貴州省劍河民族中學2024屆高三第二次聯考生物試卷注意事項:1．答題前，考生先將自己的姓名、準考證號碼填寫清楚，將條形碼準確粘貼在條形碼區域內。2．答題時請按要求用筆。3．請按照題號順序在答題卡各題目的答題區域內作答，超出答題區域書寫的答案無效；在草稿紙、試卷上答題無效。4．作圖可先使用鉛筆畫出，確定后必須用黑色字跡的簽字筆描黑。5．保持卡面清潔，不要折暴、不要弄破、弄皺，不準使用涂改液、修正帶、刮紙刀。一、選擇題：（共6小題，每小題6分，共36分。每小題只有一個選項符合題目要求）1．楓糖尿病是一種單基因遺傳病，患者氨基酸代謝異常，出現一系列神經系統損害的癥狀。下圖是某患者家系中部分成員的該基因帶譜，以下推斷不正確的是A．該病為常染色體隱性遺傳病 B．2號攜帶該致病基因C．3號為雜合子的概率是2/3 D．1和2再生患此病孩子的概率為1/42．下列關于“探究培養液中酵母菌種群數量的動態變化”實驗的操作，正確的是（）A．鏡檢計數時，不計入壓在方格角上的細胞B．在含有培養液的試管靜置之后，用滴管從試管中吸取培養液C．應在每天的同一時間從同一培養瓶中吸出等量培養液進行計數D．整個實驗期間，有4天需要用血細胞計數板對酵母菌進行計數3．下列有關細胞結構與功能的敘述，不正確的是（）A．原核細胞的DNA都是游離狀態的DNAB．大分子物質都是以胞吞或胞吐方式通過生物膜的C．細胞骨架與細胞運動、分裂、分化以及信息傳遞等生命活動有關D．細胞間進行信息交流并不都需要細胞膜上的受體蛋白參與4．艾弗里等人為了弄清轉化因子的本質，進行了一系列的實驗，如下圖是他們所做的一組實驗。有關說法正確的是（）A．比較實驗一和實驗三的結果，可說明轉化因子就是DNAB．檢測實驗結果發現，實驗二的培養皿中只存在一種菌落C．比較實驗二和實驗三的結果，可看出蛋白酶沒有催化作用D．根據三個實驗的結果，還無法確定轉化因子的本質5．下列關于遺傳與人類健康的敘述，錯誤的是（）A．單基因隱性遺傳病患者的父母不一定都攜帶致病基因B．多基因遺傳病患者后代中的發病率遠低于1/2或1/4C．羊膜腔穿刺可用于確診胎兒是否患神經管缺陷D．一個家族幾代人中都出現過的疾病是遺傳病6．幾種性染色體異常果蠅的性別、育性等如圖所示，下列有關敘述不正確的是A．正常果蠅減數第一次分裂中期的細胞中染色體組數是2B．正常果蠅減數第二次分裂后期的細胞中染色體數是8條C．白眼雌果蠅（XrXrY）產生的Xr、XrXr、XrY、Y四種配子比值為2︰1︰2︰1D．白眼雌果蠅（XrXrY）與紅眼雄果蠅（XRY）雜交，子代中紅眼雌果蠅的基因型為XRXr二、綜合題：本大題共4小題7．（9分）2019年年底在湖北武漢爆發了新冠肺炎病的流行。研究表明這是由新型冠狀病毒（2019-nCov）感染引起。該病毒為單股正鏈RNA（+RNA）病毒，主要通過飛沫傳播，通過人的口腔、呼吸道黏膜感染人體。可以用核酸試劑盒檢測。戴口罩可有效預防感染。結合所學知識回答下列問題：（1）試劑盒檢測的原理：_______________________。（至少寫2種）（2）新型冠狀病毒不是通過皮膚細胞感染，而是通過黏膜細胞感染，其原因是________________________________。（3）新型冠狀病毒侵入人體后寄生在宿主細胞中，___________能識別被寄生的寄主細胞，并與之密切接觸，使其裂解死亡；新型冠狀病毒被釋放出來，而后會被_________免疫產生的________所凝集，使之失去侵染能力，最后被吞噬細胞吞噬消化。（4）假定病毒基因組+RNA含有8000個堿基，其中A和U占堿基總數的40%。