柱(4.6mm×250mm,5μm)

流動相:0.01mol/L乙酸銨液-乙腈(40:60,pH6.0)質譜條件: 4.25kV電噴霧正離子化 掃描范圍(m/z)100~1000

鞘氣N2,流速7.5L/min;毛細管溫度150℃藥品質量標準研究90非索非那定和雜質2的二級質譜比較藥品質量標準研究91定向合成雜質2

合成雜質2的[M+H]+的碎片峰分析藥品質量標準研究92

當藥物中特定雜質的量較大時,可通過化學分離得到特定雜質,然后再通過元素分析,UV,IR,NMR和MS來確定該特定雜質的結構②分離雜質的結構確證藥品質量標準研究93

雜質1的歸一化分數1.1%

在穩定性試驗中:

隨溫度升高,雜質1相對含量由2%上升到9%

需要進行結構鑒定炎琥寧中有關物質HPLC-UV色譜圖A-溶劑;B-炎琥寧供試品溶液

炎琥寧中主要有關物質的結構確證炎琥寧中有關物質的檢查藥品質量標準研究94炎琥寧供試品中雜質1的制備收集含有雜質1的流份乙酸乙酯萃取乙酸乙酯萃取液40℃揮干溶劑雜質1炎琥寧供試品制備HPLC分離

炎琥寧中主要有關物質的結構確證藥品質量標準研究95雜質1的結構確證雜質1的離子碎片圖譜炎琥寧:脫水穿心蓮內酯琥珀酸半酯

精確分子量為m/z532.23100雜質1:精確分子量為m/z564.22216(31.99116/2=15.99558)

比炎琥寧多兩個氧原子,提示雜質1可能是其氧化產物[M+Na]587.2

炎琥寧中主要有關物質的結構確證LC-ESI/TOF-MS藥品質量標準研究96雜質1紫外吸收光譜最大吸收波長為264nm

相比炎琥寧最大吸收波長(251nm),明顯紅移 系雜質1的15C形成羧基,共軛體系增長所致炎琥寧中雜質1的結構確證紫外分光光度法藥品質量標準研究97雜質1的主要的吸收峰(cm-1):3444(νOH) 2927(νC-H) 2854(νC-H)1719(νC=O)

1614(νC=C)

1407(νC-O)1165(νC-O-C)

與炎琥寧相比,雜質1結構上的變化主要是內酯環開環并形成兩個羧基炎琥寧中雜質1的結構確證紅外分光光度法藥品質量標準研究9813C-NMR譜: 6個羰基碳信號(C15,C16,C1’,C4’,C1’’,C4’’)

與炎琥寧比多1個:C15被氧化形成的羧基信號 由原來的δ70.4移至δ166.41H-NMR譜:

活潑氫信號為4個 與炎琥寧比多出2個,內酯環開環生成2個羧基氫炎琥寧中雜質1的結構確證核磁共振分析法藥品質量標準研究99雜質1與炎琥寧母核一致的特征官能團:

6個烯碳(C8,C11,C12,C13,C14,C17) 2個CH3(C18,C20) 3組單質子烯氫信號(δ6.25,5.98,5.79)

說明雜質1的母核結構與炎琥寧一致,僅內酯環部分發生了改變

炎琥寧中主要有關物質的結構確證藥品質量標準研究100

炎琥寧中主要有關物質的結構確證藥品質量標準研究101雜質1的MS2裂解圖藥品質量標準研究1022.有機雜質的檢查雜質的檢查方法雜質檢查方法的建立與驗證雜質的歸屬雜質的定量方法與限度確定藥品質量標準研究103(1)雜質的檢查方法

各種分析方法均具有一定的局限性,應注意不同原理的分析方法間的相互驗證,如:

反相HPLC系統與正相HPLC系統

HPLC與TLCHPLC不同檢測波長/檢測器檢測結果的相互驗證

HPLC首選等度洗脫方式,亦可采用梯度洗脫方式單一方法不能滿足多個雜質的檢測時,可采用兩種或兩種以上的方法互為補充(不同條件HPLC;HPLC+TLC)藥品質量標準研究104(2)雜質檢查方法的建立與驗證用于雜質檢查的分析方法要求專屬,靈敏,耐用

專屬性:

主成分加合成原料,

中間體,已知特定雜質 合成粗品,重結晶母液 強制破壞樣品(熱,強酸,強堿,氧化,強光)

