目錄TOC\h\z\t"t-y-2,2,t-y-1,1"天然藥物化學(xué)實(shí)驗(yàn)須知2天然藥物化學(xué)實(shí)驗(yàn)工程7實(shí)驗(yàn)一黃柏中鹽酸小檗堿的提取別離與鑒定7實(shí)驗(yàn)二槐米中蕓香苷的提取、別離與鑒定11實(shí)驗(yàn)三八角茴香中揮發(fā)油的提取、別離與鑒定15實(shí)驗(yàn)四茶葉中咖啡因的提取、別離與鑒定19天然藥物化學(xué)根本操作技能23天然藥物化學(xué)實(shí)驗(yàn)天然藥物化學(xué)實(shí)驗(yàn)須知〔一〕實(shí)驗(yàn)?zāi)康?.驗(yàn)證理論，加深對理論知識(shí)的理解。2.掌握回流提取、連續(xù)回流提取、兩相溶劑萃取〔分液漏斗法〕、溶劑回收、薄層色譜等根本操作技能。3.熟悉結(jié)晶法、柱色譜法、化學(xué)成分預(yù)試驗(yàn)等實(shí)驗(yàn)技術(shù)。4.了解四大光譜〔紫外、紅外、核磁共振、質(zhì)譜〕的根本操作規(guī)程。5.培養(yǎng)觀察、分析和解決問題的實(shí)際工作能力以及科研動(dòng)手能力。〔二〕實(shí)驗(yàn)要求1.實(shí)驗(yàn)前，認(rèn)真閱讀實(shí)驗(yàn)內(nèi)容及其相關(guān)知識(shí)，掌握實(shí)驗(yàn)原理、各步操作方法以及實(shí)驗(yàn)考前須知。2.天然藥物化學(xué)實(shí)驗(yàn)時(shí)間長及操作多，實(shí)驗(yàn)前應(yīng)作好有關(guān)實(shí)驗(yàn)內(nèi)容在時(shí)間上的方案，盡量做到實(shí)驗(yàn)緊湊有序。3.尊重實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)老師，聽從實(shí)驗(yàn)安排。4.不遲到，不早退。因急事中途離開實(shí)驗(yàn)室，必須向老師請假。6.以科學(xué)的實(shí)事求是態(tài)度，認(rèn)真及時(shí)記錄操作步驟、實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象、有關(guān)數(shù)據(jù)、實(shí)驗(yàn)結(jié)果等。7.認(rèn)真如實(shí)地填寫實(shí)驗(yàn)報(bào)告，及時(shí)上交。〔三〕實(shí)驗(yàn)室規(guī)那么1.進(jìn)實(shí)驗(yàn)室必須穿工作服。2.進(jìn)實(shí)驗(yàn)室后，首先清點(diǎn)本次實(shí)驗(yàn)所用儀器設(shè)備、溶劑、試劑，熟悉存放位置。3.實(shí)驗(yàn)室嚴(yán)禁吸煙、飲食。不做與實(shí)驗(yàn)無關(guān)的事情。4.實(shí)驗(yàn)室應(yīng)保持安靜，不許在實(shí)驗(yàn)室大聲談笑、嬉戲打鬧。5.嚴(yán)格遵守平安規(guī)那么和各種儀器操作規(guī)程。對性能和操作不熟悉以及與本次實(shí)驗(yàn)無關(guān)的儀器設(shè)備，不要隨便安裝使用，貴重儀器設(shè)備，未經(jīng)老師允許，不得隨意動(dòng)用。