關于血細胞分析儀與臨床應用傳統的血細胞檢查完全采用手工方法,不僅操作繁瑣費時,而且由于多種原因,計數結果的準確性和精密度難以保證.20世紀50年代末,庫爾特采用電阻率變化與電子技術相結合的方法,發明了性能比較穩定的電阻抗法血細胞計數儀,開創了血細胞分析的新紀元.第2頁,共69頁，2024年2月25日，星期天公司創辦人貝克曼儀器公司

始創于1935年

Dr.ArnoldO.Beckman庫爾特電子公司始創于1958年WallaceH.&JosephR.Coulter第3頁,共69頁，2024年2月25日，星期天庫爾特先生(1913-1998)“ScienceServingHumanity”(科學服務人類)庫爾特原理發明者，早期單克隆抗體研究者直至1998年，曾獲6項美國科學榮譽，及多項發明專利第4頁,共69頁，2024年2月25日，星期天主要服務對象

生物研究診斷醫療大學研究所生物技術生化制藥醫院臨床實驗室私人實驗室醫療所第5頁,共69頁，2024年2月25日，星期天血細胞分析儀的發展史

從庫爾特公司的發展史開始…1947年，華萊士.庫爾特先生發明庫爾特原理；

“當一個不良導體顆粒，例如血細胞，通過兩個電極之間時，導致電路的電阻抗發生變化。”-華萊士.庫爾特，

1947第6頁,共69頁，2024年2月25日，星期天1953年庫爾特家族研制出全世界第一臺血細胞計數儀：ModelA;現在，95%的血細胞分析儀采用庫爾特原理；第7頁,共69頁，2024年2月25日，星期天

庫爾特原理三要素：小孔、負壓、電極

檢測：細胞大小和數量

負壓血細胞懸液外電極內電極小孔小孔管小孔電流樣品杯小孔近觀在等滲電解質溶液（稀釋液）中，有一個用于細胞計數的小孔管，其內側充滿了稀釋液，并有一個內電極，其外側細胞懸液中有個外電極，小孔兩側的電極之間有穩定的電流。細胞為相對不良導體，其導電性質比稀釋液低，當有個細胞通過小孔，于瞬間引起了電壓變化而出現脈沖信號，脈沖的數量與細胞的數量成正比，高度與細胞體積成正比。脈沖信號經放大，閾值調節，甄別，整形后，送入計數系統進行處理，得出被測細胞的數量和體積分布直方圖。第8頁,共69頁，2024年2月25日，星期天檢測區域紅細胞紅細胞通過小孔庫爾特原理Oscilloscope示波鏡第9頁,共69頁，2024年2月25日，星期天檢測區域白細胞白細胞通過小孔庫爾特原理示波鏡第10頁,共69頁，2024年2月25日，星期天庫爾特技術第11頁,共69頁，2024年2月25日，星期天高頻度分析-直方圖直方圖-X軸：體積（fL）-Y軸：相對數量通道劃分RBC直方圖：36-360fLPLT直方圖：2-20fLWBC直方圖：35-450fL第12頁,共69頁，2024年2月25日，星期天脈沖編輯（專利技術）作用：刪除不規則脈沖對體積測量的影響。第13頁,共69頁，2024年2月25日，星期天重疊校正（專利技術）

