鎖陽蜜抗氧化作用及機制研究

“鎖陽蜜”來自“草本精髓”。“治療陽弱精虛、陰衰血虧、結腸干渴、便秘”。”鎖陽和蜂蜜酌加肉蓯蓉、黃芪等組方而成,藥理實驗表明鎖陽蜜對小鼠在常壓耐缺氧、抗疲勞、耐寒等抗應激的能力都有不同程度的增強。鎖陽蜜的內含物具有極好的清除自由基作用。本實驗觀察了鎖陽蜜的抗氧化作用,以探明其補腎益精作用的機理。材料表面1.動物昆明種小鼠,雌雄各半,體重(20±2)g,蘭州醫學院實驗動物中心提供(醫動字第14-001-2002-031號)。2.臨用時需稀釋成所需濃度d-半乳糖鎖陽蜜由甘肅中醫學院提供,鎖陽蜜按古方鎖陽和蜂蜜酌加肉蓯蓉、黃芪等配比組方,制成濃縮膏滋。臨用時用蒸餾水稀釋成所需濃度(實驗所用劑量均以生藥計)。D-半乳糖,上海試劑二廠產品,批號990218;超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)及考馬斯亮蘭蛋白測定試劑盒,南京建成生物工程研究所提供,批號分別為20021219、20021209、0208131-3。3.儀器XT-911型小白鼠跳臺條件反射測試儀,第二軍醫大學研制;KON-PRO全自動生化分析儀(荷蘭產)。維生素eve組昆明種小鼠270只,雌雄各半,隨機分成6組,即空白對照組、模型對照組、維生素E(VE)組0.1g/kg、鎖陽蜜1.95g/kg、3.9g/kg、7.8g/kg劑量組。每日灌胃給藥1次,除空白對照組每日皮下注射等容量無菌生理鹽水外,其余各組每日皮下注射5%D-半乳糖0.5ml/只,連續56天。1.小鼠的急性毒性試驗末次給藥后2h,取體積250ml廣口瓶10個,每瓶加鈉石灰5g,將小鼠放入瓶中,密閉。觀察小鼠在瓶中的表現,待動物最終抽搐死亡,記錄小鼠的存活時間。結果表明鎖陽蜜有耐缺氧的作用,動物的存活時間延長。見表1。2.u3000小鼠在水中的生長末次給藥后2h開始實驗。分別取小鼠,稱重后在其尾系上自身體重10%的砝碼,將其投入(20±2)℃的水中,讓其泳動。待小鼠沉于水底并不再掙扎時,記錄小鼠在水中的存活時間。結果表明鎖陽蜜有耐疲勞的作用。見表1。3.蜜對衰老小鼠學習記憶功能的影響以觸電潛伏期(即錯誤潛伏期)和5min內錯誤次數作為指標,觀察鎖陽蜜對衰老小鼠學習記憶功能的影響。結果表明,D-半乳糖模型組小鼠跳臺潛伏期與對照組比較顯著縮短,錯誤次數顯著增加;而鎖陽蜜3.9g/kg、7.8g/kg組明顯延長小鼠跳臺潛伏期,并顯著減少其5min內錯誤次數。見表2。4.模型大鼠腦勻漿及mda含量測定上述小鼠跳臺實驗結束后第2天,摘眼球采血取血清,摘全腦(小腦除外)用無菌勻漿介質制備10%腦勻漿,3000rpm離心10min,取腦勻漿上清液,分別進行血清、腦勻漿的SOD、MDA的含量測定。結果D-半乳糖模型組腦內SOD活性顯著降低,MDA含量顯著升高。鎖陽蜜Ⅱ組、Ⅲ組顯著升高D-半乳糖誘導的亞急性衰老小鼠腦、血清中SOD的活性,鎖陽蜜Ⅲ組顯著降低小鼠腦、血清中MDA的含量。見表3,表4。d-半乳糖衰老模型衰老是生命過程中正常而又復雜的生理現象,是機體內各種生化反應的綜合過程。隨著年齡的增長,自由基產生增多,而清除自由基的相關酶活性下降以及機體免疫功能下降等多種因素均是機體發生衰老的重要原因。D-半乳糖在一定時間內連續注射使機體細胞內半乳糖濃度增高,在醛糖還原酶催化下還原成半乳糖醇,這種物質不能被細胞進一步代謝而堆積在細胞內,造成細胞代謝紊亂,破壞并消耗了機體抗氧化物質,并不斷產生自由基導致組織細胞受損。本實驗也證實了D-半乳糖衰老模型鼠腦組織SOD活性明顯下降,MDA含量較生理鹽水對照組明顯增加。機體內SOD可催化氧自由基的岐化反應,是機體清除氧自由基的重要酶,而機體隨著年齡的增長,氧自由基產生增加,同時組織SOD活性降低,導致氧自由基堆積。自由基(如O-2、-OOH等)可通過過氧化作用攻擊細胞膜、RNA和蛋白質等成分,引起脂質過氧化和促進分子交聯、DNA基因突變和DNA復制異常,促進細胞膜上的不飽和脂肪酸產生過氧化反應,形成MDA等,同時可形成大分子脂褐素在溶酶體中沉積,導致細胞功能嚴重受損,機體因而逐漸趨于衰老。VE是天然脂溶性抗氧化劑,主要存在于細胞膜性結構中,VE不但是單線態氧和O-的清除劑,更重要的是脂質過氧化作用的阻斷劑,用其作為陽性治療組。本研究中,D-半乳糖衰老模型組小鼠跳臺潛伏期與對照組比較顯著縮短,錯誤次數顯著增加;而鎖陽蜜3.9g/kg、7.8g/kg組明顯延長小鼠跳臺潛伏期,并顯著減少其5min內錯誤次數;D-半乳糖模型組腦內SOD活性顯著降低,MDA含量顯著升高。鎖陽蜜3.9g/kg、7.8g/kg組顯著升高D-半乳糖誘導的亞急性衰老小鼠腦、血清中SOD的活性,3.9g/kg、7.8g/kg組顯著降低小