細胞骨架染色_第1頁
細胞骨架染色_第2頁
細胞骨架染色_第3頁
細胞骨架染色_第4頁
細胞骨架染色_第5頁
已閱讀5頁，還剩6頁未讀， 繼續免費閱讀

付費下載

下載本文檔

版權說明：本文檔由用戶提供并上傳，收益歸屬內容提供方，若內容存在侵權，請進行舉報或認領

文檔簡介

一.考馬斯亮藍R250染色法觀察微絲掌握觀察動物細胞內微絲方法:考馬斯亮藍R250染色法

試驗目標細胞骨架染色第1頁真核細胞胞質中有錯綜復雜纖維網,稱為細胞骨架。依據纖維直徑分為微絲,微管和中間纖維。另外,還散布著一些比微絲還細纖維。本試驗觀察是由微絲平行排列組成纖維束,在動物細胞里稱作”應力纖維”.應力纖維在體外培養貼壁細胞中尤其發達。普通當細胞充分鋪展時,經考馬斯亮藍R250染色,可看到沿細胞長軸伸展粗大纖維束,此即應力纖維。試驗原理細胞骨架染色第2頁儀器、材料和試劑（一）儀器

光學顯微鏡,溫箱,細胞培養設備（二）材料平皿,直徑30mm小染缸,載玻片,蓋玻片,體外培養貼壁細胞B-cap細胞。（三）試劑細胞培養基,磷酸緩沖液(PBS,PH7.4);0.2mol/L磷酸鹽緩沖液(PH7.3);M-緩沖液;1％Triton×-100(用M-緩沖液配);0.2％考馬斯亮藍R250;3.0％戊二醛(用0.2mol/L磷酸鹽緩沖液配制)。細胞骨架染色第3頁試驗步驟1.細胞培養在平皿中蓋玻片上,還未致密時即可使用。取出蓋玻片,用PBS洗滌3次。2.用1％Triton×-100處理25-30min,室溫或37℃均可。3.馬上用M-緩沖液輕輕洗細胞3次。4.略晾干后,用3.0％戊二醛固定細胞5-15min。細胞骨架染色第4頁5.PBS洗數次,濾紙吸干。6.用0.2％考馬斯亮藍R250染片子1h。然后小心用水沖洗,蒸餾水沖洗,空氣中略干燥。7.普通光學顯微鏡下用40×物鏡或油鏡觀察。應力纖維成深藍色。試驗步驟細胞骨架染色第5頁注意事項

1.洗片時要輕柔，以免把細胞從載片上洗去。

2.細胞蓋片注意正反面。

3.染色后應沖洗蓋片后面，防止損傷細胞。

細胞骨架染色第6頁試驗匯報1.畫出你所觀察到微絲圖像。2.對試驗成功失敗原因進行討論。細胞骨架染色第7頁思索題微絲觀察試驗中,1％Triton×-100處理細胞作用是什么?此試驗是否能看到微管,中間纖維?為何?M-緩沖液作用是什么?細胞骨架染色第8頁二.甲基羅丹明標識鬼筆環肽染色法觀察微絲掌握觀察動物細胞內微絲方法:甲基羅丹明標識鬼筆環肽染色法。試驗目標細胞骨架染色第9頁鬼筆環肽是雙環桿肽,與微絲有強烈親和作用，能使F-actin穩定。用熒光燃料甲基羅丹明標識鬼筆環肽能夠清楚地顯示細胞中微絲。試驗原理細胞骨架染色第10頁（一）儀器

熒光顯微鏡（二）材料平皿,直徑30mm小染缸,載玻片,蓋玻片,鋁盒,體外培養貼壁細胞如B-cap細胞。（三）試劑細胞培養基,3.7％甲醛-PEMD,磷酸緩沖液(

溫馨提示

  • 1. 本站所有資源如無特殊說明，都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
  • 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等，如果需要附件，請聯系上傳者。文件的所有權益歸上傳用戶所有。
  • 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙，網頁內容里面會有圖紙預覽，若沒有圖紙預覽就沒有圖紙。
  • 4. 未經權益所有人同意不得將文件中的內容挪作商業或盈利用途。
  • 5. 人人文庫網僅提供信息存儲空間，僅對用戶上傳內容的表現方式做保護處理，對用戶上傳分享的文檔內容本身不做任何修改或編輯，并不能對任何下載內容負責。
  • 6. 下載文件中如有侵權或不適當內容，請與我們聯系，我們立即糾正。
  • 7. 本站不保證下載資源的準確性、安全性和完整性, 同時也不承擔用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。

評論

0/150

提交評論