以病毒基因組+RNA為模板合成一條子代+RNA的過程共需要堿基G和C______個。（5）病毒寄生在蝙蝠體內，但不會引起蝙蝠大量死亡，這是病毒和蝙蝠兩種生物長期____________的結果。8．（10分）雜交水稻是我國對當代世界農業的巨大貢獻，在實際種植過程中體現了巨大的雜種優勢。（1）水稻的花小，為兩性花，多對基因與花粉的育性有關，雄性不育植株品系的發現，為雜交制種過程中節省了___________這一繁瑣操作，并且避免了______________，可保證雜種優勢?？蒲腥藛T在野生型A品系水稻中發現了雄性不育突變株58S，該突變株在短日照下表現為可育，長日照下表現為雄性不育。為確定突變株A不育性狀是否可以遺傳，實驗思路__________________（2）為研究突變株58S不育性狀的遺傳規律，分別用不同品系的野生型（野生型A品系和野生型B品系）水稻進行如下雜交實驗，實驗結果如下表：組別雜交組合F1表現型F2表現型及個體數甲58S（♂）X野生型A（♀）全部可育683可育，227雄性不育58S（♀）X野生型A（♂）全部可育670可育，223雄性不育乙58S（♂）X野生型B（♀）全部可育690可育，45雄性不育58S（♀）X野生型B（♂）全部可育698可育，46雄性不育甲組數據說明58S突變株是A品系雄性育性的________（填“一對”或“兩對”）基因發生_________突變引起，乙組數據說明控制58S花粉育性的等位基因的數量及關系是__________________（3）在培育水稻高產量品種探索過程中，品種的短稈化是一個里程牌，從生物體能量分配的角度看，短稈化能提高產量的原因是___________________。雜交育種的成功是歷史性的突破，野生水稻為雜交育種提供許多優良基因來源，體現生物多樣性的_______價值。9．（10分）圖示HIV病毒侵入實驗動物體內后一些生命活動過程，請回答下列問題：（1）甲圖中以RNA為模板合成RNA-DNA結合物過程需要_______酶。（2）實驗動物體抗HIV抗體是由______細胞產生的，該抗體無法徹底清除HIV病毒，HIV病毒以T淋巴細胞為主要宿主細胞，據此解釋感染較長時間后動物體內抗體水平下降的原因是_______________________________________________________________，實驗動物感染HIV病毒后惡性腫瘤發病率顯著上升，是因為感染導致機體______（免疫功能）缺失。（3）不同傳染病的病原體不同，寫出一條確認某微生物為該傳染病病原體的必要條件________，痊愈者血清能幫助重癥患者康復，起主要作用的成分是______。10．（10分）蘿卜的蛋白A具有廣泛的抗植物病菌作用，而且對人體沒有影響。我國科學家欲獲得高效表達蛋白A的轉基因大腸桿菌作為微生物農藥，做了相關研究。（1）研究者用相同的_________酶處理蛋白A基因和pET質粒，得到重組質粒，再將重組質粒置于經_________處理的大腸桿菌細胞懸液中，獲得轉基因大腸桿菌。（2）檢測發現，轉入的蛋白A基因在大腸桿菌細胞中表達效率很低，研究者推測不同生物對密碼子具有不同的偏好，因而設計了與蛋白A基因結合的兩對引物（引物B和C中都替換了一個堿基），并按圖2方式依次進行4次PCR擴增，以得到新的蛋白A基因。①這是一種定點的_________技術。②圖2所示的4次PCR應該分別如何選擇圖1中所示的引物？請填寫以下表格（若選用該引物劃“√”，若不選用該引物則劃“×”）。