6.正確取用藥品、溶劑和試劑，防止交叉污染，確保實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性。7.實(shí)驗(yàn)藥品、試劑以及儀器，用后及時(shí)歸復(fù)原位，不要亂拿亂放。8.保持實(shí)驗(yàn)室的干凈整潔，實(shí)驗(yàn)藥渣以及紙屑等固體廢棄物投入垃圾箱，易污染環(huán)境的廢棄液倒入廢液缸，有毒、易燃、易揮發(fā)的廢棄液倒入指定的有蓋廢液瓶中，一般廢棄液沖入下水道。9.保護(hù)公物，注意節(jié)約水電和能源，不浪費(fèi)藥品、試劑。損壞儀器設(shè)備，及時(shí)向老師報(bào)告，并登記。10.實(shí)驗(yàn)完畢后，將所用儀器設(shè)備洗滌或擦拭干凈，擺放整齊，清點(diǎn)數(shù)目。11.安排值日生清掃實(shí)驗(yàn)室。檢查關(guān)閉水、電、煤氣、門窗。〔四〕實(shí)驗(yàn)室平安規(guī)那么1.實(shí)驗(yàn)前，熟悉本次實(shí)驗(yàn)所用儀器設(shè)備的安裝、操作方法、考前須知以及藥品、試劑、溶劑的有關(guān)性能。熟悉有關(guān)消防器材的存放位置和使用方法。2.藥品、試劑應(yīng)遠(yuǎn)離火源。使用易燃溶劑時(shí)，實(shí)驗(yàn)室應(yīng)防止有明火。3.在實(shí)驗(yàn)過程中，應(yīng)檢查儀器管道是否暢通，連接部位是否牢固。溫度控制是否適宜。電器及開關(guān)是否發(fā)熱，有無漏電或煤氣泄漏現(xiàn)象。4.實(shí)驗(yàn)室應(yīng)保持空氣流通。做有害氣體產(chǎn)生的實(shí)驗(yàn)，應(yīng)在難風(fēng)櫥內(nèi)進(jìn)行。嗅聞氣體要注意正確的方法。5.不要正面俯視正在加熱的物質(zhì)。加熱的容器管口不要對著別人或自己。不要在加熱溶液中加放沸石或活性炭。玻璃儀器不要驟冷或驟熱，防止爆裂。6.吸取有害液體，應(yīng)使用吸球〔不能直接用口吸取〕，使用有毒害藥品、溶劑、試劑后，要及時(shí)洗手。7.配制易產(chǎn)熱溶液時(shí)，應(yīng)將藥品或試劑緩慢向溶劑中參加，邊加邊攪拌。8.不要用濕手開閉電閘或電器開關(guān)。9.實(shí)驗(yàn)完畢后，及時(shí)切斷電源，關(guān)閉酒精燈，關(guān)閉煤氣。〔五〕實(shí)驗(yàn)室平安事故天然藥物化學(xué)實(shí)驗(yàn)，常以電、煤氣、酒精作能源，經(jīng)常接觸對人體有毒害作用的試劑，難免發(fā)生一些平安事故。下面介紹幾種實(shí)驗(yàn)室事故處理措施：中毒中毒有呼吸道吸入中毒、口服中毒、皮膚接觸中毒三種情況。如發(fā)生中毒現(xiàn)象，應(yīng)迅速將中毒者扶離現(xiàn)場至通風(fēng)良好的地方，解開衣領(lǐng)，松開褲帶，作深呼吸，輕者可慢慢恢復(fù)。較重者可飲服高錳酸鉀〔1：5000〕或1％硫酸銅溶液后，壓舌催吐，嘔吐后，再根據(jù)毒物性質(zhì)不同，選擇飲服雞蛋清、牛奶、淀粉糊、桔子汁、咖啡堿、濃茶等。如發(fā)生昏迷、休克，應(yīng)進(jìn)行人工呼吸或給氧，并及時(shí)送往醫(yī)院急救。