JIP3基因敲除對NAFLD小鼠肝損傷的作用及機制研究背景肥胖相關代謝性疾病,包括非酒精性脂肪肝?。∟AFLD）,糖尿病和冠心病等患病率逐年上升,目前的治療措施主要針對疾病的后果而不是代謝紊亂的原因。因此,探討肥胖相關疾病的發病機制對于臨床預防和治療肥胖及相關代謝性疾病有很重要的指導意義。NAFLD是指除酒精及其他明確肝損害因素所致的肝脂肪變性及脂代謝紊亂。NAFLD發病的始動因素與肥胖和胰島素抵抗密切相關,脂肪堆積在肝臟易引發氧化應激和脂質過氧化,從而誘發肝細胞損傷、炎癥及纖維化,促進NAFLD進展。JNK相互作用蛋白3（JIP3）是JIP家族的一員,最初被認為是c-Jun氨基末端激酶（JNK）信號通路支架蛋白。JIP3具有較強的形成異二聚體的能力,多面JIP3支架蛋白可以和Toll樣受體（TLR）相關聯,TLR識別病原體特異性分子基序進而參與NF-κB和MAPK信號途徑（包括ERK1/2和JNK等）的傳導,參與細胞增殖、凋亡、神經元發育、遞質運輸等生理活動。目前關于JIP3的研究主要集中在中樞神經系統,其是否可通過調控NF-κB和MAPK信號通路影響NAFLD肝損傷和脂代謝目前尚不清楚。目的本研究的目的是以JIP3基因敲除小鼠(JIP3^-/-小鼠)為研究對象,通過高脂飲食建立NAFLD模型,探討JIP3對NAFLD小鼠肝損傷的作用及分子機制。方法將6-8周齡重18-20g的雄性小鼠(野生型和JIP3^-/-型)適應性喂養1周后,隨機分成4組（n=12/組）:（1）正常飲食野生型組（WT/Con）;（2）正常飲食JIP3^-/-組(JIP3^-/-/Con);（3）高脂飲食野生型組（WT/HFD）;（4）高脂飲食JIP3^-/-組(JIP3^-/-/HFD)?？傦曫B時間為16周,飼養期間每周測量小鼠體重和血糖。12周時,各組均隨機取出4只進行血脂測定和HE染色,評估NAFLD模型建立是否成功。16周末,禁食12h后進行IPGTT和IPITT。次日,小鼠麻醉狀態下通過雙能X射線吸收測定法評估體脂含量,取肝組織保存在液氮中。培養AML-12細胞,將JIP3siRNA轉染至AML-12細胞,將細胞分為四組:（1）正常對照組（con）;（2）高果糖組（HFr）;（3）高果糖JIP3沉默組（siJIP3）;（4）siRNA對照組（siNC）。取靜脈血行生化、激素檢測;WesternBlot檢測肝臟組織或細胞p-NF-κB、p-JNK等蛋白的表達;實時熒光定量PCR檢測IL-1β,TNF-α,IL-6,IL-18和COX2表達;DCF分析ROS生成及定量測量H₂O₂、MDA、XO、SOD及TAC;小鼠肝臟組織甲醛固定后行HE染色觀察形態學變化;免疫組化、免疫熒光檢測p-NF-κB、p-JNK蛋白的表達及定位。結果1.JIP3基因敲除改善高脂飲食小鼠的代謝紊亂和肝損傷與正常飲食組相比,HFD組小鼠體重、體脂含量顯著增加,空腹血糖及胰島素水平明顯升高,IPGTT及IPITT結果提示,小鼠糖耐量受損,胰島素抵抗明顯;JIP3基因敲除后,小鼠體重及脂肪含量降低,空腹血糖及胰島素敏感性改善。HFD組小鼠肝臟脂肪變性、血清ALT、AST及血脂水平明顯升高,肝臟組織中TC和TG含量明顯增加,而JIP3基因敲除小鼠上述肝損傷及脂肪變性指標均有所改善。2.JIP3基因敲除改善高脂飲食誘導小鼠的氧化應激和炎癥反應與正常飲食組相比,HFD組小鼠血清及肝臟組織中炎癥因子（IL-1β,TNF-α,IL-6,IL-18和COX2）表達均上調,氧化應激損傷指標（ROS,H₂O₂,O₂^-,MDA,XO,iNOS）表達水平增加,抗氧化因子（SOD,TAC）水平下降。JIP3基因敲除后,小鼠炎癥因子水平降低,抗氧化應激因子水平升高,氧化應激損傷指標下調。3.JIP3敲除影響脂代謝、氧化應激及炎癥反應的分子機制JIP3基因敲除下調脂質生成相關基因的表達,包括SREBP1c,FAS,SCD1,ADFP和ChREBPα。Westernblot顯示HFD誘導氧化應激相關基因TXNIP,NLRP3,ASC和Caspase-1表達上調,而JIP3敲除小鼠中上述基因表達降低。與WT/Con小鼠相比,JIP3^-/-/HFD小鼠肝臟組織抗氧化因子HO-1和Nrf-2表達顯著上調,同時,TLR4/MyD88/NF-κB信號通路轉錄活性下降。4.JIP3下調可改善高果糖誘導的AML-12細胞的脂質合成、氧化應激損傷和炎癥反應脂質代謝相關基因（SREBP1c,FAS,SCD1,FDAP和ChREBPα）在HFr培養的AML-12細胞中高表達,JIP3沉默后上述基因表達下調。HFr組TXNIP,NLRP3,ASC和Caspase-1表達增加,JIP3沉默組顯著降低。與HFr組相比,JIP3沉默組細胞氧化應激損傷因子ROS,H₂O₂,O₂^-,MDA,XO,iNOS水平顯著降低,相反,抗氧化因子SOD和TAC