_____引物A引物B引物C引物DPCR1PCR2PCR3PCR4（3）研究者進一步將含有新蛋白A基因的重組質粒和_________分別導入大腸桿菌，提取培養液中的蛋白質，用_________方法檢測并比較三組受體菌蛋白A的表達產物，判斷新蛋白A基因表達效率是否提高。為檢測表達產物的生物活性，研究者將上述各組表達產物加入到長滿了植物病菌的培養基上，培養一段時間后，比較_________的大小，以確定表達產物的生物活性大小。（4）作為微生物農藥，使用時常噴灑蛋白A基因的發酵產物而不是轉蛋白A基因的大腸桿菌，其優點是_________。11．（15分）下圖為夏季晴朗的一天，生長狀況相同的油桃在露天和溫室大棚兩種種植模式下的凈光合速率（P0）變化曲線圖。請據圖分析回答下列問題：（l）c點時，油桃葉肉細胞中產生ATP的場所有____mn段，油桃體內的有機物___（填“增多”“減少”或“不變”），理由是____。（2）bc段、ef段、mn段和op段的凈光合速率均下降，從光合作用過程分析，其中下降原因相同的是_________。（3）7時～8時，ab段光合速率上升得比曲段快的原因主要為___。

參考答案一、選擇題：（共6小題，每小題6分，共36分。每小題只有一個選項符合題目要求）1、C【解題分析】

分析基因帶譜可知，4號患病，基因帶譜在下面，說明下面的基因為致病基因，則上面的帶譜說明為正常基因，1號含有兩種基因，為致病基因的攜帶者，說明該致病基因最可能位于常染色體上。5號含有兩種基因。3號只含有正常基因，為顯性純合子?！绢}目詳解】根據“無中生有為隱性”可判斷該病為隱性遺傳病，根據基因帶譜，1號和4號有相同的條帶，說明1號也含有致病基因，故該病為常染色體隱性遺傳病，A正確；根據A項分析可知該病為常染色體隱性遺傳病，4號個體的致病基因有一個來自2號，故2號一定攜帶該致病基因，B正確；根據基因帶譜可知3號沒有致病基因，故為雜合子的概率是0，C錯誤；根據A項分析，該病為常染色體隱性遺傳，所以1和2的基因型均為Aa，再生患此病孩子的概率為1/4，D正確。

?故選C。2、D【解題分析】

探究培養液中酵母菌種群數量的動態變化實驗的相關注意事項：（1）顯微鏡計數時，對于壓在小方格邊線上的酵母菌，應只計固定的相鄰兩個邊及其頂角的酵母菌；（2）從試管中吸出培養液進行計數前，需將試管輕輕振蕩幾次，目的是使培養液中的酵母菌均勻分布，減少誤差；（3）結果記錄最好用記錄表；（4）每天計數酵母菌量的時間要固定；（5）培養和記錄過程要尊重事實，不能主觀臆造?！绢}目詳解】A、鏡檢計數時，壓在方格邊上的酵母菌，需要計數相鄰兩邊及其頂角的個體數，否則會產生誤差，A錯誤；B、吸取培養液計數前要將試管輕輕振蕩幾次，目的是使培養液中的酵母菌均勻分布，減少誤差，B錯誤；C、應在每天同一時間從同一培養瓶去培養液計數，不要求等量，C錯誤；D、實驗期間的第一、二、四、七天需用血細胞計數板對酵母菌進行計數，D正確。故選D?！绢}目點撥】本題考查探究培養液中酵母菌種群數量的動態變化，對于此類試題，需要考生注意的細節較多，如實驗的原理、實驗采用的方法、實驗步驟、實驗結果等，需要考生在平時的學習過程中注意積累。3、B【解題分析】

1、細胞骨架是真核細胞中由蛋白質聚合而成的三維的纖維狀網架體系。細胞骨架包括微絲、微管和中間纖維。細胞骨架在細胞分裂、細胞生長、細胞物質運輸、細胞壁合成等等許多生命活動中都具有非常重要的作用。2、核孔是蛋白質、RNA等大分子運輸的通道。3、細胞膜上的受體是絕大多數信息交流需要的結構，但胞間連絲不需要。【題目詳解】A、原核細胞的DNA沒有和蛋白質結合形成染色質，處于游離狀態，A正確；B、大分子物質可以通過核孔進出核膜，B錯誤；C、細胞骨架與細胞運動、分裂、分化以及信息傳遞等生命活動有關，C正確；D、細胞膜上的受體是絕大多數信息交流需要的結構，但胞間連絲不需要，D正確。故選B。4、B【解題分析】

