11.020CCS

C

5013 DB

13/T

5861—2023疾病預防控制機構病原微生物核酸檢測質量管理技術規范 河北省市場監督管理局 發

布DB

13/T

5861—2023 本文件按照GB/T

1.1—《標準化工作導則 第1定起草。本文件的某些內容可能涉及專利。本文件的發布機構不承擔識別專利的責任。本文件由河北省衛生健康委員會提出。本文件由河北省衛生健康標準化技術委員會（

25）歸口。本文件起草單位：河北省疾病預防控制中心、石家莊市疾病預防控制中心。黃衛華、陳建、李國風。DB

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5861—20231范圍本文件規定了疾病預防控制機構病原微生物核酸檢測質量管理的基本要求、質量保證、污染控制等內容。本文件適用于疾病預防控制機構病原微生物核酸檢測質量管理。2規范性引用文件下列文件中的內容通過文中的規范性引用而構成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用適用于本文件。GB

19489-2008 實驗室生物安全通用要求JJF

1874-2020()核酸提取儀校準規范JJG

移液器RB/T

檢驗檢測機構資質認定能力評價

檢驗檢測機構通用要求TSG

固定式壓力容器WS

病原微生物實驗室生物安全通用準則YY

0569-2011 II

級生物安全柜YY/T

1173-2010 聚合酶鏈反應分析儀分子診斷檢驗程序性能驗證指南3 術語和定義GB

19489-2008、JJF

1874-2020、JJG

646-2006、

214-2017、

233-2017、消毒技術規范界定的及下列術語和定義適用于本文件。實時熒光定量儀

quantitative

real-time polymerase

chain

reaction

analyzer基于聚合酶鏈式反應原理，通過溫度變化循環程序進行靶互酸片段的體外擴增，同時對循環過程中熒光信號進行實施采集和處理，定量或定性分析靶核酸片段的儀器。產物分析

判斷檢測到的熒光強度是否能證實實驗樣本包含目標病原體遺傳物質的實驗活動。質量保證

為滿足核酸檢測質量要求提供充分可信性所必要的有計劃的系統的措施。4基本要求實驗室設置4.1.1 疾病預防控制機構核酸檢測實驗室，應獨立設置，配備高壓滅菌區。4.1.2 生物安全應符合

GB

19489-2008

2）或

WS

中加強型

BSL-2

實驗室要求，并備案。4.1.3區。各區域在物理空間上應是完全相互獨立的，無論是在空間上還是在使用中，應始終處于完全分DB

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5861—2023隔狀態，不得有空氣的直接相通。使用實時熒光定量

儀時，擴增區和擴增產物分析區可合并。采用樣本處理、核酸提取及擴增檢測為一體的自動化分析儀，則標本制備區、擴增區、擴增產物分析區可合并。4.1.4 負壓工作區，氣壓由走廊向緩沖間、核心工作間方向遞減，形成定向氣流趨勢；各區之間氣壓應由各區換氣次數應不少于

次/小時。設施設備4.2.1 基本配置4.2.1.1

試劑儲存和準備區應配備：a)

2℃～8℃和-20℃冰箱；b)

超凈工作臺或生物安全柜；c)

微量加樣器；d)

可移動紫外燈；e)

離心機；f)

混勻器；g)

耗材：一次性手套、加樣器吸頭、銳器盒、

管（八聯管）、

h)

專用工作服和工作鞋（套）；i)

專用數據記錄與傳輸設備。4.2.1.2

樣本制備區應配備：a)

2℃～8℃冰箱、-20℃或℃冰箱；b)

離心機；c)

混勻器；d)

水浴箱或加熱模塊；e)

核酸提取儀；f)

微量加樣器；g)

可移動紫外燈；h)

II

型生物安全柜；i)

耗材：一次性手套、加樣器吸頭（帶濾芯）、銳器盒；j)

專用個人防護裝備（依操作的病原微生物分類確定）；k)

專用數據記錄與傳輸設備。4.2.1.3

擴增區應配備：a)

熒光定量

b)

可移動紫外燈；c)

專用工作服和工作鞋（套）；d)