主成分70%~80%(避免降解產物的進一步分解)色譜柱/柱溫,流動相組成/流速:

主成分峰與相鄰雜質峰

雜質峰相互間的分離度

藥品質量標準研究105(2)雜質檢查方法的建立與驗證

精密度——重復性/中間精密度雜質對照——連續進樣6次,峰面積

RSD ≤5.0%/7.5%(L＜0.5%) ≤2.0%/5.0%(0.5%≤L＜5.0%) ≤2.0%(L≥5.0%)

樣品——連續測定6次,雜質含量

RSD ≤10%/15%(L＜0.5%) ≤5.0%/7.5%(0.5%≤L＜5.0%) ≤2.0%/5.0%(L≥5.0%)藥品質量標準研究106(2)雜質檢查方法的建立與驗證

準確度樣品中加入限度量雜質(80%,100%,120%×3)

測定9樣品回收率%:L＜0.5%: 80%~120%(RSD≤10%)0.5%≤L＜5%: 90%~110%(RSD≤5.0%)L≥5.0%: 95%~105%(RSD≤2.0%)藥品質量標準研究107(2)雜質檢查方法的建立與驗證

定量限(S/N≥10)與檢測限(S/N≥3)LOQ≤報告限; RSD≤10%(n=5~6)LOD

若LOQ遠離報告限(如1/10),無需驗證LOD

若LOQ~報告限,LOD≤1/5報告限度(無需計算RSD)藥品質量標準研究108(2)雜質檢查方法的建立與驗證

線性相關系數: r2≥0.996(r≥0.998)

截距: a/y(100%限度)≤20%

剩余標準偏差: s≤10%(限度＜0.5%) s≤5.0%(0.5%≤限度＜5%) s≤2.0%(限度≥5%)

范圍

20%(報告限:50%)~200%質控限度藥品質量標準研究109(2)雜質檢查方法的建立與驗證

耐用性(不得出現新的雜質峰,現有峰面積/含量差異)

溶液穩定性(2,4,8,12,24h;7,15,30d)峰面積變化對照溶液: RE/RSD≤5.0%

樣品溶液: RSD≤20%(L＜0.5%) RSD≤10%(0.5%≤L＜5%) RSD≤5.0%(L≥5.0%)

樣品:色譜柱(3~5)/柱溫(±5℃);

流動相組成(±5%)/pH(±0.5)/流速(±0.2)

含量變化要求同樣品溶液穩定性藥品質量標準研究110(3)雜質的歸屬

雜質來源歸屬

合成工藝引入雜質的歸屬強制破壞試驗/穩定性試驗新增雜質的歸屬多種分析方法(HPLC/TLC/CE),檢測手段(不同檢測器/多波長),特別是HPLC-MS聯用技術

HPLC-MS聯用技術:

雜質的分子離子峰與主藥碎片離子峰的比較雜質裂解規律與主藥碎片離子二級MS比較藥品質量標準研究111

定量分析方法

已知的毒性/強生物活性雜質——雜質對照品法使用系統適用性溶液/混合雜質對照品溶液 或對照圖譜/相對保留時間——標明雜質位置

——雜質對照法(已知雜質)與不加校正因子的主成分自身對照法(未知雜質) ——加(已知雜質)/不加(未知雜質)校正因子的主成分自身對照法(4)雜質的定量方法與限度確定藥品質量標準研究112

限度確定原則:合理性創新藥:

根據每日劑量制訂質控限度包括:每一個已知雜質,未知雜質及總雜質仿制藥:

與已上市的原研產品進行質量對比研究若雜質譜相同:不低于原標準若雜質譜不同:照創新藥要求(4)雜質的定量方法與限度確定藥品質量標準研究113

創新藥 已知雜質限度確定——用藥安全有效,質量可控雜質特性:毒性,生物活性藥品自身的穩定性生產的可行性及批間的正常波動 未知雜質限度確定——見下表(4)雜質的定量方法與限度確定藥品質量標準研究114原料藥與制劑的雜質限度(日劑量25mg為例)藥物最大日劑量報告限度a鑒定限度b質控限度c原料藥(25mg)≤2g＞2g0.05%0.03%0.10%或1.0mg0.05%0.15%或1.0mg0.05%制劑(25mg)≤1g＞1g＜1mg1~10mg＞10mg-2g＞2g＜10mg10mg-100mg＞100mg-2g＞2g0.1%0.05%1.0%或5μg0.5%或20μg0.2%或2mg0.10%1.0%或50μg0.5%或200μg0.2%或3mg0.15%報告限度(reportingthreshold):超出限度的雜質應在檢測報告中報告,并提供檢測數據(≥LLOQ)鑒定限度(identificationthreshold):超出限度的雜質應進行定性分析,并確定化學結構質控限度(qualificationthreshold):質量標準中允許的雜質限度(制定標準)如制訂的限度高于此限度,應有充分的依據藥品質量標準研究115

