飼料中泰拉霉素的測定液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法2024-03-15發(fā)布2024-10-01實(shí)施國家市場監(jiān)督管理總局國家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會(huì)I本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。請(qǐng)注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識(shí)別專利的責(zé)任。本文件由全國飼料工業(yè)標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)(SAC/TC76)提出并歸口。本文件起草單位：浙江正明檢測有限公司、寧波市農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量檢測中心。1飼料中泰拉霉素的測定液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法本文件描述了飼料中泰拉霉素的液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測定方法。本文件適用于配合飼料、濃縮飼料、精料補(bǔ)充料和添加劑預(yù)混合飼料中泰拉霉素的測定。本文件的檢出限為10.0μg/kg,定量限為20.0μg/kg。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改單)適用于本文件。GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法GB/T20195動(dòng)物飼料試樣的制備3術(shù)語和定義本文件沒有需要界定的術(shù)語和定義。試樣中的泰拉霉素(泰拉霉素A和泰拉霉素B)用甲酸甲醇溶液提取，經(jīng)固相萃取柱凈化后，用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀測定，泰拉霉素A和泰拉霉素B響應(yīng)一致。以泰拉霉素A為標(biāo)準(zhǔn)品，基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)5試劑或材料除非另有規(guī)定，僅使用分析純?cè)噭?.5甲酸甲醇溶液(0.25%,體積分?jǐn)?shù)):移取2.5mL甲酸(5.2),用甲醇(5.3)稀釋至1000mL,混勻。5.6甲酸溶液(0.1%,體積分?jǐn)?shù)):移取1mL甲酸(5.2),用水稀釋至1000mL,混勻。5.7甲醇-甲酸溶液：移取90mL0.1%甲酸溶液(5.6)和10mL甲醇(5.3),混勻。5.8標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液(1mg/mL):稱取泰拉霉素A(CAS:217500-96-4,純度不低于97.0%)10mg(精確至0.01mg)于10mL容量瓶中，用甲醇(5.3)溶解并定容，混勻。-18℃以下保存，有效期6個(gè)月。5.9標(biāo)準(zhǔn)中間溶液(10μg/mL):準(zhǔn)確移取1mL標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液(5.8)于100mL容量瓶中，用甲醇(5.3)2稀釋定容，混勻。-18℃以下保存，有效期2個(gè)月。5.10標(biāo)準(zhǔn)系列溶液：準(zhǔn)確移取適量標(biāo)準(zhǔn)中間溶液(5.9)于容量瓶中，分別用甲醇-甲酸溶液(5.7)稀釋定容，混勻，配制成質(zhì)量濃度分別為0.5ng/mL、1ng/mL、2.5ng/mL、10ng/mL、25ng/mL和50ng/mL的標(biāo)準(zhǔn)系列溶液。臨用現(xiàn)配。5.11增強(qiáng)型脂肪去除固相萃取柱：300mg/3mL,或相當(dāng)者。6儀器設(shè)備6.1液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀：配電噴霧離子源。6.2分析天平：精度為0.01mg和0.01g。6.3離心機(jī)：轉(zhuǎn)速不低于9000r/min。6.4振蕩器：轉(zhuǎn)速不低于300r/min。6.5渦旋混合儀。6.6固相萃取裝置。6.7氮吹儀。7樣品按GB/T20195制備樣品，至少200g,粉碎使其全部通過0.425mm孔徑的試驗(yàn)篩，充分混勻，裝入磨口瓶中，備用。選取類型相同、均勻一致，且在待測物保留時(shí)間處，儀器響應(yīng)值小于方法定量限30%的飼料樣品，作為空白樣品。8試驗(yàn)步驟平行做2份試驗(yàn)。稱取試樣2.5g(精確至0.01g)于50mL離心管中，準(zhǔn)確加入20mL甲酸甲醇溶液(5.5),300r/min振蕩提取15min,9000r/min離心3min,移取上清液于另一離心管中。重復(fù)提取準(zhǔn)確移取2mL備用液(8.1)過固相萃取柱(5.11),用1mL甲醇(5.3)洗脫，收集過柱液和洗脫液于50℃氮?dú)獯蹈?，?zhǔn)確加入2mL甲醇-甲酸溶液(5.7)溶解殘?jiān)?