專用數據記錄與傳輸設備。4.2.1.4

擴增產物分析區應配備：a)

微量加樣器；b)

可移動紫外燈；c)

消耗品：一次性手套、加樣器吸頭（帶濾芯）；d)

專用工作服和工作鞋（套）；e)

專用數據記錄與傳輸設備。4.2.2 試劑與耗材使用部門根據核酸檢測需求，提出申購計劃，對試劑的關鍵性能參數如精密度、符合率和檢出限等進行性能驗證，驗證方法可參照CNAS-GL039《分子診斷檢驗程序性能驗證指南》。DB

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5861—2023試劑儲存應按照試劑盒存儲要求進行，超出有效期的試劑與耗材應與有效期內的試劑耗材分開暫存。暫存期限不應超過本單位與醫療廢物處置機構簽訂的處理周期并分別按照化學性和感染性醫廢處置。4.2.3 質控品檢測過程中需使用試劑盒自帶的質控品和可溯源至有證標準物質的第三方質控品。使用需遵守以下原則：a)

嚴格按質控品說明書操作；b)

凍干質控品的復溶要確保所用溶劑的質量；c)

凍干質控品復溶時所加的量要準確，并盡量保持每次加入量的一致；d)

凍干質控品復溶時應輕輕搖勻，使內溶物完全溶解，切忌劇烈震搖；e)

質控品應嚴格按使用說明書規定的方法保存，不使用超過保質期的質控品；f)

質控品要在與樣本同樣測定條件下進行測定。4.2.4 設備檢定/校準核酸檢測涉及的檢測設備應開展周期檢定，校準周期由實驗室根據設備的實際使用情況，選擇具有或CNAS資質的檢測校準機構，按以下標準進行：a)

核酸提取儀，

；b)

實時熒光定量

1173-2010；c)

移液器，

646-2006；d)

生物安全柜，YY

；e)

高壓蒸汽滅菌器，

。校準周期由實驗室根據設備使用情況確定。也可參考校準證書建議的有效時長，并在使用前對校準結果進行確認。4.2.5 期間核查實時熒光定量照期間核查規程進行核查，并保留記錄。應考慮以下因素：a)

檢測/校準方法要求；b)

實時熒光定量

儀穩定性；c)

校準周期；d)

歷次校準結果和變化趨勢；e)

設備維護保養情況。人員4.3.1 實驗室負責人核酸檢測實驗室應指定專職或兼職負責人，應具有中級以上專業技術職稱或同等能力。實驗室負責人全面負責技術運作和人員管理，并指定負責人的代理人。4.3.2 檢測人員4.3.2.1 培訓，并通過理論考核。上崗前應由實驗室負責人進行能力確認，并由熟悉檢測目的、程序、方法和結果評價的人員，對檢測人員進行監督。4.3.2.2 檢測人員健康和培訓管理應符合

WS

233-2017

要求。4.3.3 特種作業人員從事壓力容器的操作人員應按照國家有關規定經特種設備安全監督管理部門培訓，取得國家特種作業人員證書，方可從事相應的作業。DB

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5861—20234.3.4 檔案管理員實驗室應設立專職或兼職檔案管理員，檔案管理員職責應符合WS

233-2017要求。樣本檢測人員應根據樣本特點，對樣本的接收、流轉、保管、處理及樣本的識別等各個環節制定管理和控制程序。檢測樣本包含但不限于：a)

上呼吸道樣本，包括鼻咽拭子、咽拭子等；b)

下呼吸道樣本，深咳痰液、肺泡灌洗液、支氣管灌洗液、呼吸道吸取物等；c)

便樣本/肛拭子，如果不便于留取便樣本，可采集肛拭子；d)

血清樣本，應使用無抗凝劑的真空釆血管；e)

f)

環境樣本，按目標病原微生物相關防控方案采集；g)

食品；h)