肺炎雙球菌轉化實驗包括格里菲斯的體內轉化實驗和艾弗里體外轉化實驗，其中，格里菲斯體內轉化實驗證明，S型細菌體內存在著某種轉化因子能將R型細菌轉化成S型細菌，肺炎雙球菌體外轉化實驗能證明DNA是遺傳物質?！绢}目詳解】A、實驗一和實驗三中加入的RNA酶和蛋白酶都不能將S型菌的DNA分解，此時在兩個培養皿中R型菌可實現轉化，由于實驗缺乏對照，故不能說明轉化因子就是DNA，A錯誤；B、實驗二的培養皿中由于加入了DNA酶，在DNA酶的作用下，S型菌的DNA被分解了，R型菌不能實現轉化，故培養基上只存在一種菌落，B正確；C、比較實驗二和實驗三的結果，只能說明蛋白酶不能催化DNA的水解，但不能說明蛋白酶沒有催化作用，C錯誤；D、根據三個實驗的結果，能確定轉化因子的本質是DNA，D錯誤。故選B。5、D【解題分析】

1、人類遺傳病分為單基因遺傳病、多基因遺傳病和染色體異常遺傳病：（1）單基因遺傳病包括常染色體顯性遺傳?。ㄈ绮⒅福?、常染色體隱性遺傳?。ㄈ绨谆。閄染色體隱性遺傳?。ㄈ缪巡?、色盲）、伴X染色體顯性遺傳病（如抗維生素D佝僂病）；（2）多基因遺傳病是由多對等位基因異常引起的，如青少年型糖尿病；（3）染色體異常遺傳病包括染色體結構異常遺傳病（如貓叫綜合征）和染色體數目異常遺傳?。ㄈ?1三體綜合征）。2、遺傳病的監測和預防：（1）禁止近親結婚。（2）適齡生育。（3）產前診斷：胎兒出生前，醫生用專門的檢測手段確定胎兒是否患某種遺傳病或先天性疾病，產前診斷可以大大降低病兒的出生率。（4）遺傳咨詢：在一定的程度上能夠有效的預防遺傳病的產生和發展?！绢}目詳解】A、單基因隱性遺傳病患者的父母不一定都攜帶致病基因，如伴X染色體隱性遺傳病，只要母親攜帶致病基因，兒子就可能患病，父親可以不攜帶致病基因，A正確；B、多基因遺傳病，在群體中發病率較高，但由于該遺傳病是由多對等位基因控制，因此在患者后代中的發病率遠低于1/2或1/4，B正確；C、羊膜腔穿刺技術屬于產前診斷技術之一，可用于檢測胎兒是否患神經管缺陷等疾病，C正確；D、一個家族幾代人中都出現過的疾病也可能不是遺傳病，而是傳染病或者是由于共同的飲食、環境問題引起的疾病，D錯誤。故選D。【題目點撥】本題考查常見的人類遺傳病，要求考生識記幾種常見人類遺傳病的類型及特點，能結合所學的知識準確判斷各選項。6、D【解題分析】

果蠅是二倍體，含有2個染色體組，每個染色體組是4條染色體，共8條染色體，其中1對性染色體、3對常染色體；減數第一次分裂過程中，同源染色體聯會形成四分體，同源染色體分離、非同源染色體發生自由組合，減數第二次分裂過程中，著絲點分裂，姐妹染色單體分開。【題目詳解】A、正常果蠅為二倍體，減數第一次分裂過程中雖然同源染色體已復制，但姐妹染色單體共用著絲點，染色體數未改變，所以后期仍為2個染色體組，A正確；B、在減數第二次分裂后期，著絲點分裂，細胞中染色體數有8條，B正確；C、白眼雌果蠅（XrXrY）產生配子的過程中，由于性染色體為三條，其中任意兩條配對正常分離，而另一條隨機移向一極，產生含兩條或一條性染色體的配子，可以是Xr或者Y單獨移向一極，形成的配子種類及比例為Xr∶XrY∶XrXr∶Y=2∶2∶1∶1，C正確；D、白眼雌果蠅（XrXrY）與紅眼雄果蠅（XRY）雜交，子代中紅眼雌果蠅的基因型為XRXr、XRXrY，D錯誤。故選D。二、綜合題：本大題共4小題7、RNA的特異性、堿基互補配對原則、熒光標記法只有黏膜細胞膜表面才有與新型冠狀病毒特異性結合的受體效應T細胞體液抗體9600共同進化【解題分析】