小孔近觀

作用：糾正因重疊而導致的對顆粒計數和體積測量的影響。第14頁,共69頁，2024年2月25日，星期天三次計數/延長計數血小板計數以三次擬合的均值為依據；對血小板濃度小于67X109/L的標本，儀器自動延長1-2個三次計數。三次計數：統計補償；監控計數過程的穩定性。延長計數：針對低濃度的標本。第15頁,共69頁，2024年2月25日，星期天掃流技術(專利技術)測試區域紅細胞回流示波鏡紅細胞血小板+-第16頁,共69頁，2024年2月25日，星期天測試區域紅細胞被掃流液沖走示波鏡RBCPLT+-掃流液掃流技術(專利技術)第17頁,共69頁，2024年2月25日，星期天掃流技術(專利技術)作用：防止紅細胞回流對血小板計數的干擾；防止細胞再度進入感應區被兩次計數。第18頁,共69頁，2024年2月25日，星期天擬合曲線（專利技術）在血小板的直方圖上可見兩條曲線：一條是2fl-20fl的原始數據曲線;另一條是0fl-70fl的擬合曲線.由最小平方回歸法定義出一條對數正態曲線，即擬合曲線；第19頁,共69頁，2024年2月25日，星期天擬合曲線血小板計數的干擾主要來自:2fl以下：噪音;細菌的干擾20fl以上：裂紅細胞;小紅細胞;白細胞的干擾第20頁,共69頁，2024年2月25日，星期天擬合曲線的作用對曲線下的面積進行積分計算；將該面積值校準到參考的PLT計數；獲得與參考方法最具相關性的血小板數值.在0-70fL范圍的非血小板脈沖被擬合曲線排除于血小板計數之外；大大增加了血小板的線性范圍(0-1,500,000)第21頁,共69頁，2024年2月25日，星期天燃燒電路（專利技術）作用：預防蛋白堆積于計數孔；取消小孔的日常保養程序。

第22頁,共69頁，2024年2月25日，星期天酶清潔劑（專利配方）操作：每24小時浸泡0.5小時。作用：令儀器的流式通道、計數池、分血片、和血紅蛋白檢測室保持潔凈性。圖示：計數孔在用CLENZ清潔劑浸泡前后的潔凈度比較。

第23頁,共69頁，2024年2月25日，星期天自我清潔的分血片庫爾特另一個免日常保養的關鍵部件是專利的、是具自我清潔功能的分血片。第24頁,共69頁，2024年2月25日，星期天庫爾特CBC分析技術計數和體積分析的技術脈沖編輯重疊校正三次計數/延長計數高頻度分析血小板分析的技術掃流技術擬合曲線三次計數/延長計數免日常保養的技術燃燒電路酶清潔劑自我清潔的分血片其他技術第25頁,共69頁，2024年2月25日，星期天白細胞分類原理三分類原理：庫爾特直方圖分類五分類原理：VCS三維分析原理第26頁,共69頁，2024年2月25日，星期天從三分類到五分類三分類：淋巴細胞單核細胞粒細胞中性粒細胞嗜酸細胞嗜堿細胞五分類：淋巴細胞單核細胞中性粒細胞嗜酸細胞嗜堿細胞第27頁,共69頁，2024年2月25日，星期天在進行白細胞分析時,,由于白細胞計數池中除加入一定量的稀釋液外還加入了溶血劑,此溶血劑一方面使紅細胞溶解,另一方面使白細胞質經胞膜滲出,胞膜緊裹在細胞核或存在的顆粒周圍,使白細胞成為”膜包核”.儀器將體積在35-450fl的這種顆粒認定為白細胞,并根據其體積大小在直方圖上從左至右初步確認其相應的三個細胞群.第28頁,共69頁，2024年2月25日，星期天在正常白細胞直方圖上,小細胞群是位于左側又高又陡的峰,分布在35-90fl,以成熟淋巴細胞為主要特征細胞,大細胞群是位于右側較低且分布寬的峰,跨越160-450fl,以中性粒細胞為主要特征細胞,位于大、小細胞群之間的較平坦的區域，分布在90-160fl，是單個核細胞，也稱為中間細胞，以單核細胞為主要特征細胞。淋巴細胞單核細胞粒細胞第29頁,共69頁，2024年2月25日，星期天儀器根據各細胞群占總體的比例計算出相應的百分比，從而得到白細胞三分類結果，如果再與該標本的白細胞總數相乘，即得到各類細胞的絕對值。電阻抗法的白細胞分類只是根據加溶血劑后白細胞體積的大小獲得，由于多種因素可影響白細胞分類的真實性，因此，準確的白細胞分類還不能完全脫離手工顯微鏡檢查。第30頁,共69頁，2024年2月25日，星期天白細胞五項分類：VCS技術分析外周血液中的淋巴細胞單核細胞嗜中性粒細胞嗜酸性粒細胞嗜堿性粒細胞運用VCS技術,對白細胞進行多參量分析大小、核形、顆粒特性第31頁,共69頁，2024年2月25日，星期天嗜酸細胞淋巴細胞單核細胞中性粒細胞血小板

