細菌的別離、培養與鑒定王欣欣精選課件一、細菌的別離1、從混雜微生物中獲得單一菌株純培養的方法稱為別離。2、別離的目的在于從被檢材料中、或者從污染的眾多雜菌中別離出純的病原菌。精選課件1)病料采集病料：疑似細菌性疾病的水產養殖動物以魚為例，常見病癥：體色發黑，體表潰爛、充血、粘液增多，鰓、鰭破損，內臟紅腫，腹水，眼球凸出或渾濁，肛門紅腫等等。活體病料→應考慮病原在疾病開展過程中的部位〔上述病癥〕病料死后→應立即采集，越早越好精選課件魚的解剖結構：精選課件

精選課件2〕無菌操作無菌操作是指在環境中一切有生命活動的微生物的營養細胞及其芽孢或孢子都不存在的狀態。微生物研究過程中，既要防止各種外界的微生物進入操作對象又要杜絕操作對象污染周圍環境的操作技術。無菌操作是對微生物學工作者最根本的要求，必須經過嚴格訓練才能形成無菌操作素養。不管何種情況下，頭腦中都應該有這個概念。無菌操作貫穿于整個別離過程，例如：病料的采集、器材的準備、具體的操作。所用器械及物品均應事先滅菌備用，金屬器具包裝后高壓滅菌或煮沸30min，玻璃器皿可高壓滅菌也可干熱滅菌，膠皮塞、培養基等那么要高壓滅菌。精選課件3〕細菌別離工具：接種環〔接種前后都要嚴格過火滅菌〕接種環境：無菌操作臺接種方法：平板劃線*以左手持平板，中指、無名指和小指托著平板底,拇指和食指翻開上蓋，使蓋與底成30o角，以便劃線。*右手握接種環，先滅菌鉑絲局部，待絲燒紅后，再于火焰上滅菌金屬棒局部。把接種環上的病料涂在培養基一側，一般作5-8次劃線。將環上的多余細菌材料燒掉后，從第1次劃線引出第2次劃線；再從第2次劃線引出第3次劃線，如此反復3-4次劃線后，即可把整個平板外表劃滿，注意每一次劃線只能與上一次劃線重疊，這樣就可在最后的1-2次劃線上出現多量的單個菌落，以便進行純培養。精選課件具體操作：取病料，將體表的泥沙等雜物用清水沖洗干凈取干凈托盤，將病料置于托盤中托盤置于工作臺上，接種前準備好酒精燈、接種環、酒精棉球、解剖刀、剪刀、鑷子等。事先作好準備工作，把所用的物品器械擺好解剖病料，將接種環燒紅冷卻后接觸病變部位，平板劃線。如體表創傷潰爛部位，病變內臟。腹水可直接涂布平板平板置于28℃恒溫培養箱培養24h，觀察細菌生長狀況〔注意：操作臺在使用前后都需要用酒精棉球擦拭臺面，保持操作臺的整潔〕精選課件二、細菌的培養培養基：培養基是指由人工方法配合而成的，用于微生物培養、別離、鑒別、研究和保存菌種用的混合營養制品。培養基的種類①根底培養基：含有一般細菌生長繁殖需要的根本營養物質；可作為一些特殊培養基的根底成分〔普通營養瓊脂〕②加富培養基：在根底培養基中參加某些特殊營養物質〔如血液/血清、酵母浸膏或生長因子等〕；用以培養對營養要求高的微生物〔2216E〕③選擇培養基：利用細菌對某種或某些化學物質的敏感性不同；在培養基中參加這類物質，利于所需別離的細菌生長，而抑制不需要的細菌生長，從而到達別離某種微生物的目的。〔中國科學院海洋研究所專利：一種定量檢測鰻弧菌的選擇性培養基及其制備〕【利用鰻弧菌對氨芐青霉素的抗性】④鑒別培養基：是一類含有某種特定化合物或試劑的培養基。某種細菌在這種培養基上培養后，產生某種代謝產物，能與這種特定化合物或試劑發生某種明顯的特征性反響；從而到達區分不同的微生物。〔TCBS〕精選課件

病料在接種培養基后，經過一段時間，應檢查其生長狀況。首先用肉眼檢查有無細菌生長；假設有，那么需進一步檢查菌落是否純一。形態特征包括：大小、形狀、突起或扁平、凹陷、邊緣〔光滑、波形、鋸齒狀、卷發狀等〕、顏色〔紅色、灰白色、黃色等〕、外表〔光滑、粗糙等〕、透明度〔不透明、半透明、透明等〕和粘度等多數情況下，沿劃線生長較多的菌落，是待檢病原菌的可能性較大；少數零散分布或不在劃線上生長的菌落，多為雜菌。為慎重起見，可挑選假設干個可疑菌落分別進行劃線，進一步純化培養如果需要擴大培養，可挑取單菌落接種至液體培養基，搖床培養精選課件三、細菌的鑒定一〕傳統方法：常規宏觀菌落形態學觀察,主要觀察菌落在其適合的培養基上的生長狀況。細菌的個體形態學觀察,即通過顯微鏡觀察。形態學鑒定輔以生化試驗在細菌鑒定中具有重要的意義〔生化鑒定管、藥敏實驗等〕二〕儀器的自動化鑒定：VITEK系統、MIDI系統、BIOLOG系統、SENSITITRE系統、AUTOSCEPTOR系統以及MICROSCAN系統等〔ATBExpression〕三〕分子生物學方法:基因測序、指紋圖譜技術、基因探針技術、聚合酶鏈反響(PCR)、GC含量測定等精選課件生化鑒定管各種細菌所具有的酶系統不盡相同，對營養基質的分解能力也不一樣，因而代謝產物或多或少地各有區別，可供鑒別細菌之用精選課件ATBExpression：自動化微生物鑒定和藥敏分析系統

精選課件分子生物學技術分子生物學鑒定目前比較流行的主要是核酸檢測技術,包括基因測序、指紋圖譜技術、基因探針技術、聚合酶鏈反響(PCR)、GC含量測定等。PCR和核酸雜交單獨或結合在儀器已經形成比較經典的核酸檢測技術,目前這兩者已經得到了較大范圍的推廣和應用精選課件

微生物學工作必須在一個清潔衛生的環境中進行，實驗室的整潔與否直接影響實驗效果。在衛生狀況差