灼傷火焰、高溫液體、熾熱物體、溶劑蒸汽、電熱物、化學(xué)藥品直接作用于人體，引起皮膚或機(jī)體的燒、燙傷，稱為灼傷。如為火灼傷，忌水洗，可局部涂抹苦味酸、甘油、雞蛋清、燒〔燙〕傷膏等。藥物灼傷應(yīng)先用大量水沖洗，再根據(jù)藥物的性質(zhì)，采用適宜的方法處理。如酸堿灼傷，先用大量水沖洗后，再用弱堿或弱酸水溶液沖洗，并局部涂凡士林。溴灼傷，用酒粗以及2％硫代硫酸鈉分別清洗，接著用蘸有甘油的棉球輕輕擦洗，最后涂抹甘油或燙傷油膏等。酚類灼傷，用溫水和5％酒精洗后，用飽和硫酸鈉水溶液濕敷。如果試劑濺入眼內(nèi)，先用在量水淋沖，再點(diǎn)入可的松眼藥水等。觸電如有人發(fā)生觸電事故，設(shè)法使觸電者脫離電源是當(dāng)務(wù)之急，方法有：〔1〕迅速切斷電源〔2〕用木棍或竹竿撥開電線〔3〕穿膠底鞋或踏木板，戴橡膠手套拉開觸電者〔切忌不采取措施，徒手直接拉觸電者，以免連環(huán)觸電〕。脫離電源后，觸電輕微者可立即自行恢復(fù)，輕嚴(yán)重者〔數(shù)秒鐘未恢復(fù)知覺〕須進(jìn)行人工呼吸，并立即送醫(yī)院急救。燃燒一旦發(fā)生燃燒事故，要沉著冷靜，切忌手忙腳亂。首先迅速切斷電源，關(guān)閉煤氣，移走火源附近易燃、易爆物品，再根據(jù)燃燒物的理化性質(zhì)，選用適宜物質(zhì)和方法法撲滅。常用的滅火物質(zhì)與器材有水、砂土或泡沫、惰性氣體、四氯化碳滅火器等。比水輕，與水不混溶的溶劑燃燒，用砂土或泡沫、二氧化碳、四氯化碳滅火器撲滅，切忌用水，以免火勢蔓延。比水重，與水不混溶的有機(jī)溶劑燃燒，可用噴水的方法撲滅。水溶性溶劑的燃燒，可用砂土、噴水或泡沫、二氧化碳、四氯化碳滅火器等撲滅。不能用水和泡沫滅火器滅火的物質(zhì)有：鉀、鈉、鈣、鋅粉、鎂粉、鋁粉、硼氫化鈉〔鉀〕、氫氧化鈉〔鉀〕、五氯化磷、五氧化二磷、過氧化鈉〔鋇〕、發(fā)煙硫酸等。電器起火，必須迅速切斷電源，切忌在有電情況下使用水或泡沫滅火器。爆炸產(chǎn)生爆炸的原因一般有三種情況：〔1〕易爆物在一定條件下發(fā)生劇烈的化學(xué)反響而爆炸，如多硝基化合物。〔2〕某物質(zhì)的蒸氣與空氣到達(dá)一定濃度時(shí)，遇火星產(chǎn)生爆炸。〔3〕加熱液體物質(zhì)時(shí)，容器因內(nèi)壓增大而爆炸。爆炸不僅直接傷害人體，損壞儀器設(shè)備，而且往往伴隨燃燒，危害極大。萬一發(fā)生爆炸事故，不要驚慌，應(yīng)根據(jù)情況，采取適當(dāng)方法處理。因爆炸而受傷者，小傷可自行處理，重傷及時(shí)送往醫(yī)院救治。對因爆炸而產(chǎn)生的燃燒，按上述燃燒滅火的方法處理。天然藥物化學(xué)實(shí)驗(yàn)工程實(shí)驗(yàn)一黃柏中鹽酸小檗堿的提取別離與鑒定[目的要求]通過提取別離和鑒定黃柏中的小檗堿，掌握滲漉法、鹽析法、結(jié)晶法和薄層色譜法的根本操作過程及考前須知，熟悉小檗堿的化學(xué)鑒定方法。[實(shí)驗(yàn)內(nèi)容]〔一〕主要成分的結(jié)構(gòu)黃柏為蕓香科植物黃皮樹PhellodendronChineseSchneid.或黃檗PhellodendronamurenseRupr.的枯燥樹皮。