宮頸上皮內瘤變及宮頸癌相關分子機制的探討

在女性癌癥的死因中，乳腺癌排名第二。在發達國家，它是女性最常見的腫瘤，占女性所有腫瘤的25%。目前研究表明,宮頸癌的發生與人乳頭狀瘤病毒(Humanpapillomavirus,HPV)感染密切相關,是宮頸癌及癌前病變的必要條件。現在對宮頸病變沒有特異性指標,因此,需要尋找其他分子生物學標志物(如P16INK4A、Ki-67)來監測宮頸病變,以達到對宮頸癌的早期預防和治療。筆者探討P16INK4A、Ki-67在宮頸不同病變組織中的表達和HPV16/18的感染情況及其與宮頸病變的關系。1材料和方法1.1頸組織不同組織和因子組全后活檢內容不同選擇華北煤炭醫學院和開灤醫院病理科宮頸組織存檔蠟塊94例,其中包括慢性宮頸炎20例、CINⅠ13例、CINⅡ17例、CINⅢ20例和宮頸癌24例。1.2抗人單克隆抗體P16INK4A鼠抗人單克隆抗體和Ki-67兔抗人單克隆抗體均購自福州邁新生物技術有限公司。HPV16/18型DNA序列由上海生工合成,DNA提取試劑盒及PCR反應試劑盒均購自上海生工。1.3pcr檢測pv6if-97、ki-97的表達宮頸石蠟標本連續切片,厚4μm,分別行免疫組化法檢測P16INK4A、Ki-67的表達,應用PCR技術檢測HPV16/18型DNA。嚴格按照說明書操作。1.4黃配套病細胞檢測P16INK4A陽性結果為宮頸異常鱗狀上皮細胞核和/或細胞漿出現棕黃色顆粒,Ki-67陽性為細胞核出現黃褐色顆粒。光鏡下每張切片觀察5個有代表性視野,計數200個細胞中的陽性細胞數,取平均值,無陽性細胞或陽性細胞百分率<5%為陰性(-)、陽性細胞百分率<25%為弱陽性(+)、陽性細胞百分率26%~50%為陽性(++)、陽性細胞百分率>50%為強陽性(+++)。1.5統計方法采用χ2檢驗或Fisher確切概率法,相關性Spearman等級相關分析,檢驗水準為α=0.05。2結果2.1組患者有統計學意義的比較表1在慢性宮頸炎組、CINⅠ組、CINⅡ組、CINⅢ組和宮頸癌組,P16INK4A陽性表達率分別為0.0%(0/20)、53.8%(7/13)、76.5%(13/17)、95.0%(19/20)、100.0%(24/24)。CINⅢ組及宮頸癌組和其他各組比較,差異有統計學意義(P<0.05)。P16INK4A蛋白表達強度與病變級別呈正相關,r=0.862,P<0.01。見表1。2.2%0/20、97.2%、97.2%/33.2%是表達利益/對比,5/32.2/32.2%是表達社會/對異質性分布的調節,2.在慢性宮頸炎組、CINⅠ組、CINⅡ組、CINⅢ組及宮頸癌組中,Ki-67陽性表達率分別為0.0%(0/20)、69.2%(9/13)、88.2%(15/17)、95.0%(19/20)、91.7%(22/24)。CIN組及宮頸癌組與慢性炎癥組比較,差異均具有統計學意義(P<0.05),Ki-67表達強度與宮頸病變級別呈正相關,r=0.771,P<0.01。見表2。2.3強調患者的感染率HPV16/18型在慢性宮頸炎組、CINⅠ組、CINⅡ組、CINⅢ組和宮頸癌組中的感染率分別為10.0%、30.8%、52.9%、50.0%、66.7%,差異有統計學意義(P<0.05)。宮頸癌組與CINⅠ組、慢性宮頸炎組比較,差異均有統計學意義(P<0.05)。2.4預測的表達強度與hp18/18型感染的相關性在94例宮頸不同病變組織中,經Spearman等級相關分析,P16INK4A表達強度與HPV16/18型感染呈正相關,相關系數r=0.583,P<0.05,Ki-67的表達強度與HPV16/18型感染呈正相關,相關系數r=0.431,P<0.05。