食品與生物工程學院《食品檢驗學實驗》綜合性實驗教學指導方案實驗課程名稱：食品檢驗學實驗綜合性實驗名稱：食品中亞硝酸鹽的測定(鹽酸萘乙二胺法)1、實驗目的1)明確測定亞硝酸鹽含量的意義，通過樣品中亞硝酸鹽含量的測定，評定該食品是否符合國家“食品添加劑”使用衛(wèi)生標準。2）掌握用比色法測定亞硝酸鹽含量的原理和測定方法。 2．知識綜合點與實驗原理樣品的前處理，（取樣、稱樣、樣液的制備等），樣液的發(fā)色，721分光光度計的使用，標準曲線的制作，含量的計算。亞硝酸鹽在弱酸性條件下，能與芳香族胺，如對氨基苯磺胺，起重氮化反應，生成重氮鹽，此重氮鹽遇偶合試劑如鹽萘乙二胺，則生成紫紅色偶氮染料．此染料顏色深度與試液中亞硝酸鹽的含量成正比，然后與標準比較定量．3．實驗內容與課時安排比色法測定肉制品中亞硝酸鹽的含量，4學時4．實驗主要儀器與試劑主要儀器：組織搗碎機，分光光度計，水浴鍋，500ml、50ml容量瓶，400ml燒杯，250ml三角瓶，吸管，玻璃漏斗等主要試劑：蛋白質沉淀劑：乙酸鋅溶液，亞鐵氰化鉀溶液，硼砂飽和溶液，發(fā)色試劑（0.4%對氨基苯磺酸溶液，0.2%鹽酸萘乙二氦溶液），亞硝酸鈉標準溶液(5μgNaN02／ml)5．實驗步驟與方法測定方法：樣品中亞硝酸鹽的提?。?1)稱取經(jīng)搗碎混合均勻的樣品5．0克，于50ml燒杯中，加入硼砂飽和溶液12．5ml，用玻棒攪和．(2)以70℃左右的蒸餾水約300ml，將上述樣品全部洗入500ml容量瓶中．（3置沸水浴中，加熱15分鐘。(4)取出，一面轉動，一面滴加5ml亞鐵氰化鉀溶液，搖勻再滴加5ml乙酸鋅溶液，以沉淀蛋白質。(5)冷卻至室溫，用蒸餾水稀釋至刻度．搖勻，放置片刻(約10分鐘)。（6)撇去上層脂肪，清液用干濾紙過濾于250ml錐形瓶中。(7)棄去初濾液，并洗錐形瓶2—3次，然后收集清徹濾液作為試液。亞硝酸鈉標準曲線的繪制：(1)取洗滌干凈的50ml納氏比色管(或50ml容量瓶)6支(2)用5ml吸管分別準確吸取0.00、0.20、0.40、0.60、0.80、1.00、1.50、2.00、2.50ml亞硝酸鈉標準溶液于比色管內(相當NaN02量0、1、2、3、4、5、7.5、10.0、12.5μg)。(3)各加入蒸餾水至溶液體積為10ml，搖勻。(4)各加入2ml0.4%對氨基苯磺酸溶液，搖勻。靜置3～5分鐘。(5)再加入lml0.2％鹽酸萘乙二胺溶液。(6)加入蒸餾水定容至50ml，混勻，靜置15分鐘。(7)用2cm比色皿，以0管調節(jié)零點，于538nm波長下測定吸光度。(8)以吸光度與對應的亞硝酸鈉濃度作曲線．樣液中亞到鹽含量測定：(1)準確吸取樣液40ml于50ml比色管中。(2)加入2ml0.4％對氨基苯磺酸溶液，搖勻，靜置3～5分鐘。(3)加入lmlO.2%鹽酸萘乙二胺溶液，搖勻。(4)加水至刻度，以0管為空白，于538nm波長下測定吸光度，記錄消光值，從標準曲線上查得相應的亞硝酸鈉含量，或直接與標準系列目測比較。計算：(亞硝酸鹽含量以亞硝酸鈉計)A×1000亞硝酸鹽含量(mgNaN02／kg)：=---------------W×40/500×1000式中：W一樣品重量(克)A一測定用樣液中亞硝酸鈉的含量(微克)6．實驗報告要求按實驗報告單上的要求完成7．其它提前兩周提醒同學本次實驗的時間，實驗開始