前者習(xí)稱“川黃柏〞，后者習(xí)稱“關(guān)黃柏〞。川黃柏主產(chǎn)于四川、貴州、湖北等地。關(guān)黃柏主產(chǎn)于遼寧、吉林等地。黃柏具有清熱燥濕，瀉火除蒸，解毒療瘡等成效。黃柏中主要含有小檗堿〔berberine〕，基結(jié)構(gòu)如下：川黃柏含小檗堿約1.37％～5.8％，關(guān)黃柏含小檗堿約0.60％～1.64％。〔二〕主要成分的性質(zhì)小檗堿異名黃連素，分子式[C20H18NO4]+，分子量336.37。自水或稀乙醇中結(jié)晶得到的小檗堿為黃色針狀結(jié)晶，鹽酸小檗堿為黃色小針狀結(jié)晶。小檗堿能緩溶于冷水〔1：20〕，易溶于熱水和熱乙醇，難溶于丙酮、氯仿、苯。鹽酸小檗堿微溶于冷水，易溶于熱水，不溶于冷乙醇、氯仿和乙醚。〔三〕根本原理利用小檗堿可溶于水，鹽酸小檗堿幾乎不溶于水的性質(zhì)，先將藥材用石灰乳潤濕，使藥材吸水膨脹，小檗堿游離，同時(shí)可使黃柏中含有的粘液質(zhì)沉淀。用水滲漉提取小檗堿，再將其轉(zhuǎn)化成鹽酸鹽而沉淀析出，結(jié)合鹽析法得到鹽酸小檗堿。〔四〕操作步驟1.提取黃柏粗粉〔100g〕，置1000mL燒杯中，參加15gCa(OH)2,800mL水，靜置1小時(shí)，用棉花抽濾。濾液參加7％氯化鈉，裝廣口瓶中過夜析出沉淀，抽濾。沉淀即為鹽酸小檗堿粗品3.鑒定〔1〕取鹽酸小檗堿〔自制〕約50mg于10mL試管中，加純化水5mL，加熱溶解，參加2滴10％氫氧化鈉，顯橙色。溶液放冷后，漏斗濾過，濾液中參加數(shù)滴丙酮即產(chǎn)生黃色丙酮小檗堿的沉淀。〔2〕取鹽酸小檗堿〔自制〕少許于10mL試管中，加稀硫酸2mL振搖半分鐘溶解后〔不會(huì)全溶〕，加漂白粉少許，顯櫻紅色。〔3〕鹽酸小檗堿的薄層色譜鑒定吸附劑：中性氧化鋁〔軟板〕展開劑：氯仿-甲醇〔9：1〕顯色劑：紫外燈下觀察熒光或自然光下觀察黃色斑點(diǎn)試樣：0.1%鹽酸小檗堿乙醇液〔自制〕對照品：0.1％鹽酸小檗堿乙醇液[根本操作注意點(diǎn)]1.實(shí)驗(yàn)原料盡可能選用小檗堿含量較高〔1.37％～5.8％〕的川黃柏。2.參加氯化鈉的目的是將小檗堿轉(zhuǎn)化成鹽酸鹽并利用其鹽析作用，降低鹽酸小檗堿在水中的溶解度。其用量不宜超過10％,否那么溶液的比重增大，使鹽酸小檗堿結(jié)晶呈懸浮狀態(tài)而難以沉淀，要趁熱濾過，防止鹽酸小檗堿在濾過時(shí)析出結(jié)晶，使濾過困難，產(chǎn)量降低。3.中性氧化鋁板自行制備，3g氧化鋁參加7mLCMC-Na，鋪成兩塊板[思考題]怎樣從黃柏中提取別離鹽酸小檗堿？原理是什么？用薄層色譜法檢識(shí)鹽酸小檗堿時(shí)，為什么常選用氧化鋁作吸附劑？如果選用硅膠作吸附劑，怎樣操作才能到達(dá)較準(zhǔn)確的結(jié)果？實(shí)驗(yàn)二槐米中蕓香苷的提取、別離與鑒定[目的要求]通過蕓香苷的提取與精制，掌握堿溶酸沉法提取黃酮類化合物的原理及操作。通過蕓香苷結(jié)構(gòu)的鑒定，了解苷類結(jié)構(gòu)研究的一般程序和方法。要求得到蕓香苷、槲皮素產(chǎn)品。