不同產地艾葉揮發性有機物含量測定

aihiliaargirevl和etvart.干燥的葉子在中國廣泛分布。其中大部分是用苦艾酒制成的。2010年版。其化學成分復雜,主要成分是揮發油,其次還有鞣質、黃酮類、甾醇類、多糖類、微量元素等。中國藥典測定艾葉含量的指標只有桉油精,艾葉含有多種揮發油成分,不同產地艾葉成分由于環境、氣候等差別有著明顯差異。古今文獻有端午采艾之說,本文建立了同時測定端午當天艾葉中桉油精、側柏酮、樟腦、龍腦4個揮發性成分含量的方法,為艾葉質量標準的提高提供了依據。1材料來源藥品氣相色譜儀(GC,AgilentTechnologies6980N,FID檢測器),安捷倫HP-5毛細管柱(30m×0.32mm×0.25μm)。正己烷(色譜純,天津市四友精細化學品有限公司);15個不同產地艾葉(湖北蘄春、湖北襄樊、北京、陜西西安、江西南昌、山西太原、安徽合肥、甘肅蘭州、河北安國、黑龍江、河南浙川、河南桐柏、河南鄭州、河南固始、河南安陽),均采摘于2010年端午節當天(2010年6月16日),陰干,密封保存。由北京市藥品檢驗所藥師鑒定為正品艾葉;對照品桉油精(批號110788-9202)、樟腦(批號110747-200507)、龍腦(批號110881-200706)均購于中國食品藥品檢定研究院;側柏酮(批號89231-1ML)購于SIGMA-ALORICH公司。2方法和結果2.1混合溶液的配制混合對照品溶液①:精密稱取桉油精、側柏酮、樟腦、龍腦適量,以正己烷配制濃度分別為1.8078、1.2305、0.2760、0.5027mg·mL-1的混合溶液,即得;混合對照品溶液②:精密吸取對照品溶液①4mL于10mL量瓶中,加正己烷稀釋至刻度,制成含桉油精、側柏酮、樟腦、龍腦的濃度分別為0.7231、0.4922、0.1104、0.2011mg·mL-1的混合溶液,即得。2.2揮發油提取器支管的制備將艾葉剪碎,取5g,精密稱定,置于500mL圓底燒瓶中,連接揮發油提取器,加入蒸餾水250mL,在揮發油提取器支管中加入正己烷2mL,加熱回流4h,放冷,收集正己烷液置于10mL量瓶中,加正己烷定容至刻度,搖勻,即得。2.3對照品、樣品采用安捷倫HP-5毛細管柱(30m×0.32mm×0.25μm);載氣為高純氮氣(99.99%),流速為0.6mL·min-1,分流比為10∶1;進樣口溫度:240℃,進樣量1μL,檢測器溫度250℃;程序升溫:起始溫度50℃,以4.0℃·min-1升至75℃,保持10min,以1.0℃·min-1升至100℃,以8.0℃·min-1升至150℃,保持2min,以3.0℃·min-1升至165℃,保持5min,以8.0℃·min-1升至250℃,保持3min。在上述色譜條件下,對照品及樣品(湖北蘄春)色譜圖見圖1。1.桉油精(eucalyptol)2.側柏酮(thujone)3.樟腦(camphor)4.龍腦(borneol)2.4方法研究2.4.1標準曲線的繪制以正己烷為溶劑配制桉油精、側柏酮、樟腦、龍腦濃度分別為3.8739、2.0500、0.5520、1.0054mg·mL-1的對照品溶液A;準確移取對照品溶液A2mL于5mL量瓶中,以正己烷定容,得對照品溶液B;準確移取對照品溶液B2mL于5mL量瓶中,以正己烷定容,得對照品溶液C;準確移取對照品溶液C2mL于5mL量瓶中,以正己烷定容,得對照品溶液D;準確移取對照品溶液D2mL于5mL量瓶中,以正己烷定容,得對照品溶液E;將對照品溶液E稀釋1倍即得對照品溶液F;另外因為個別樣品中側柏酮含量較高,單獨配制高濃度側柏酮溶液4.1018mg·mL-1。