1.2019新型冠狀病毒具有生物的特征，因此是生物，它沒有細胞結構，包括蛋白質外殼和遺傳物質內核兩部分，病毒只能寄生在活細胞里，因此它的生活方式是寄生；預防2019新型冠狀病毒感染肺炎的具體做法有：開窗通風，保持室內空氣的流通；咳嗽和打噴嚏時使用紙巾或屈肘遮掩口鼻，防止飛沫傳播等。2.不同物種之間，生物與無機環境之間，在相互影響中不斷進化和發展，最終形成了生機勃勃的生物圈，這就是共同進化。【題目詳解】（1）診斷新冠患者所用試劑盒是根據RNA的特異性、堿基互補配對原則或熒光標記法等能夠顯示病毒特異性的原理進行檢測的。（2）因為只有黏膜細胞膜表面有與新型冠狀病毒特異性結合的受體，而皮膚細胞表面沒有與新型冠狀病毒發生特異性結合的受體，所以新冠病毒不是通過皮膚細胞感染，而是通過黏膜細胞感染。（3）新型冠狀病毒侵入人體后寄生在宿主細胞中，由于新冠病毒的侵染而使細胞免疫過程產生了效應T細胞，效應T細胞能識別并與相應的靶細胞（被新冠病毒感染的細胞）密切接觸，使其裂解死亡；新型冠狀病毒被釋放出來，而后會被體液免疫過程產生的相應抗體所凝集，使之失去侵染能力，最后被吞噬細胞吞噬消化。（4）以病毒基因組+RNA為模板合成一條子代+RNA的過程實際上是要復制兩條RNA單鏈（包含正、負個一條鏈），而且這兩條單鏈之間是互補的，根據有互補關系的單鏈中互補堿基之和恒等的原理分析如下：假定病毒基因組+RNA含有8000個堿基，其中A和U占堿基總數的40%。則G和C占堿基總數為8000×（1-40%）=4800，故此以病毒基因組+RNA為模板合成一條子代+RNA的過程共需要堿基G和C的數量為4800×2=9600個。（5）病毒寄生在蝙蝠體內，但不會引起蝙蝠大量死亡，這是病毒和蝙蝠之間經過長期相互選擇而實現了兩種生物的共同進化，即二者關系的形成是共同進化的結果?！绢}目點撥】熟知病毒的生理特性是解答本題的關鍵！掌握RNA的復制過程以及具有從DNA到RNA的相關堿基計算的遷移能力是解答本題的另一關鍵！8、去雄蕊自花受粉應在短日照條件下進行自交實驗，觀察子代是否出現雄性不育個體一對隱性兩對基因分別位于兩對同源染色體上，隱性純合子雄性不育植株光合固定的能量更多分配到人類需要的果實和種子的部分直接【解題分析】

選取兩性花植株做雜交實驗時，要對母本作去雄、套袋處理。分析表格數據：甲組雜交實驗中，無論正交或反交，F1均表現為可育，F2均出現可育：雄性不育=3：1的性狀分離比，說明F1為一對基因雜合，58S突變株控制雄性不育的基因為隱性基因。乙組雜交實驗中，無論正交或反交，F1均表現為可育，F2出現可育：雄性不育=15：1的分離比，說明F1中有兩對基因雜合，即58S突變株控制花粉育性的隱性基因有兩對。【題目詳解】（1）水稻的花小，為兩性花，多對基因與花粉的育性有關，雄性不育植株品系的發現，為雜交制種過程中節省了去雄蕊這一繁瑣操作，并且避免了自花受粉，可保證雜種優勢。野生型A品系水稻中發現了雄性不育突變株58S，該突變株在短日照下表現為可育，長日照下表現為雄性不育。為確定突變株A不育性狀是否可以遺傳，應在短日照條件下進行自交實驗，觀察子代是否出現雄性不育個體。（2）根據分析甲組數據，說明58S突變株是A品系雄性育性的一對基因發生隱性突變引起，乙組數據說明控制58S花粉育性的等位基因為兩對，且兩對基因分別位于兩對同源染色體上，隱性純合子雄性不育。