紫外分光光度法測定靈芝孢子粉多糖含量的方案實驗參與人員：實驗進行的時間：一、 實驗目的建立靈芝孢子粉多糖的含量測定的方法。二、 操作步驟對照品溶液的配制：取無水葡萄糖約10mg，精密稱定，置于10ml容量瓶中，加蒸餾水定容，搖勻，加甲醇定容，制得對照品貯備溶液。藥材取樣量（mg）稀釋的體積（niD濃度(rng-mL)無水葡萄糖10.0001101.0000測定波長的選擇：加顯色劑的空白溶液：精密稱取苯酚約0.5g，用100ml蒸餾水定容。對照品溶液：密量取對照品溶液0.5ml于10ml刻度試管中，加入1.0ml的5%苯酚溶液，迅速加入7.0ml濃硫酸，加蒸餾水至刻度，振搖5min，置沸水浴中30min，再冷水浴10min即的。測定：在可見光區200-700nm內對三份溶液進行掃描，確定顯色劑是否影響吸光度，確定對照品溶液的最大吸收波長。照紫外-可見分光光度法（2010版藥典附錄VA）測定,待測定對照品溶液的吸收光譜中顯示，無水葡萄糖在與苯酚、濃硫酸顯色后，在480-510nm處有明顯紫外吸收，Amax=492nm，故確定測定紫外吸收的測定波長為492nm。全波長掃描結果見圖1。圖1:空白、顯色劑、無水葡萄糖對照品溶液顯色后的全波長掃描光譜供試品溶液的制備方法考察取靈芝孢子粉粉末（過四號篩）0.5g，精密稱定，置圓底燒瓶中，精密加水90ml，加入回流3h,放冷，搖勻，精密量取50ml，加入乙醇150ml，搖勻，4°C放置12h，取出，離心，傾去上清液，沉淀加水溶解并轉移至150ml容量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，為供試品溶液。標準曲線的繪制精密吸取對照品溶液0.10ml，0.15ml，0.20ml，0.25ml，0.3ml分別置于試管中，加入1.0ml的5%苯酚溶液，迅速加入7.0ml濃硫酸，加蒸餾水至刻度，振搖5min，置沸水浴中30min，再冷水浴10min，以蒸餾水為空白對照，在最大吸收波長處測定各溶液吸光度。以對照品質量為橫坐標，吸光度為縱坐標，繪制標準曲線。表1標準曲線結果樣品編號取用童（mL）吸光度11.00205421.53.407932.006K842J3.823753.03.9S7S含量（皿Q含量（皿QQ)槌芒或方法學考察5.1精密度試驗取標準曲線項下1.5mL無水葡萄糖對照品溶液制備的樣品，在最大吸收波長處連續測定吸光度6次，求出RSD。表2精密度考察樣品編號吸光度典平均吸光度ASDRSD%19.40970.4018000571.4220405630.40114039835039336040265.2穩定性試驗取藥材0.5g，精密稱定，按供試品制備方法制備溶液，精密量取該供試品溶液0.5ml，加入1.0ml的5%苯酚溶液，迅速加入7.0ml濃硫酸，加蒸餾水至亥U度，振搖5min，置沸水浴中30min，再冷水浴10min，在反應后10min，15min，25min，35min，45min，60min，在最大吸收波長下測定吸光度,求RSD值。

表3穩定性考察編號時間間隔min吸光度A平均吸光度ASDRSD%153.50220_497300046J).942153.4982,259.49544菜3.50065459.48916603.49&45.3重復性試驗取一份藥材約0.5g精密稱定，分別精密量取6份供試品溶液0.5ml,供試品制備方法制備溶液，在最大吸收波長下測定吸光度，按測定數據求出多糖含量，并求算平均含量和RSD。表4重豆性考察樣品編號取樣童g吸光度A含量mg平均含量mg520SDRSD%1頊190.50125.193.343.7720.50230-50935.253050200.50535.2243.50233.50895.25弓0.5025tJi.49785166 '9.5023Qi.49765.165.4加樣回收率試驗精密稱取同一批號的樣品約0.25g共6份，分別精密加入對照品儲備液2.5ml，按照供試品制備方法制備溶液，照標準曲線制備項下的方法，依法顯色，測定吸光度，按測定數據求出各自的多糖含量，并得到回收率及RSD。表$加樣回收率考察編號取樣量當原有童mg加入JZL里mg吸光度Amg加樣回收率*平均加樣回收率％SDRSD%1025342.5952.5{).502251946103.954101.171.S61.S42025672.5932.5{).503252022100193025S62.59S2.50.50645^265101.144025442.5742.5{).5OS752439102.795025552.5922.50.50125.1S7199.356025672.5992.5{).50235.1?5399.5S樣品溶液的制備取靈芝孢子粉粉末(過四號篩)0.5g，精密稱定，置圓底燒瓶中，精密加水90ml，加入回流3h，放冷，搖勻，精密量取50ml，加入乙醇150ml，搖勻，4°C放置12h，取出，離心，傾去上清液，沉淀加水溶解并轉移至150ml容量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，為供試品溶液。測定分別精密吸取0.5ml樣品溶液至試管中，加入1.0ml的5%苯酚溶液，迅速加入7.0ml濃硫酸，加蒸餾水至刻度，振搖5min，置沸水浴中30min，再冷水浴10min，以蒸餾水為空白對照，在最大吸收波長處測定吸光度，從標準曲線上讀出樣品溶液中含多糖的含量，計算其含量，即得。表6不同產地靈芝抱子粉樣品的多糖含重藥材批次--■rnj□取用童S取樣體積〔mL)吸光度A舍重mg多糖總含量(3o)平均含量(%)SDRSD%大豐1JJ.50270l5O9.63306.1?1241243.310.0820.5O2SQi.509.63426.1?12430.50263l5O0.63406.1?1J24吉林長春1S.50160l5O9.49495.141.031.023.31DJj20.5013Qi.509.49025.131.0230L5O190L5O0.49245.121J2亳州1S.5014.0l5O0.56935.701.141.149.919.1420.5016Qi.500.57095/11.14.3S.50120l5O0.56S95.701.14山東濟寧1OJ5O3O0.590.86337.931.591.590.9103120.50290.50JJ.S6O47.911.5839.5O2S0.59t>.S66S7.961.59山東春江19.50160.59JJ.5O535.221.041.049.910.332OJ5O2O0.590.50575.221.9439.50240.590.50535.221.34金寨10.5O2S0.5009919S.901.781.780.013.JJ520.50320.500.9929S.911.7830.50300.50095213.911.78霍山一品堂19.50150250364511.332