實驗報告課程名稱：__病原與免疫學實驗_________指導老師：_________成績：__________________實驗名稱：__細菌分離培養與生化鑒定___實驗類型：___觀察與操作____實驗目的了解細菌生長條件，細菌在液體、固體斜面、半固體、平板的生長狀態。掌握細菌生化鑒定反應（培養基、原理、結果）。熟悉掌握細菌的分離接種方法，分區劃線法。實驗材料與方法實驗材料：普通瓊脂平板2塊，咽拭子、血平板，接種環，酒精燈，培養有相應細菌的各培養基實驗方法：參見教材第15-21頁實驗結果沉淀菌膜沉淀菌膜圖1：細菌在液體培養基上的生長狀態左一是谷草芽孢桿菌，為專性需氧菌，一般呈表面生長，形成菌膜，但是由于拿試管時有震蕩改變了表面張力，菌膜便沉至試管底部，但依舊可見菌膜。左二是乙型鏈球菌，試管底部有沉淀，細菌呈現沉淀生長右一是大腸桿菌，均勻混濁生長穿刺線BA穿刺線BA圖2.細菌在半固體培養基上的生長狀態半固體培養基接種法——穿刺接種法。在半固體培養基中，有鞭毛菌能運動，而無鞭毛菌則不能運動A：大腸桿菌半固體培養基渾濁，細菌接種線消失，此培養基接種有菌毛菌即大腸桿菌具有鞭毛B：痢疾桿菌半固體培養基僅有穿刺線變粗，周圍培養基仍為原來透明度，此培養基接種無鞭毛菌即痢疾桿菌無菌毛圖3平板分離劃線接種法（白色葡萄球菌）注意觀察平板表面單個菌落生長情況（菌落呈白色，較大，圓形，較密）A：⊕B：A：⊕B：+C：—圖4糖發酵試驗（指示劑：溴甲酚紫指示劑，變色pH范圍5.2~6.8，顏色由黃變紫）A：培養基變黃說明產酸，里面小管中有氣泡說明產氣，所以大腸桿菌分解葡萄糖產酸產氣。B：培養基變黃說明產酸，里面小管中無氣泡說明不產氣，故傷寒沙門菌分解葡萄糖產酸不產氣。C：培養基不變黃且無氣泡產生，故產堿桿菌不能分解葡萄糖。+紅色玫瑰吲哚—+紅色玫瑰吲哚—圖5吲哚試驗右試管：液面表面形成了紅色的玫瑰吲哚，為吲哚試驗陽性。說明大腸桿菌具有色氨酸酶，能分解蛋白胨水中的色氨酸生成物色的吲哚與吲哚試劑形成紅色的玫瑰吲哚左試管：培養基無任何明顯變化，為吲哚試驗陰性，說明肖式沙門菌中沒有色氨酸酶。—+—+圖6硫化氫試驗左試管：培養基穿刺部位變黑，硫化氫試驗為陽性，說明變形桿菌能分解培養基中的含硫氨基酸，產生硫化氫，硫化氫遇鉛鹽或鐵鹽形成黑褐色的硫化鉛或者硫化亞鐵沉淀物右試管：培養基不變色僅變渾濁，硫化氫試驗為陰性。說明大腸桿菌無法分解培養基中的含硫氨基酸?！?—+圖7尿素分解試驗（酚紅指示劑，遇堿變紅色）右試管：培養基顏色變為紅色，呈陽性，說明培養基呈堿性，則變形桿菌具有尿素分解酶，能分解尿素產生大量的氨，使培養基呈堿性。左試管：培養基不變色，為尿素分解試驗陰性，說明志賀菌不具有尿素分解酶圖8空氣中的細菌培養（將普通培養基放在實驗桌上的玻璃器皿上方暴露在空氣中10min，適宜環境中培養1天）培養基中的菌落較小且數目較少，呈白色。說明實驗室的空氣中細菌較少，較干凈。BABA圖9手指皮膚的細菌檢測（試驗者：組員顏承曦）A洗手前：菌落大小不一，數目多且較密集，呈白色。B用藍月亮洗手液洗手后：菌落數目明顯減少，但是仍較多，菌落大小比A中大，呈白色。實驗結果說明使用藍月亮洗手液洗手減少，但細菌仍有殘留，可能原因：1、洗手時沒有搓洗干凈，沒有按洗手步驟搓洗手；2、洗手液的并不能完全除去手指表面細菌；3、洗完手后按培養基前不慎又觸碰到表面有菌的物品。圖10健康人咽喉部細菌的分離（分區劃線分離法）分離后大致可看出至少3種菌落：其一顯示淺黃色菌落，菌落較大，圓形（黃色箭頭所指）；其二為白色菌落，菌落較大，圓形（白色箭頭所指），其三為草綠色溶血環，較小，不是很明顯（綠色箭頭所指）背景顏色加深，發生α溶血。分析討論裝訂線劃線分離時,使接種環環面與平板表面約成30°，以腕力在平板表面行輕快的滑移動作，注意勿使培養基表面劃破。劃線前須燒灼接種環以殺死環上剩余細菌，冷卻后再劃線2區，劃畢，再通過