溶劑的分類與殘留溶劑的確定有機溶劑的分類殘留溶劑的確定需要關注的問題溶劑殘留量檢查方法的建立與驗證檢查方法的建立(色譜柱;進樣方式)檢查方法的驗證(驗證內容與要求)(三)殘留溶劑檢查藥品質量標準研究116

第一類:應該避免使用第二類:應該限制使用第三類:GMP或其他質控要求限制使用第四類:尚無足夠毒理學資料(1)有機溶劑的分類1.溶劑的分類與殘留溶劑的確定藥品質量標準研究117(1)有機溶劑的分類第一類溶劑

——人體致癌物,疑為人體致癌物或環境危害物的有機溶劑

——具有不可接受的毒性或對環境造成公害,在原料藥、輔料以及制劑生產中應該避免使用如不可替代

——無論在工藝哪一步使用,均需將殘留量檢查訂入標準,限度符合規定藥品質量標準研究118(1)有機溶劑的分類第一類溶劑

限度 苯 0.0002%(2ppm) 1,1-二氯乙烯 0.0008%(8ppm) 1,2-二氯乙烷 0.0005%(5ppm) 1,1,1-三氯乙烷 0.15%四氯化碳 0.0004%(4ppm)藥品質量標準研究119(1)有機溶劑的分類

第二類溶劑

——有非遺傳毒性致癌(動物實驗),或可能導致其他不可逆毒性(如神經毒性或致畸),或可能具有其他嚴重但可逆毒性的有機溶劑

——具有一定的毒性,但和第一類相比毒性較小,限制使用,防止對病人潛在不良影響藥品質量標準研究120(1)有機溶劑的分類第二類溶劑 乙腈,氯苯,三氯甲烷,環己烷,二氯甲烷,二氧六環,乙二醇,甲酰胺,正己烷,甲醇,吡啶,四氫呋喃,甲苯等26種限度:

0.005%(硝基甲烷)0.3%(甲醇)藥品質量標準研究121(1)有機溶劑的分類如工藝中使用第二類溶劑,需進行殘留量的研究,并根據研究結果,訂入臨床用質量標準根據中試和規模產品的殘留情況訂入注冊標準若檢測結果提示已無殘留,可不訂入標準若檢測結果提示仍有殘留,需訂入標準藥品質量標準研究122(1)有機溶劑的分類第三類溶劑

——GMP或其他質量要求限制使用

——屬于低毒性溶劑,對人體或環境的危害較小,人體可接受的限度為0.5% ——可僅對終產品精制工藝使用的第三類溶劑進行研究藥品質量標準研究123(1)有機溶劑的分類第三類溶劑

乙酸丁酯,丙酮,正丁醇,乙醇,乙醚,甲酸,異丙醇等28種限度:

0.5%藥品質量標準研究124(1)有機溶劑的分類第四類溶劑

——在藥物的生產過程中可能會使用到,但目前尚無足夠的毒理學資料的溶劑

——可根據生產工藝和溶劑的特點,必要時進行殘留量的研究

——石油醚,異辛烷,異丙醚,三氯醋酸,三氟醋酸等10種藥品質量標準研究125藥物制備過程中使用的所有有機溶劑,均應進行殘留量的研究殘留溶劑與制備工藝合成路線中使用有機溶劑的步驟后續步驟中使用的溶劑對之前溶劑的影響中間體的純化方法,干燥條件粗品精制方法和條件等(2)殘留溶劑的確定藥品質量標準研究126①多種有機溶劑的綜合影響目前對有機溶劑殘留量的控制控制單一溶劑的殘留量不超過各自規定的限度尚未控制總量——多種有機溶劑的綜合影響②中間體的有機溶劑殘留量控制中間體的第一、二類溶劑殘留量尤其適用于合成路線較長的產品(3)需要關注的問題藥品質量標準研究127常用的檢測方法

