ICS65.020.01CCSA017T/NAIA團(tuán) 體 標(biāo) 準(zhǔn)T/NAIA0293—20245液相色譜法2024-05-31發(fā)布 2024-06-10實(shí)施寧夏化學(xué)分析測(cè)試協(xié)會(huì) 發(fā)布T/NAIA0293-2024T/NAIA0293-2024II前 言本文件按照GB/T1.1-2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。本文件由寧夏化學(xué)分析測(cè)試協(xié)會(huì)提出并歸口。本文件起草單位：寧夏回族自治區(qū)食品檢測(cè)研究院（國(guó)家市場(chǎng)監(jiān)管重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室（枸杞和葡萄酒質(zhì)量安全））、寧夏回族自治區(qū)標(biāo)準(zhǔn)化研究院、寧夏化學(xué)分析測(cè)試協(xié)會(huì)、寧夏農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)與檢測(cè)技術(shù)研究所。本文件主要起草人：李瑞雪、王澤嵐、朱捷、龔慧、路敏、王琛、王紫昕、劉繼輝、陳盼盼、吳明、呂毅、馬桂娟、葛謙、張小飛。本文件為首次發(fā)布。T/NAIA0293-2024T/NAIA0293-2024PAGEPAGE1枸杞中5種黃酮類化合物的測(cè)定液相色譜法范圍本文件規(guī)定了枸杞中5種黃酮類化合物含量的液相色譜法。（鮮果量的測(cè)定和確證。規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過(guò)文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用本文件；不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改單)適用于本文件。GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法。術(shù)語(yǔ)和定義本文件沒(méi)有需要界定的術(shù)語(yǔ)和定義。原理測(cè)定，以保留時(shí)間定性，外標(biāo)法定量。試劑和材料除另有說(shuō)明，所用試劑均為分析純，水為符合GB/T6682規(guī)定的一級(jí)水。試劑乙腈(CH3CN)：色譜純。甲醇(CH3OH)：色譜純。試劑配制70%700mL甲醇（5.1.2）1000mL容量瓶中，用水定容。標(biāo)準(zhǔn)品楊梅素（CAS號(hào)：529-44-2）：純度≥95%準(zhǔn)品。二氫楊梅素（CAS號(hào)：27200-12-0）：純度≥95%書的標(biāo)準(zhǔn)品。木犀草素（CAS號(hào)：491-70-3）：純度≥95%標(biāo)準(zhǔn)品。蕓香柚皮素（CAS號(hào)：14259-46-2）：純度≥95%書的標(biāo)準(zhǔn)品。柚皮素（CAS號(hào)：480-41-1）：純度≥95%準(zhǔn)品。標(biāo)準(zhǔn)溶液制備標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液（10mg/mL）：準(zhǔn)確稱取適量的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)（5.3），分別用甲醇10mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液。標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液在-18℃及以下避光保存。混合標(biāo)準(zhǔn)中間液（1mg/mL）:吸取上述標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液（5.4.1）1mL10mL1mg/mL混合標(biāo)準(zhǔn)中間液。標(biāo)準(zhǔn)系列工作液：移取適量混合標(biāo)準(zhǔn)中間液（5.4.2），70%甲醇溶液（5.2.1）稀1.0μg/mL、5.0μg/mL、10.0μg/mL、20.0μg/mL、50.0μg/mL、100.0μg/mL的混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。臨用現(xiàn)配。儀器和設(shè)備液相色譜儀：帶紫外檢測(cè)器或二極管陣列檢測(cè)器。6.2 0.00001g0.001g。高速冷凍離心機(jī)：15000r/min。渦旋混合器。超聲波振蕩器。10000r/min。微孔濾膜：0.45μm，有機(jī)相。分析步驟試樣制備枸杞（鮮果樣品用組織搗碎機(jī)制成勻漿（200g30瓶中，-18℃冷凍備用。試樣的提取5g（0.01g）50mL塑料離心管中，加入20mL70%甲醇溶液（5.2.1），渦旋混勻1min,超聲提取20min25mL容量瓶中,用70%甲醇溶液（5.2.1）定容至刻度并充分混勻后，轉(zhuǎn)入離心管,15000r/min5min0.45μm濾膜，濾液待上機(jī)測(cè)定。液相色譜參考條件a)色譜柱：C8色譜柱（250mm×4.6mm，5μm）,或同等性能色譜柱；b)柱溫：35℃；檢測(cè)波長(zhǎng)：290nm（蕓香柚皮素、柚皮素、二氫楊梅素），260nm（楊梅素、木犀草素）；進(jìn)樣量：10μL；流速：1.0mL/min；AB：乙腈（5.1.1）1。表1流動(dòng)相梯度洗脫條件時(shí)間/min流動(dòng)相A/%流動(dòng)相B/%0.00901010.0901020.0802030.0703040.0208044.0208044.1901048.09010測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)曲線測(cè)定5A。試樣溶液的測(cè)定物質(zhì)的濃度。分析結(jié)果的表述試樣中黃酮類化合物的含量按式（1）計(jì)算。XCV1000

……（1）m1000式中：X—試樣中黃酮類化合物的含量，單位為毫克每千克（mg/kg）；C—由標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算得到的待測(cè)液中黃酮類化合物濃度，單位為微克每毫升（μg/mL)；V—樣品測(cè)定液總體積，單位為毫升（mL）；m—試樣的質(zhì)量，單位為克（g）；1000—換算系數(shù)。計(jì)算結(jié)果保留2位有效數(shù)字。精密度在重復(fù)性測(cè)定條件下獲得的兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的絕對(duì)差值不超過(guò)其算術(shù)平均值的10%。其他本方法中，當(dāng)樣品取樣量為2g,定容體積為50mL時(shí),二氫楊梅素、柚皮素、木犀草素、楊梅素的檢出限均為1.5mg/kg,定量限均為5.0mg/kg,柚皮素的檢出限為0.6mg/kg,定量限