[實(shí)驗(yàn)內(nèi)容]主要成分的結(jié)構(gòu)及性質(zhì)槐米為豆科植物槐Sophorajaponica的花蕾，其有效成分為蕓香苷，又稱蘆丁〔rutin〕，蕓香苷是由苷元槲皮素與蕓香糖〔rhaα1→6glc〕連接而成的二糖苷，結(jié)構(gòu)及性質(zhì)見教材第六章第六節(jié)“黃酮類化合物提取別離實(shí)例〞。根本原理提取蕓香苷的方法很多，目前我國多采用堿溶酸沉法，提取原理是依據(jù)蕓香苷結(jié)構(gòu)中含有酚羥基，能與堿成鹽而溶于水中，向此鹽溶液中參加酸，那么蘆丁游離析出。蘆丁的精制是利用它可溶于熱水，難溶于冷水的性質(zhì)進(jìn)行的。操作步驟蕓香苷的提取稱取槐米粗粉20g，置500mL或1000mL燒杯中，參加0.4%硼砂沸水溶液200mL，在攪拌下加石灰乳，調(diào)至PH8~9，加熱微沸20分鐘〔注意保持pH8~9〕,并隨時(shí)補(bǔ)充蒸發(fā)掉的水分，趁熱用雙層紗布濾過。收集濾液，藥渣按同樣操作再提取一次，合并兩次濾液。濾液在60～70℃用濃鹽酸調(diào)至pH3~4，靜置過夜使沉淀完全，抽濾，沉淀用蒸餾水洗2～3次，抽干，置空氣中晾干，得粗品蕓香苷。蕓香苷的精制稱定粗品蕓香苷的重量，按約1：200的比例懸浮于蒸餾水中，煮沸10分鐘使蕓香苷全部溶解，趁熱抽濾，冷卻濾液，靜置析晶。抽濾，置空氣中晾干或60～70℃枯燥，得精制蕓香苷，稱重，計(jì)算收率。蕓香苷的水解取蕓香苷1g，研細(xì)后置于250mL圓底燒瓶中，參加2％硫酸溶液100mL，直火微沸回流約40分鐘，至析出的黃色沉淀不再增加為止，放冷抽濾，濾液保存作糖檢查，沉淀用少量水洗去酸，抽干水分，晾干稱重，得粗制槲皮素，然后用乙醇〔95％乙醇約15mL〕重結(jié)晶即得精制槲皮素。鑒定苷和苷元的化學(xué)鑒別取蕓香苷3～4mg，加乙醇5～6mL使溶解，分成二份，作以下試驗(yàn)。取槲皮素同樣量，同樣操作。鹽酸-鎂粉反響：取上述溶液1～2mL，加2滴濃鹽酸，再加少許鎂粉，注意觀察顏色變化的情況。Molisch反響：取上述溶液1～2mL，加10％等體積的α-萘酚乙醇溶液，搖勻，沿管壁加濃硫酸，注意觀察兩液面間產(chǎn)生的顏色變化。苷和苷元的薄層色譜鑒定吸附劑硅膠G〔10～40u〕-0.4%CMC水液制板，105～110℃活化1小時(shí)展開劑氯仿-甲醇-甲酸〔15：5：1〕供試品實(shí)驗(yàn)產(chǎn)品1％蕓香苷醇溶液及1％槲皮素醇溶液對照品1％蕓香苷醇溶液及1％槲皮素醇溶液顯色劑1％FeCl3和1％K3[Fe(CN)6]水溶液，臨用時(shí)等體積混合[根本操作注意點(diǎn)]參加石灰乳既可到達(dá)堿溶解提取蕓香苷目的，又能使槐米中含有的大理粘液質(zhì)生成鈣鹽沉淀除去，但應(yīng)嚴(yán)格控制在pH8?9，不得超過10。pH過高，在加熱提取過程中可促使蕓香苷水解破壞，造成產(chǎn)率明顯下降。酸沉?xí)r加濃鹽酸調(diào)pH3～4，不宜過低，否那么會(huì)使蕓香苷生成羊鹽溶于水，也會(huì)降低收率。參加硼砂的目的是使其與蕓香苷鄰二酚羥基絡(luò)合，這樣既保護(hù)鄰二酚羥基不被氧化破壞，亦保護(hù)鄰二酚羥基不與鈣離子絡(luò)合，使蕓香苷不受損失。同時(shí)還有調(diào)節(jié)堿性水溶液pH值的作用。蕓香苷的提取還可利用蕓香苷在冷、熱水中的溶解度不同，采用沸水提取法。