GC;HPLC;LC-MS;GC-MS干燥失重法——低沸點,第三類或四類溶劑2.殘留溶劑檢查方法的建立與驗證藥品質量標準研究1282.殘留溶劑檢查方法的建立與驗證GC檢查方法的建立與驗證測定方法的選擇進樣方式溶液制備方法色譜柱的選擇頂空條件的選擇系統適用性試驗方法驗證的內容與要求藥品質量標準研究129

第一法:毛細管柱頂空進樣等溫法適用于所需要檢查的有機溶劑數量不多,并且極性差異較小的情況第二法:毛細管柱頂空進樣程序升溫法適用于所需要檢查的有機溶劑數量較多,并且極性差異較大的情況第三法:溶液直接進樣法采用填充柱,亦可采用適宜極性的毛細管柱(1)測定方法的選擇藥品質量標準研究130

低沸點溶劑盡量同時檢測——首選頂空法高沸點溶劑單獨檢測, 低于DMF——頂空 高于DMF——甲醇直接進樣藥物高溫分解干擾檢測——頂空二氯甲烷,三氯甲烷——DMF頂空-ECD檢測若只有二氯甲烷——與其他溶劑同時FID檢測①進樣方式選擇藥品質量標準研究131采用溶液直接進樣法用水或合適的溶劑使固體原料藥溶解采用頂空進樣法通常以水作溶劑不溶于水不揮發酸或堿液(不用鹽酸溶液或氨水)N,N-二甲基甲酰胺或二甲基亞砜為溶劑②溶液制備方法藥品質量標準研究132色譜柱類型固定液/固定相毛細管柱非極性100％的二甲基聚硅氧烷極性聚乙二醇（PEG-20M）中極性(35%)二苯基-(65%)甲基聚氧硅烷(50%)二苯基-(50%)二甲基聚氧硅烷(35%)二苯基-(65%)二甲基亞芳基聚氧硅烷(14%)氰丙基苯基-(86%)二甲基聚氧硅烷(6%)氰丙基苯基-(94%)二甲基聚氧硅烷弱極性(5%)苯基-(95%)甲基聚氧硅烷(5%)二苯基-(95%)二甲基亞芳基硅氧烷共聚物填充柱乙二烯苯-乙基乙烯苯型高分子多孔小球或其他填料③色譜柱的選擇藥品質量標準研究133時間:

通常平衡30~45min溫度:

通常80~90℃

沸點較高的殘留溶劑

——通常選擇較高的頂空平衡溫度

——應兼顧試品的熱分解特性④頂空條件的選擇藥品質量標準研究134

用待測物的色譜峰計算

毛細管色譜柱N≥5000;填充柱的N≥1000

待測色譜峰與其相鄰色譜峰的分離度R≥1.5

對照品溶液連續進樣5次

內標法:

待測物與內標物峰面積比的RSD≤5%

外標法:

待測物峰面積的RSD≤10%(2)系統適用性試驗要求①柱效②分離度③重復性藥品質量標準研究135同“雜質檢查”的分析方法驗證要求

專屬性:

藥物;溶媒(DMF);待檢溶劑 混合物擬定色譜條件下:

待檢溶劑峰與溶媒及藥物峰

待檢溶劑峰相互間的分離度

(3)方法驗證的內容與要求藥品質量標準研究136

精密度——重復性雜質對照:連續進樣5~6次,RSD≤5.0%~10%

樣品: 測定6次,含量RSD≤10%~20%

精密度——中間精密度樣品: 測定6次(天),含量RSD≤10%~20%(3)方法驗證的內容與要求藥品質量標準研究137

準確度樣品中加入限度量溶劑(80%,100%,120%×3) 9樣品回收率%: 90%~110%(80%~120%)超出范圍,改用標準加入法(消除基質效應)

定量限(S/N≥10)與檢測限(S/N≥3)LOQ≤50%限度(RSD≤20%,n=5~6)LOD≤10%限度(若LOQ≤10%限度,可不測)(3)方法驗證的內容與要求藥品質量標準研究138

線性相關系數: r2≥0.996(r≥0.998)

截距: a/y(100%限度)≤25%

剩余標準偏差: s≤10%

范圍

50%(20%)~150%(200%)質控限度(3)方法驗證的內容與要求藥品質量標準研究139

耐用性(不得出現新的雜質峰,現有峰面積/含量差異)

溶液穩定性(0,1,2,4,8,12/24h)峰面積變化