Word版本，下載可自由編輯實驗設計方案一.試驗目的

1、學習從土壤中分別、純化微生物的原理與方法。

2、學習、掌控微生物的鑒定方法。

3、對提取的土樣進行微生物的`分別、純化培育，并進行簡潔的形態鑒定

二.試驗原理

α-淀粉酶是一種液化型淀粉酶，它的產生菌芽孢桿菌，廣泛分布于自然界，尤其是在含有淀粉類物質的土壤等樣品中。

從自然界篩選菌種的詳細做法，大致能夠分成以下四個步驟：采樣、增殖培育、純種分別和性能測定。

1、采樣：即采集含菌的樣品

采集含菌樣品前應調查研發一下自己準備篩選的微生物在哪些地方分布最多，然后才可著手做各項詳細工作。在土壤中幾乎各種微生物都能夠找到，因而土壤可說是微生物的大本營。在土壤中，數量最多的當推細菌，其次是放線菌，第三霉菌，酵母菌最少。除土壤以外，其他各類物體上都有相應的占優勢生長的微生物。例如枯枝、爛葉、腐土和朽木中纖維素分解菌較多，廚房土壤、面粉加工廠和菜園土壤中淀粉的分解菌較多，果實、蜜餞表面酵母菌較多;蔬菜牛奶中乳酸菌較多，油田、煉油廠附近的土壤中石油分解菌較多等。

2、增殖培育(又稱豐富培育)

增殖培育就是在所采集的土壤等含菌樣品中加入某些物質，并制造一些有利于待分別微生物生長的其他條件，使能分解利用這類物質的微生物大量繁殖，從而便于我們從其中分別到這類微生物。因此，增殖培育事實上是選擇性培育基的一種實際應用。

3、純種分別

在生產實踐中，一般都應用純種微生物進行生產。利用上述的增殖培育只能說我們要分別的微生物從數量上的劣勢轉變為優勢，從而提升了篩選的效率，但是要獲得純種微生物就必需進行純種分別。純種分別的方法很多，主要有：平板劃線分別法、稀釋分別法、單孢子或單細胞分別法、菌絲尖端切割法等。

三.試驗材料

1、器材：

小鐵鏟和無菌紙或袋(可省)、培育皿8個、載玻片、蓋玻片、一般光學顯微鏡、量筒、滴管、吸水紙、無菌水試管5支(每支4.5mL水)、燒杯3個、三角瓶5個、電爐、玻璃棒、接種環、鑷子、恒溫培育箱、高溫滅菌鍋、移液槍(槍頭10個)、天平、濾紙、pH試紙等。

2、試劑：

配制牛肉膏蛋白胨培育基的原料(牛肉膏0.9g、NaCl1.5g、瓊脂4.5g、蛋白胨3.0g)、Lugol氏碘液、可溶性淀粉0.6g、結晶紫染液、番紅染液、95%乙醇、無菌水等。

3、土樣：取自桂林師專甲山校區藥用植物園面的土壤，地下10cm左右。

四.試驗方法步驟

1、采集土樣帶上小鐵鏟和無菌袋到土豆地采集較細碎土壤

2、樣品稀釋在無菌紙上稱取樣品1g，放入100mL無菌水的三角瓶中，手搖10分鐘使土和水充分混合。用1mL無菌吸管吸取0.5mL注入4.5mL無菌水試管中，梯度稀釋至10-6。

3、分別用稀釋樣品的同支吸管分別依次從10-6、10-5、10-4樣品稀釋液中，吸取lmL，注入無菌培育皿中，然后倒入滅菌并溶化冷至50℃左右的固體培育基，當心搖動冷凝后，倒置于37℃溫箱中培育48小時。培育基的配制—稱取蛋白胨1.0g;NaCl0.5g;牛肉膏0.3g;瓊脂1.5g;pH6.4左右;100ml水定容。

4、初步鑒定對多種菌進行形態特征的觀看，簡潔染色、革蘭氏染色以及芽孢染色觀看，記錄結果。

5、α-淀粉酶鑒定

1)試驗原理：

細菌能否產生α-淀粉酶主要依據是鑒定有能否分解淀粉。α-淀粉酶該酶能夠把淀粉分解，因淀粉遇碘變藍色，如菌落四圍有無色圈，說明該菌能分解淀粉

2)步驟：

將培育的的各種待測菌種接種在含有2%淀粉液的牛肉膏蛋白胨培育基中，培育基的配制—稱取蛋白胨1.0g;NaCl0.5g;牛肉膏0.3g;可溶性淀粉0.2g;瓊脂1.5g;pH6.4左右;100ml水定容(注：先將可溶性淀粉加少量蒸餾水調成糊狀，再加到溶化好的培育基中，調勻)，倒置于37℃溫箱中培育18-24小時后，取出平板，向皿中注入l滴Lugol氏碘液，因淀粉遇碘變藍色，如菌落四圍有無色圈，說明該菌能分解淀粉。

6、純化從平板上選取淀粉水解圈直徑與