1土壤總磷的測定堿熔-鉬銻抗分光光度法1適用范圍本標準規定了測定土壤中總磷的堿熔-鉬銻抗分光光度法。本標準適用于土壤中總磷的測定。當試樣量為0.2500g,采用30mm比色皿時，本方法的檢出限為10.0mg/kg,測定下限為40.0mg/kg。2規范性引用文件本標準內容引用了下列文件或其中的條款。凡是不注明日期的引用文件，其有效版本適用于本標HJ613土壤干物質和水分的測定重量法HJ/T166土壤環境監測技術規范3方法原理經氫氧化鈉熔融，土壤樣品中的含磷礦物及有機磷化合物全部轉化為可溶性的正磷酸鹽，在酸性條件下與鉬銻抗顯色劑反應生成磷鉬藍，在波長700nm處測量吸光度。在一定濃度范圍內，樣品中的總磷含量與吸光度值符合朗伯-比爾定律。4試劑和材料除非另有說明，分析時均使用符合國家標準的分析純化學試劑。實驗用水為新制備的去離子水或蒸餾水，電導率(25℃)≤5.0μS/cm。4.2氫氧化鈉：顆粒狀，優級純。4.3無水乙醇：p(CH?CH?OH)=0.789g/ml。4.5磷酸二氫鉀：優級純取適量磷酸二氫鉀(KH?PO?)于稱量瓶中，在110℃下烘干2h,置于干燥器中放冷，備用。于800ml水中，在不斷攪拌下緩慢加入168ml濃硫酸(4.1),待溶液冷卻后加水至1000ml,混4.7硫酸溶液：c(H?SO?)=0.5mol/L于800ml水中，在不斷攪拌下緩慢加入28ml濃硫酸(4.1),待溶液冷卻后加水至1000ml,混勻。4.8硫酸溶液：1+1用濃硫酸(4.1)配制。24.9氫氧化鈉溶液：c(NaOH)=2mol/L稱取20.0g氫氧化鈉(4.2),溶解于200ml水中，待溶液冷卻后加水至250ml,混勻。稱取10.0g抗壞血酸溶于適量水中，溶解后加水至100ml,混勻。該溶液貯存在棕色玻璃瓶中，在約4℃可穩定兩周。如顏色變黃，則棄去重配。稱取13.0g鉬酸銨溶于適量水中，溶解后加水至100ml,混勻。4.12酒石酸銻氧鉀溶液：p[K(SbO)C?H?O?·1/2H?O]=0.0035g/ml稱取0.35g酒石酸銻氧鉀溶于適量水中，溶解后加水至100ml,混勻。4.13鉬酸鹽溶液在不斷攪拌下，將100ml鉬酸銨溶液(4.11)緩慢加入至已冷卻的300ml硫酸溶液(4.8)中，再加入100ml酒石酸銻氧鉀溶液(4.12),混勻。該溶液貯存在棕色玻璃瓶中，在4℃下可以穩定兩個月。4.14磷標準貯備溶液(以P計):p=50.0mg/L稱取0.2197g磷酸二氫鉀(4.5)溶于適量水中，溶解后移入1000ml容量瓶，再加入5ml硫酸溶液(4.8),加水至標線，混勻。該溶液貯存在棕色玻璃瓶中，在4℃下可穩定六個月。4.15磷標準工作溶液(以P計):p=5.00mg/L量取25.00ml磷標準貯備溶液(4.14)于250ml容量瓶中，加水至標線，混勻。該溶液臨用時現配。4.162,4-二硝基酚(或2,6-二硝基酚)指示劑：p=0.002g/ml稱取0.2g2,4二硝基酚(或2,6-二硝基酚)溶于適量水中，溶解后加水至100ml,混勻。5儀器和設備5.1分光光度計：配有30mm比色皿。5.2馬弗爐。5.3離心機：2500～3500r/min,配有50ml離心杯。5.4鎳坩堝：容量大于30ml。5.5天平：精度為0.0001g。5.6樣品粉碎設備：土壤粉碎機(或球磨機)。5.7土壤篩：孔徑為1mm、0.149mm(100目)。