嗜堿細胞紅細胞第32頁,共69頁，2024年2月25日，星期天淋巴嗜堿單核嗜酸中性粒細胞第33頁,共69頁，2024年2月25日，星期天V.C.S.三維分析原理運用V、C、S三種探針,在流式通道的某一位點,對通過的單列白細胞，進行逐個的、同時的、三重的檢測，以及三維分析,以確定其亞群性質。V-低頻波，分析細胞體積；C-高頻波，分析細胞核型；S-激光，分析細胞的顆粒特性。第34頁,共69頁，2024年2月25日，星期天VCS檢測八千多個白細胞逐個、直接、同時地接受VCS三重檢測，得到各自的三維座標值VCS第35頁,共69頁，2024年2月25日，星期天增強型流式通道VCS增強型流式通道運用三種獨立的能量探針來分析細胞第36頁,共69頁，2024年2月25日，星期天更好的大小測量方法

0-3

(相對大小)V是以參考的直流電阻方法檢測整個細胞的體積普通流式方法根據激光的前向散射估計細胞的相對大小激光VCS

-DC第37頁,共69頁，2024年2月25日，星期天更好的內部結構測量方法

7-10

(復雜性)RF運用類似于超聲波的高頻波測量細胞的內部結構普通流式方法根據激光的低角度散射估計細胞的復雜性激光VCS-RF第38頁,共69頁，2024年2月25日，星期天射頻(RF)信號的問題細胞越大，它發出射頻信號所需要的時間就越長；因此，細胞大小對射頻信號具有影響；這種影響可以減弱對LY、MO、和GR的分辨效果。VolumeRF第39頁,共69頁，2024年2月25日，星期天將射頻轉換為阻光性已知細胞體積，可對射頻信號作體積補償；使信號的變化只受細胞內部結構的影響；阻光性測量核的密度和分葉性，使更好地區分細胞。VolumeOpacity第40頁,共69頁，2024年2月25日，星期天高頻傳導信號大的細胞嗜中性、嗜酸性、嗜堿性粒細胞高頻傳導信號小的細胞淋巴、單核細胞高頻傳導（阻光性）第41頁,共69頁，2024年2月25日，星期天9Odeg.激光VCS-LaserS是運用一個寬角度的散射范圍（10

-70

）來測量細胞的顆粒特性普通流式方法運用單角度/側向激光散射測量細胞的顆粒特性更好的顆粒特性測量方法第42頁,共69頁，2024年2月25日，星期天激光散射信號大的細胞嗜中性粒細胞、嗜酸性粒細胞激光散射信號小的細胞淋巴細胞、單核細胞、嗜堿性粒細胞激光散射第43頁,共69頁，2024年2月25日，星期天三維分析技術將檢測過的8,192個細胞分布到一個以V、C、S為三維坐標的空間內，顯示出細胞群特征。高智能的計算機軟件分析分析細胞群的位置、相對密度、輪廓、和大小。三維坐標的數據分析位點多過16×106個。第44頁,共69頁，2024年2月25日，星期天三維空間的立體表示第45頁,共69頁，2024年2月25日，星期天VCS三維分析的技術特點接近原態的白細胞分析一個分類試劑包ScatterPak雙試劑系統的作用去紅細胞:紅細胞溶解劑通過滲透壓差溶解紅細胞；保持白細胞原態:溶解終止液令白細胞恢復到“接近原態”大小。第46頁,共69頁，2024年2月25日，星期天接近原態的WBC分析接近原態的白細胞進入流式通道第47頁,共69頁，2024年2月25日，星期天VCS三維分析的技術特點1流體動力聚焦的流式通道單細胞流在鞘液的包裹下呈最適排列通過流式通道；將重疊限制到最低限度。第48頁,共69頁，2024年2月25日，星期天正常壓力差：標本壓力小于鞘流壓力第49頁,共69頁，2024年2月25日，星期天異常壓力差：標本與鞘流壓力差過小第50頁,共69頁，2024年2月25日，星期天異常壓力差：標本壓力與鞘流壓力相等第51頁,共69頁，2024年2月25日，星期天2增強型流式通道，VCS直接、同時、三重檢測分析細胞的視角與手工相似VCS，匯集最全面的物理檢測工具3三維分析的高分辨率(256