（3）在培育水稻高產量品種探索過程中，品種的短稈化是一個里程牌，從生物體能量分配的角度看，短稈化能提高產量的原因是植株光合固定的能量更多分配到人類需要的果實和種子的部分。雜交育種的成功是歷史性的突破，野生水稻為雜交育種提供許多優良基因來源，體現生物多樣性的直接價值?！绢}目點撥】解答本題關鍵是：1.對題干信息的提取“水稻為兩性花，多對基因與花粉的育性有關”，由此判斷花粉育性的性狀受多對基因控制。2.對表格數據的分析：甲組的F2出現顯性：隱性=3：1的分離比，說明甲組F1中有一對基因雜合；乙組F2出現顯性：隱性=15：1的分離比，說明乙組F1中有兩對基因雜合，且兩對基因遵循基因自由組合定律。9、逆轉錄酶漿T細胞被感染死亡后，特異免疫過程中抗原傳遞、淋巴因子合成和分泌等功能都都不能正常進行，導致相應的漿細胞數量減少監控和清除功能這種微生物必須能夠在患病動物組織內找到，而未患病的動物體內則找不到（從患病動物體內分離的這種微生物能夠在體外被純化和培養；經培養的微生物被轉移至健康動物后，動物將表現出感染的征象；受感染的健康動物體內又能分離出這種微生物）相應的抗體【解題分析】

分析題干和題圖甲，HIV是一種逆轉錄病毒，其遺傳信息的傳遞過程包括RNA→DNA的逆轉錄過程以及DNA復制、轉錄和翻譯過程，經逆轉錄形成的病毒DNA要整合到動物細胞染色體DNA上，然后利用寄主細胞的原料和場所，合成子代DNA和蛋白質。乙圖中隨著感染時間的延長，機體內抗HIV抗體的水平先增加后減少，說明感染HIV初期，動物是可通過特異性免疫消滅部分抗原的?！绢}目詳解】（1）甲圖中以RNA為模板合成RNA-DNA結合物過程屬于逆轉錄，需要逆轉錄酶。（2）抗HIV抗體是由動物的漿細胞產生。HIV病毒以T淋巴細胞為主要宿主細胞，T細胞被感染死亡后，特異免疫過程中抗原傳遞、淋巴因子合成和分泌等功能都不能正常進行，導致相應的漿細胞數量減少，故感染較長時間后動物體內抗體水平下降。并且由于免疫系統受損，其監控和清除功能缺失，實驗動物惡性腫瘤發病率顯著上升。（3）不同傳染病的病原體不同，確認某微生物為該傳染病病原體的必要條件是：這種微生物必須能夠在患病動物組織內找到，而未患病的動物體內則找不到；或從患病動物體內分離的這種微生物能夠在體外被純化和培養；或經培養的微生物被轉移至健康動物后，動物將表現出感染的征象，受感染的健康動物體內又能分離出這種微生物。痊愈者血清中有相應的抗體，能幫助重癥患者康復?！绢}目點撥】解答本題需掌握幾點：1.艾滋病的發病機理及HIV的增殖過程；2.在HIV侵入機體的初期，機體可以通過體液免疫阻止病毒隨血液在人體內的擴散，之后隨著病毒對T淋巴細胞的破壞，T淋巴細胞大量死亡，HIV增多，最終導致機體喪失一切免疫功能。10、限制酶和DNA連接CaCl2基因突變引物A引物B引物C引物DPCR1√√××PCR2××√√PCR3××××PCR4√××√含有蛋白A基因的重組質粒、空質粒（pET質粒）抗原-抗體雜交抑菌圈對人、畜、農作物和自然環境安全；不會造成基因污染；有效成分純度較高【解題分析】