，渦旋混勻，微孔濾膜(5.12)8.3基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)系列溶液的制備稱取空白試樣，按照8.1和8.2操作至“50℃氮?dú)獯蹈伞焙?，分別準(zhǔn)確移取2mL標(biāo)準(zhǔn)系列溶液(5.10)溶解殘?jiān)?，配制成質(zhì)量濃度分別為0.5ng/mL、1ng/mL、2.5ng/mL、10ng/mL、25ng/mL和50ng/mL的基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)系列溶液。臨用現(xiàn)配。8.4.1液相色譜參考條件液相色譜參考條件如下：3a)色譜柱：Cg柱，柱長50mm,內(nèi)徑2.1mm,粒度1.7μm,或性能相當(dāng)者；e)流動(dòng)相：A相為甲酸溶液(5.6),B相為甲醇(5.3),梯度洗脫程序見表1。表1梯度洗脫程序時(shí)間minA相%B相%質(zhì)譜參考條件如下：a)電離方式：電噴霧電離，正離子模式(ESI+);b)檢測方式：多反應(yīng)監(jiān)測(MRM);f)脫溶劑氣：氮?dú)?000L/h。多反應(yīng)監(jiān)測(MRM)離子對(duì)、錐孔電壓及碰撞能量見表2。表2待測物的多反應(yīng)監(jiān)測(MRM)離子對(duì)、錐孔電壓及碰撞能量參考值待測物名稱監(jiān)測離子對(duì)m/x錐孔電壓V碰撞能量泰拉霉素A806.8>158.22806.8>577.62“為定量離子對(duì)。8.4.3基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)系列溶液和試樣溶液測定在儀器的最佳條件下，分別取基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)系列溶液(8.3)和試樣溶液(8.2)上機(jī)測定。基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)溶液的定量離子對(duì)色譜圖見附錄A。4在相同試驗(yàn)條件下，試樣溶液與基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)系列溶液中泰拉霉素A的保留時(shí)間一致，其相對(duì)偏差在±2.5%之內(nèi)。根據(jù)表2選擇的定性離子對(duì)，比較試樣譜圖中泰拉霉素A定性離子對(duì)的相對(duì)離子豐度與質(zhì)量濃度接近的基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)溶液中對(duì)應(yīng)的定性離子對(duì)的相對(duì)離子豐度，若偏差不超過表3規(guī)定表3定性測定時(shí)相對(duì)離子豐度的最大允許偏差%相對(duì)離子豐度最大允許偏差士50以基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)溶液中泰拉霉素A質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)、定量離子對(duì)色譜峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，其相關(guān)系數(shù)應(yīng)不低于0.99。試樣溶液中泰拉霉素與基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)溶液中泰拉霉素A的響應(yīng)值均應(yīng)在儀器檢測的線性范圍內(nèi)，如超出線性范圍，應(yīng)重新測定。單點(diǎn)校準(zhǔn)定量時(shí)，試樣溶液中泰拉霉素質(zhì)量濃度與基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)溶液質(zhì)量濃度相差不超過30%。9試驗(yàn)數(shù)據(jù)處理試樣中泰拉霉素的含量以質(zhì)量分?jǐn)?shù)w計(jì)，數(shù)值以微克每千克(μg/kg)表示。多點(diǎn)校準(zhǔn)按公式(1)計(jì)式中：p——由基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)曲線得到的試樣溶液中泰拉霉素A的質(zhì)量濃度，單位為納克每毫升V?——提取后提取液總體積，單位為毫升(mL);V?——試樣的最終定容體積，單位為毫升(mL);V?——凈化用試樣提取液體積，單位為毫升(mL);1000——換算系數(shù)。式中：…A——試樣溶液中泰拉霉素的峰面積；A。——基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)溶液中泰拉霉素A的峰面積；p?！|(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)溶液中泰拉霉素A的質(zhì)量濃度，單位為納克每毫升(ng/mL);V?——提取后提取液總體積，單位為毫升(mL);V?——試樣的最終定容體積，單位為毫升(mL);V?——凈化用試樣提取液體積，單位為毫升(mL);5m——試樣質(zhì)量，單位為克(g);1000——換算系數(shù)。測定結(jié)果以平行測定的算術(shù)平