又據(jù)報(bào)道將生產(chǎn)工藝改良為95％乙醇回流提取后回收醇得浸膏，然后將粗浸膏除去脂溶性雜質(zhì)，常水洗凈，濾過，枯燥即得蕓香苷，可提高收率6.96％，并降低了本錢。鑒定所用硅膠G板自行制備，3g硅膠G參加7mLCMC-Na,鋪成二塊板。粗制時(shí)由于產(chǎn)生的粘液質(zhì)較多，抽濾之前不要振搖底部固體使成混懸液。抽濾所用時(shí)間較長，注意要少量分批抽濾，如果濾紙濾孔被堵住無法濾下，要及時(shí)更換濾紙。[思考題]根據(jù)蕓香苷的性質(zhì)，還可采用何種方法進(jìn)行提取？試設(shè)計(jì)槐米中提取蕓香苷的另一咱方法，并說明方法原理。本實(shí)驗(yàn)提取過程中應(yīng)注意哪些問題？試解釋蕓香苷水解過程中出現(xiàn)的混濁→澄清→混濁現(xiàn)象。怎樣正角鑒定蕓香苷？實(shí)驗(yàn)三八角茴香中揮發(fā)油的提取、別離與鑒定[目的要求]通過提取和鑒定八角茴香中的揮發(fā)油，學(xué)會(huì)利用揮發(fā)油含量測定器測定和提取藥材中押發(fā)油的操作方法。能對揮發(fā)油中的化學(xué)成分進(jìn)行薄層點(diǎn)滴性檢識(shí)及單向二次色譜檢識(shí)。[實(shí)驗(yàn)內(nèi)容]〔一〕主要成分的結(jié)構(gòu)八角茴香為木蘭科植物八角茴香Iuiciumverum枯燥成熟的果實(shí)。含揮發(fā)油約5％。主要成分是茴香腦〔anethole〕，約為揮發(fā)油的80～90％。此外，尚有少量甲基胡椒酚、茴香醛、茴香酸等。〔二〕主要成分的性質(zhì)茴香腦為白色結(jié)晶，mp.21.4℃〔三〕根本原理依據(jù)揮發(fā)油具有揮發(fā)性，能隨水蒸氣蒸餾的性質(zhì)，利用水蒸氣蒸餾法提取揮發(fā)油。本實(shí)驗(yàn)采用揮發(fā)油含量測定器提取揮發(fā)油。揮發(fā)油的組成成分復(fù)雜，常含有烷烴、烯烴、醇、醛、酮、酸等官能團(tuán)。因此可選擇適宜的檢識(shí)試劑在薄層板上進(jìn)行點(diǎn)滴試驗(yàn)，從而了解組成揮發(fā)油的成分。揮發(fā)油中各類成分的極性不相同，一般不含氧的烴類和萜類化合物極性小，在薄層板上可被石油醚較好地展開；而含氧的烴類和萜類化合物極性較大，可被石油醚與醋酸乙酯的混合溶劑較好地展開。為了使揮發(fā)油中各成分能在同一塊薄層板上進(jìn)行別離，可采用單向二次色譜法展開。〔四〕操作步驟1.提取取八角茴香25g，置揮發(fā)油含量測定器燒瓶中，加適量的水，連接揮發(fā)油測定器與回流冷凝管。自冷凝管上端加水使充滿揮發(fā)油測定器的刻度局部，并使溢流入燒瓶時(shí)為止。緩緩加熱至沸。至測定器中油量不再增加，停止加熱，放冷，分取油層計(jì)算得率。2.鑒定〔1〕油斑試驗(yàn)：取適量八角茴香油，滴于濾紙片上，常溫〔或加熱烘烤〕觀察油斑是否消失。〔2〕色譜點(diǎn)滴反響：取硅膠G薄層板1塊，用鉛筆按實(shí)驗(yàn)表畫線。被檢查揮發(fā)油用95％乙醇稀釋成5～10倍溶液，然后用毛細(xì)管分別滴加于各揮發(fā)油樣品斑點(diǎn)上，觀察顏色變化。初步推測每種揮發(fā)油中可能含有化學(xué)成分的類型。123456點(diǎn)滴試劑：1.