256

256)五分類10種異常細胞第52頁,共69頁，2024年2月25日，星期天十種異常細胞的報警提示第53頁,共69頁，2024年2月25日，星期天紅細胞檢測原理根據各參數的檢測原理不同，大致分為三個部分1紅細胞計數和血細胞比容測定原理與白細胞檢測相同，當紅細胞通過小孔時，形成相應大小的脈沖，脈沖的多少代表RBC的數量，脈沖的高度代表單個細胞的體積。脈沖高度疊加，經換算即可得血細胞比積（HCT）。第54頁,共69頁，2024年2月25日，星期天2血紅蛋白檢測原理在稀釋的血液中加入溶血劑后，紅細胞被溶解，釋放出血紅蛋白(Hb)，后者與溶血濟中有關成分結合形成Hb衍生物，進入Hb測試系統，在特定波長（一般在530-550nm）下比色，吸光度的變化與液體中Hb含量成正比，儀器便可顯示其濃度。第55頁,共69頁，2024年2月25日，星期天HGB測量庫爾特的HGB測量方法：改良的氰化高鐵血紅蛋白試劑；溶血劑令紅細胞破碎溶解，并將血紅蛋白轉換為氰化血紅蛋白一個具寬光譜的鎢燈光源；一個紅外濾光器過濾熱吸收；一個以525nm為中心的寬幅通帶濾光器；沒有來自磺基血紅蛋白的干擾；多重試劑空白。第56頁,共69頁，2024年2月25日，星期天窄幅通帶濾光器光吸收波長第57頁,共69頁，2024年2月25日，星期天寬幅通帶濾光器波長光吸收第58頁,共69頁，2024年2月25日，星期天吸收峰偏移如果吸收峰頻率發生偏移，窄幅通帶濾光器可能會漏掉曲線的大部分；寬幅通帶濾光器對吸收峰偏移現象會有所補償。光吸收光吸收波長第59頁,共69頁，2024年2月25日，星期天3血小板檢測原理隨紅細胞一起在一個系統中進行檢測，根據不同的域值，計算機分別給出血小板與紅細胞的數目。第60頁,共69頁，2024年2月25日，星期天血細胞分析儀

檢測參數的臨床意義白細胞計數的臨床意義

1生理性增多主要見于初生兒，妊娠期與分娩時，運動，疼痛和情緒變化，體力勞動，冷熱水浴，日光或紫外線照射等以及日間變化。第61頁,共69頁，2024年2月25日，星期天病理性增多

急性感染（化膿性感染）嚴重組織損傷或大量血細胞破壞（大手術）急性大出血（脾破裂，宮外孕輸卵管破裂）急性中毒（安眠藥，敵敵畏）腫瘤性增多（白血病）

第62頁,共69頁，2024年2月25日，星期天數量減少革蘭陰性桿菌或病毒感染某些血液病（再障）慢性理、化損傷（電離輻射，長期服用氯霉素）