取上述不同濃度對照品溶液各1μL,分別進樣測定。以各成分濃度為橫坐標,峰面積為縱坐標,繪制標準曲線,各成分在一定范圍內相關性良好。各成分回歸方程及線性范圍見表1。2.4.2儀器精密度試驗精密吸取混合對照品溶液②1μL,注入氣相色譜儀,連續進樣6次,測定桉油精、側柏酮、樟腦、龍腦峰面積,結果峰面積的RSD<0.5%,表明儀器精密度良好。2.4.3穩定性分析取同一批湖北蘄春采集的艾葉樣品,按“2.2”項下方法制備供試品溶液,分別于室溫放置0、1、2、4、8、16、24h,精密吸取1μL進行GC分析,測定桉油精、側柏酮、樟腦、龍腦峰面積,結果峰面積的RSD<2%,表明供試品溶液在24h內穩定性良好。2.4.4gc-ms分析取同一批湖北蘄春采集的艾葉樣品6份,按“2.2”項下方法制備供試品溶液,精密吸取各供試品溶液1μL,進行GC分析,通過外標法計算各樣品揮發油成分含量,RSD<3%,表明該方法重復性良好。2.4.5加標回收率的測定精密稱取湖北蘄春采集的艾葉樣品2.5152g、2.5200g、2.5314g、2.5214g、2.4518g、2.5319g,分別置于500mL量瓶中,加入水250mL,加入混合對照品溶液①2mL,加熱回流4h,收集正己烷,以正己烷定容在10mL量瓶中,制得供試溶液。分別取供試溶液和混合對照品溶液②進行GC分析,以外標法計算各成分的量,求得回收率,結果桉油精、側柏酮、樟腦、龍腦的回收率分別在97%~103%、96%~103%、95%~101%、95%~103%之間,且RSD<3%。各待測成分平均回收率見表2。2.5揮發性成分的測定取不同產地的艾葉樣品,按“2.2”項下方法制備供試品溶液,精密吸取各供試品溶液1μL,進樣3針,進行GC分析,按外標法以干燥品計算不同產地艾葉中4個揮發性成分的含量,測定結果見表3。3不同產地葉揮發性成分的檢測3.1曾采用本法同時對樣品中石竹烯進行含量測定,但回收率在75%~94%之間,平均回收率87.6%,回收率不佳無法定量。這種情況可能與石竹烯較難揮發有關,回流4h并不能將其充分提取,但回流時間過長可能會導致易揮發的成分回收率降低。所以該方法不適合同時對艾葉中石竹烯進行定量測定。3.2中國藥典艾葉的含量測定中,艾葉需要粉碎,取粉末(過3號篩),然后進行前處理。但艾葉經粉碎加工會變成絨狀,篩去渣滓后就是艾灸用的艾絨,按中國藥典的方法所用的粉末只是艾葉中的葉肉部分,所測含量并不包括整體艾葉。所以樣品應該剪碎,然后進行前處理、檢測。3.3比較水蒸氣蒸餾法和正己烷加熱回流法提取艾葉揮發性成分,相同氣相色譜條件下進行檢測,前者所得化學成分峰面積較大,所以選用水蒸氣蒸餾法提取揮發性成分;同一批樣品采用水蒸氣蒸餾法分別提取2、3、4、5、6h,相同氣相色譜條件下,提取4h的艾葉揮發性成分峰面積較大,所以提取時間采用4h;由于艾葉揮發性成分復雜,色譜峰多不易分離,本法采用了程序升溫的色譜條件,在該方法下各峰分離程度理想。3.4在相同實驗條件下用氣質聯用儀對艾葉揮發性成分進行定性分析,結果示不同產地艾