三氯化鐵試液2.2，4-二硝基苯肼試液3.堿性高猛酸鉀試液4.香草醛-濃硫酸試液％溴酚藍(lán)乙醇溶液6.硝酸鈰銨試劑實(shí)驗(yàn)結(jié)果推測可參考天然藥物化學(xué)理論書第243-244頁表格〔3〕揮發(fā)油單向二次展開薄層色譜：取硅膠G薄層板〔自制〕一塊，在距底邊0.5cm及5cm處分別用鉛筆畫出起始線和中線。將揮發(fā)油點(diǎn)在起始線上，先在石油醚-醋酸乙酯〔85：15〕展開劑中展開至薄層板中線時(shí)取出，揮去展開劑。再放入石油醚中展開，至接近薄層板頂端時(shí)取出，揮去展開劑，用香草醛-濃硫酸顯色劑顯色，觀察斑點(diǎn)的數(shù)量、位置及顏色，推測每種揮發(fā)油中可能含有化學(xué)成分的數(shù)量。[根本操作注意點(diǎn)]1.揮發(fā)油含量測定裝置一般分為兩種。一種適用于相對密度小于1.0的揮發(fā)油測定；另一種用于測定相對密度大于1.0的揮發(fā)油。《中國藥典》規(guī)定，測定相對密度大于1.0的揮發(fā)油，也可在相對密度小于1.0的測定器中進(jìn)行，其法是在加熱前，預(yù)先參加1mL二甲苯于測定器內(nèi)，然后進(jìn)行水蒸氣蒸餾，使蒸出的相對密度大于1.0的揮發(fā)油溶于二甲苯中，由于二甲苯的相對密度為0.8969，一般能使揮發(fā)油與二甲苯的混合溶液浮于水面。計(jì)算揮發(fā)油含量時(shí)，扣除參加二甲苯的體積即可。2.提取完畢，須待油水完全分層后，再將油放出。3.進(jìn)行單向二次展開時(shí)，在第一次展開后，應(yīng)將展開劑完全押去，再進(jìn)行第二次展開，否那么將改變第二次展開劑的極性，從而影響別離效果。4.揮發(fā)油易揮發(fā)逸失，應(yīng)置于冰箱中冷藏保存。進(jìn)行層析檢識(shí)時(shí)，操作應(yīng)及時(shí)，不宜久放。5.噴灑香草醛-濃硫酸顯色劑時(shí)，應(yīng)于通風(fēng)櫥內(nèi)進(jìn)行。[思考題]用揮發(fā)油含量測定器提取揮發(fā)油應(yīng)注意什么問題？揮發(fā)油的單向二次展開時(shí)，為什么先用石油醚與醋酸乙酯的混合溶劑進(jìn)行第一次展開，再用石油醚進(jìn)行第二次展開？實(shí)驗(yàn)四茶葉中咖啡因的提取、別離與鑒定[目的要求]1.通過從茶葉中提取咖啡因，掌握一種從天然產(chǎn)物中提取純有機(jī)物的方法。2.學(xué)習(xí)使用索氏提取器的原理和方法3.學(xué)習(xí)升華的根本操作[實(shí)驗(yàn)原理]茶吐中含有多種生物堿，其中以咖啡堿即咖啡因?yàn)橹鳌？Х纫蚣s占1～5％，其結(jié)構(gòu)式為：其化學(xué)名稱為1，3，7-三甲基-2，6-二氧嘌呤，屬黃嘌呤衍生物。咖啡因是弱堿性化合物。味苦，能溶于氯仿、水、乙醇等溶劑中。咖啡因含結(jié)晶水時(shí)為白色針狀結(jié)晶，在100℃時(shí)失去結(jié)晶水，并開始升華，在120～178℃時(shí)升華迅速。純潔的咖啡因?yàn)槿埸c(diǎn)現(xiàn)在制藥工業(yè)多用合成方法來制取咖啡因。本實(shí)驗(yàn)是用索氏提取器提取，然后濃縮，升華得到咖啡因晶體。[實(shí)驗(yàn)用品]1.