（一）基因工程的基本工具1、“分子手術刀”——限制性核酸內切酶（限制酶）（1）來源：主要是從原核生物中分離純化出來的。（2）功能：能夠識別雙鏈DNA分子的某種特定的核苷酸序列，并且使每一條鏈中特定部位的兩個核苷酸之間的磷酸二酯鍵斷開，因此具有專一性。（3）結果：經限制酶切割產生的DNA片段末端通常有兩種形式：黏性末端和平末端。2、“分子縫合針”——DNA連接酶（1）兩種DNA連接酶（E?coliDNA連接酶和T4DNA連接酶）的比較：①相同點：都縫合磷酸二酯鍵。②區別：E?coliDNA連接酶來源于大腸桿菌，只能將雙鏈DNA片段互補的黏性末端之間的磷酸二酯鍵連接起來；而T4DNA連接酶來源于T4噬菌體，可用于連接粘性末端和平末端，但連接效率較低。（2）與DNA聚合酶作用的異同：DNA聚合酶只能將單個核苷酸加到已有的核苷酸片段的末端，形成磷酸二酯鍵．DNA連接酶是連接兩個DNA片段的末端，形成磷酸二酯鍵。3、“分子運輸車”——載體（1）載體具備的條件：①能在受體細胞中復制并穩定保存。②具有一至多個限制酶切點，供外源DNA片段插入。③具有標記基因，供重組DNA的鑒定和選擇。（2）最常用的載體是質粒，它是一種裸露的、結構簡單的、獨立于細菌擬核DNA之外，并具有自我復制能力的雙鏈環狀DNA分子。（3）其它載體：噬菌體的衍生物、動植物病毒。（二）基因工程的基本操作程序第一步：目的基因的獲取1、目的基因是指：編碼蛋白質的結構基因。2、原核基因采取直接分離獲得，真核基因是人工合成．人工合成目的基因的常用方法有反轉錄法和化學合成法。3、PCR技術擴增目的基因（1）原理：DNA雙鏈復制（2）過程：第一步：加熱至90～95℃DNA解鏈；第二步：冷卻到55～60℃，引物結合到互補DNA鏈；第三步：加熱至70～75℃，熱穩定DNA聚合酶從引物起始互補鏈的合成。第二步：基因表達載體的構建1、目的：使目的基因在受體細胞中穩定存在，并且可以遺傳至下一代，使目的基因能夠表達和發揮作用。2、組成：目的基因+啟動子+終止子+標記基因（1）啟動子：是一段有特殊結構的DNA片段，位于基因的首端，是RNA聚合酶識別和結合的部位，能驅動基因轉錄出mRNA，最終獲得所需的蛋白質。（2）終止子：也是一段有特殊結構的DNA片段，位于基因的尾端。（3）標記基因的作用：是為了鑒定受體細胞中是否含有目的基因，從而將含有目的基因的細胞篩選出來．常用的標記基因是抗生素抗性基因。第三步：將目的基因導入受體細胞1、轉化的概念：是目的基因進入受體細胞內，并且在受體細胞內維持穩定和表達的過程。2、常用的轉化方法：將目的基因導入植物細胞：采用最多的方法是農桿菌轉化法，其次還有基因槍法和花粉管通道法等。將目的基因導入動物細胞：最常用的方法是顯微注射技術．此方法的受體細胞多是受精卵。將目的基因導入微生物細胞：原核生物作為受體細胞的原因是繁殖快、多為單細胞、遺傳物質相對較少，最常用的原核細胞是大腸桿菌，其轉化方法是：先用Ca2+處理細胞，使其成為感受態細胞，再將重組表達載體DNA分子溶于緩沖液中與感受態細胞混合，在一定的溫度下促進感受態細胞吸收DNA分子，完成轉化過程。3、重組細胞導入受體細胞后，篩選含有基因表達載體受體細胞的依據是標記基因是否表達。第四步：目的基因的檢測和表達1、首先要檢測轉基因生物的染色體DNA上是否插入了目的基因，方法是采用DNA分子雜交技術。2、其次還要檢測目的基因是否轉錄出了mRNA，方法是采用用標記的目的基因作探針與mRNA雜交。3、最后檢測目的基因是否翻譯成蛋白質，方法是從轉基因生物中提取蛋白質，用相應的抗體進行抗原——抗體雜交。4、有時還需進行個體生物學水平的鑒定，如轉基因抗蟲植物是否出現抗蟲性狀?！绢}目詳解】（1）在基因工程中，利用相同的限制酶和DNA連接酶處理蛋白A基因和pET質粒，得到重組質粒；大腸桿菌作為受體細胞，需要用氯化鈣處理，以便重組質粒的導入。（2）①根據題意和圖示分析，經過4次PCR技術后獲得了新的基因，這是一種定點的基因突變技術。②與研究者推測不同生物對密碼子具有不同的偏好，因而設計了與蛋白A基因結合的兩對引物（引物B和C中都替換了一個堿