5.8具塞比色管：50ml。5.9一般實驗室常用儀器和設備。6樣品6.1樣品的采集與保存參照HJ/T166的相關規定進行土壤樣品的采集和保存。6.2試樣的制備將采集好的樣品置于風干盤中，攤成2～3cm的薄層，適時地壓碎、翻動，揀出碎石、沙礫、植物殘體。用木棒研壓，然后去雜物，粉碎，充分混勻，通過1mm土壤篩，然后將土樣在牛皮紙上鋪成薄3層，劃分成四分法小方格。用小勺在每個方格中取出等量土樣(總量大于20g),在土壤粉碎機(或球磨機)中進行研磨，使其全部通過0.149mm(100目)土壤篩，混勻后裝入磨口瓶中，備用。7.1試料的制備稱取0.2500g試樣(6.2)于鎳坩堝底部，用幾滴無水乙醇(4.3)濕潤樣品；然后加入2g氫氧化鈉(4.2)平鋪于樣品的表面，將樣品覆蓋，蓋上坩堝蓋；將坩堝放入馬弗爐中升溫，當溫度升至400℃左右時，保持15min;然后繼續升溫至640℃,保持15min,取出冷卻。再向坩堝中加入10ml水加熱至80℃,待熔塊溶解后，將坩堝內的溶液全部轉入50ml離心杯中，再用10ml硫酸溶液(4.6)分三3500r/min離心分離10min管中加入2～3滴指示劑(4.16),再用硫酸溶液(4.7)和氫氧化鈉溶液(4.9)調節pH值為4.4左右，使溶液剛呈微黃色，再加入1.0ml抗壞血酸溶液(4.10),混勻。30s后加入2.0ml鉬酸鹽溶液(4.13),充分混勻，于20～30℃下放置15min。用30mm比色皿，于700nm波長處，以水為參比，測量吸光7.3測定量取10.0ml(或根據樣品濃度確定量取體積)試料(7.1)于50ml具塞比色管中，加水至刻度。然后按照與繪制校準曲線(7.2)相同操作步驟進行顯色和測量。不加入土壤試樣，按照與試料的制備(7.1)和測定(7.3)相同操作步驟，進行顯色和測量。8結果計算與表示土壤中總磷的含量w(mg/kg),按照式(1)進行計算。4A——空白試驗的吸光度值；a——校準曲線的截距；V?——試樣定容體積，ml;b——校準曲線的斜率；Wm——土壤的干物質含量(質量分數),%。8.2結果表示測量結果保留三位有效數字。9精密度和準確度9.1精密度5家實驗室分別對28mg/kg、400mg/kg、800mg/kg的樣品進行了測定：實驗室內相對標準偏差分%;實驗室間相對標準偏差分別為：8.6%、3.5%、1.4%;重復性限分別為：7.42mg/kg、23.6mg/kg、21.4mg/kg;再現性限分別為：12.6mg/kg、45.4mg/kg、準確度5家實驗室分別對(410±73)mg/kg、(323±69)mg/kg、(492±50)mg/kg了分析測定：相對誤差分別為：8.3%～16.6%、3.1%～10.5%、0.6%～5.5的有證土壤標準樣品進行%,相對誤差最終值分別為：5家實驗室分別對實際樣品進行了加標分析測定，加標量為100μg時，加標回收率分別為：91.2%~103.0%、91.1%～97.3%、90.6%～96.0%,加標回收率最終值分別為：95.1%±9.2%、93.8%±5.6%、10質量保證和質量控制10.1每批樣品應做空白試驗，其測定結果應低于方法檢出限。10.2每批樣品應至少測定10%的平行雙樣，樣品數量少于10個時，應至少測定一個平行雙樣。兩個測定結果的相對偏差應不超過15%。10.3每批樣品應帶一個中間校核