儀器：250mL燒杯，分液漏斗，溫度計(jì)，100mL蒸餾燒瓶，直形冷凝管，蒸發(fā)皿，抽濾裝置，錐形瓶，索氏提取器，濾紙2.試劑：干茶葉，95％乙醇，生石灰，氯酸鉀，碘試液，氨水[操作步驟]1.稱取干茶葉8g裝入濾紙筒中，輕輕壓實(shí)，放入索氏提取器中，另外在圓底燒瓶中參加100mL95％乙醇，放入一粒沸石，按圖1安裝好索氏提取裝置〔脂肪提取器〕。圖1索氏提取器1.浸提管2.通氣管3.虹吸管4.燒瓶5.冷凝管小火加熱至沸騰，連續(xù)提取1小時(shí)，此時(shí)提取液的顏色變得很淡，待提取器中的液體剛虹吸下去時(shí)，立即停止加熱。2.按圖2裝好蒸餾裝置，將萃取液倒入蒸餾瓶中蒸除乙醇。當(dāng)蒸餾瓶中液體剩約8mL時(shí)，立即停止蒸餾，將殘留液倒入蒸發(fā)皿中，參加4g生石灰〔起中和及脫水作用〕。在蒸氣浴上加熱，趕盡乙醇，然后將蒸發(fā)皿轉(zhuǎn)移至石棉網(wǎng)上焙燒，除盡水分。圖2蒸餾裝置3.在蒸發(fā)皿上蓋一張用大頭針刺有許多小孔的圓形濾紙，取一個(gè)適宜的玻璃漏斗罩在濾紙上〔圖3〕，在石棉網(wǎng)上小心加熱，逐漸升溫，盡可能使升華速度慢一些，提高結(jié)晶純度。咖啡因蒸氣通過紙孔遇到漏斗內(nèi)壁冷卻，直到冷凝為固體，附著在漏斗內(nèi)壁和濾紙上。當(dāng)濾紙上出現(xiàn)大量白色結(jié)晶時(shí)，停止加熱，揭開漏斗和濾紙，觀看咖啡因的顏色形狀，仔細(xì)用小刀將附在其上的咖啡因刮下。圖3常壓升華裝置4.鑒定〔1〕2～4mg咖啡因固體于磁皿中，加鹽酸1ml溶解，再加0.1g氯酸鉀。在通風(fēng)櫥內(nèi)，置水浴上蒸干殘?jiān)蠹影彼當(dāng)?shù)滴，殘?jiān)@紫色。〔2〕2～4mg咖啡因，參加3ml水溶解，配成樣品液。取2滴樣品液，加碘-碘化鉀試液數(shù)滴，可見棕色、紅紫色或藍(lán)紫色化合物生成。[思考題]1.試述索氏提取器萃取原理，它和一般的浸泡萃取比擬有哪些優(yōu)點(diǎn)？2.進(jìn)行升華操作時(shí)應(yīng)注意哪些問題？天然藥物化學(xué)根本操作技能一．玻璃儀器的洗滌和枯燥〔1〕玻璃儀器的洗滌是實(shí)驪室中經(jīng)常進(jìn)行的一項(xiàng)工作，玻璃儀器洗滌是否干凈，可直接影響到實(shí)驗(yàn)結(jié)果。所以洗滌玻璃儀器也是一項(xiàng)重要的實(shí)驗(yàn)技術(shù)。玻璃儀器的洗滌方法，應(yīng)根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求、儀器污染程度以及污物的性質(zhì)來選擇。常用的洗滌方法有自來水刷洗、合成洗滌劑洗、酸堿溶液洗、鉻酸洗液洗等。如果粘附物是硝酸銀，可用稀硝酸或碘-碘化鉀〔碘1g,碘化鉀2g，先混溶于適量水中，再加水至100mL〕洗滌。如果是油污，可用有機(jī)溶劑洗，再少量屢次地用乙醇脫去有機(jī)溶劑。如果是氯化銀，可用氨水洗。凡用洗液洗滌后的儀器，要用水沖洗干凈，最后用少量蒸餾水清洗2～3遍。玻璃儀器是否洗滌干凈，可在用蒸餾水清洗之前進(jìn)行檢查，即將容器盛一定量水，慢慢倒出〔不要甩〕，水均勻流出后，容器壁無掛水珠的現(xiàn)象，示已洗干凈。〔2〕儀器的枯燥：儀