水。24-80℃或以下保存（如無-80℃保存條件，則于-20℃冰箱暫存）。應設立專庫或專柜單獨保存樣本。5 質量保證標準操作程序SOP應依據SOP驗室應建立可疑樣本復檢的流程。樣本處理5.2.1種類樣本（如全血、血漿、血清、皰疹液、腦脊液、痰、灌洗液、皰疹液、尿、便等）和不同病原時間、存取次數等）、銷毀等的規定。樣本處理過程應按照核酸檢測試劑盒說明書要求進行。5.2.2 樣本處理。核酸提取選擇磁珠法、膜吸附法等進行核酸提取，可根據核酸提取試劑及擴增體系的要求選擇配套的樣核酸提取完成后立即封蓋。聚合酶鏈反應在生物安全柜內取核酸加至PCR

劑盒說明書設置擴增程序，啟動擴增程序。產物分析符合弱陽性質控品能夠被檢出，陰性樣本對照、水、反應液對照陰性，陽性對照陽性，陰性對照陰性要求的判定為本次核酸檢測過程合格，結果判斷如下：a)

無

Ct

值、無

S

形擴增曲線，可報告陰性；b)

Ct

S

形擴增曲線，可報告為陽性；c)

Ct

值位于灰區，建議重復實驗，若重做

Ct

值仍處于灰區，但出現明顯的

S

形擴增曲線，該樣本判斷為陽性，否則為陰性。結果報告DB

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5861—2023檢測機構應按照RB/T

214-2017要求出具檢測報告，有CMA資質可加蓋CMA章，無CMA資質可加蓋檢驗檢測章或單位公章。室內質控11.5～3倍），1～3份陰性對照，分別是陰性樣本對照（可采用本實驗室證實為陰性的標本）、水與反應液對照和僅反應液對照。陰性對照和陽性對照隨機放入檢測樣本中，參與擴增的全過程。外部質控實施糾正，保持實驗室檢測能力滿足檢測任務要求。6 污染控制實驗環境75%去除～2000mg/L的含氯消毒劑擦拭或噴灑消毒，然后用拖布蘸清水擦拭殘余消毒劑，加強通風。實驗設備實驗結束后，生物安全柜應以含有有效氯1000mg/L含氯消毒劑擦拭消毒作用分鐘，然后，用濕巾擦拭殘余消毒劑?；蛴?5%酒精（75%酒精濕巾）擦拭消毒，繼續通風10分鐘后，開啟紫外線消毒30DNA用75%酒精噴灑并用紙巾擦拭干凈。醫療廢物6.3.1處置原則醫療廢物的處置應按照《醫療廢物管理條例》和《醫療衛生機構醫療廢物管理辦法》的要求。6.3.2 醫療廢物收集核酸檢測實驗室應按以下要求收集檢測過程中產生的醫療廢物：a)

工作液配制過程產生的醫療廢物應規范使用雙層黃色醫療廢物收集袋封裝，轉移至高壓滅菌區。b)

1000mg/L～2000mg/L

的含氯消毒劑噴灑表面轉移至高壓滅菌區。c)

擴增完成后，反應管不可開蓋，應規范使用雙層黃色醫療廢物收集袋封裝，轉移至高壓滅菌區。6.3.3 醫療廢物高壓處置核酸檢測實驗室收集的醫療廢物經高壓蒸汽滅菌器℃

30分鐘高壓后，按類別黏貼標識，注明核酸檢測實驗室，醫廢種類、數量等，轉移至醫療廢物臨時集中存放處。6.3.4 交接核酸檢測實驗室應與臨時集中存放處管理部門進行醫療廢物交接，填寫《實驗室廢物交接登記表》，一式兩份，雙方各存一份。6.3.5 轉運臨時集中存放處管理部門與取得資質的醫廢無害化處置單位簽訂醫廢處置合同，定期轉運。個人防護DB

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5861—2023實驗室應配備二級以上個人防護用品。實驗室對個人防護用品的選擇、使用、維護應有明確的程序和使用指導，可根據病原微生物危害等級分類，采取相應防護措施。檢測人員需充分了解其實驗工作的性質和特點，接受防護裝備的使用培訓，并正確使用個體防護裝備。有特殊規定的按其要求執行。實驗操作實驗操作應符合GB

B和附錄C人安全、破壞樣本以及不必要的操作。清潔用具清潔消毒順序依次為試劑儲