3妊娠新發病例及發病年齡情況宮頸癌是婦女最常見的惡性腫瘤之一,據世界范圍內統計,每年新發病例中有80%來自發展中國家。我國每年新發病例約13.15萬,占世界每年宮頸癌新發病例總數的28.8%,且近年來呈現地區增長及發病年齡提前的現象。宮頸癌的發生、發展是從正常宮頸→CIN→宮頸癌逐漸演化的過程,是多因素共同作用的結果,除HPV感染外,宿主癌基因激活和抑癌基因失活,某些細胞因子、生長因子及其受體也參與了宮頸癌的形成和發展。3.1/18在因變量表1.研究證實持續性HPV感染是發生宮頸病變的必要條件。本實驗應用PCR法檢測HPV16/18在宮頸不同病變組織中的感染情況,在慢性宮頸炎組、CINⅠ組、CINⅡ組、CINⅢ組和宮頸癌組中的感染率分別為10.0%、30.8%、52.9%、50.0%、66.7%。隨宮頸病變程度的加重,HPV16/18型感染率逐漸增加。3.2s1a在陰完善病患者中的表達P16INK4A基因是20世紀90年代初在人染色體9p21發現的第一個直接參與細胞周期調控的抑癌基因。在正常細胞中,P16基因則可特異地與CDK4或cyclin-CDK4復合物結合,抑制CDK4的活性,從而抑制細胞由G1期進入S期,對細胞增殖周期起負調節作用。但研究發現P16INK4A在大多數宮頸癌及癌前病變中呈高表達。本實驗應用免疫組化法檢測P16INK4A在94例不同程度宮頸病變組織中的表達情況,發現在慢性宮頸炎組中無陽性表達病例,而在CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ和宮頸癌組中,P16INK4A陽性表達率分別為53.8%、76.5%、95.0%和100.0%,CINⅢ和宮頸癌組陽性率明顯高于其他各組,這與國外學者的研究結果一致。經相關性分析,隨著宮頸病變程度的加重,P16INK4A的陽性表達強度逐漸增強,且表達強度與宮頸病變程度呈正相關(r=0.862),與文獻的研究結果一致。可能是由于HR-HPV感染的宮頸癌組織中由于HR-HPVE7蛋白結合pRb,使其功能失活,解除了pRb對P16INK4A蛋白表達的負反饋抑制,引起P16INK4A過表達。3.3ki-97在因子上的表達情況Ki-67是由Gerdes等首先發現的一種與細胞周期相關的增殖細胞核抗原,屬于非組蛋白抗原。其編碼基因位于第10號染色體,其有兩種變異體,基因全長分別為115kb和125kb,由15個外顯子組成,其在維持細胞增殖活性中起重要作用,是細胞增殖活性的指標,而腫瘤發生的最直接表現就是細胞增殖活性的提高。本實驗應用免疫組化法檢測Ki-67在宮頸不同程度病變組織中的表達情況,發現在慢性宮頸炎組、CINⅠ組、CINⅡ組、CINⅢ組和宮頸癌組中,Ki-67表達陽性率分別為0.0%、69.2%、88.2%、95.0%和91.7%,CIN組與宮頸癌組分別與慢性宮頸炎組比較,差異有統計學意義,結果同文獻的報道一致。相關性分析結果顯示,隨著宮頸病變的發展,Ki-67陽性表達率逐漸增加,且表達強度與宮頸病變程度呈正相關(r=0.771),與賈薇等的研究結果一致。可能與HR-HPV感染后原癌基因改變了細胞周期調節基因的表達,促使細胞異常增殖,使Ki-67呈現過度表達。可見在宮頸病變的發生、發展連續過程中伴有細胞增殖能力的顯著增強,表明Ki-67與宮頸病變的發生、發展可能有一定的關系。3.4妊娠合并心臟病顯微變異本實驗結果顯示,P16INK4A、Ki-67都與HPV16/18