印跡雜交印跡雜交第二章核酸雜交技術（一）名詞解釋（一）名詞解釋1．原位雜交2．核酸分子雜交技術3．探針4．反向點雜交5．缺口平移標記法6．隨機引物標記法．末端標記法. 雜交9．熒光原位雜交10.菌落雜交（二）選擇題【型題】.鏈的 值主要取決于核酸分子的（ ）含量含量含量含量印跡雜交實驗.研究得最早的核酸分子雜交種類是（）菌落雜交雜交雜交液相雜交原位雜交. 雜交通常是指（）和 雜交和 雜交和 雜交蛋白質和蛋白質雜交和蛋白質雜交.最容易降解的核酸探針是（）探針探針探針探針-含量.液相雜交是下列哪一種（）印跡雜交.探針基因芯片技術的本質就是（）核酸分子雜交技術印跡雜交印跡雜交蛋白質分子雜交技術非共價鍵結合聚合酶鏈反應技術非共價鍵結合基因重組技術酶切技術探針的長度通常為~個堿基~個堿基400~50個0堿基100~40個0堿基.＜個1堿0基0．寡核苷酸探針的最大的優勢是（）雜化分子穩定可以區分僅僅一個堿基差別的靶序列易標記易合成易分解.在 印跡中常用的核酸變性劑是甲醛乙醛氫氧化鈉碳酸鈉鹽酸0．鹽酸硝酸纖維素膜最大的優點是（）脆性大本底低高結合力.最常用的 探針標記方法是隨機引物切口平移3末端標記5末端標記法12．為了除去探針，重復使用濾膜，以下哪種情況不可以發生（）A探針在預雜交與除去探針之間的過程中曾經干燥過B探針在預雜交與除去探針之間的過程中曾經濕潤過C探針在預雜交與除去探針之間的過程中曾經溫浴過D探針在預雜交與除去探針之間的過程中曾經漂洗過E探針在預雜交與除去探針之間的過程中曾經標記過.'一末端的 探針標記主要依靠的酶是（）多聚核苷酸激酶B末端轉移酶共價鍵結合II．血友病是一種（）染色體病II．血友病是一種（）染色體病連鎖遺傳病先天性代謝缺陷病先天畸形常染色體I!性遺傳病．預雜交中最常用的封閉劑是（溶液XXXX.檢測目標是 的技術是（雜交雜交雜交雜交雜交淋巴瘤.檢測靶序列是的技術是（雜交雜交雜交雜交E雜交淋巴瘤. 雙螺旋之間氫鍵斷裂，雙螺旋解開，分子成為單鏈，這一過程稱（）A變性B復性C復雜性D雜交）E探針19.具有堿基互補區域的單鏈又可以重新結合形成雙鏈，這一過程稱（）A變性B復性）C復雜性D雜交E探針20.一種標記核酸與另一種核酸單鏈進行配對形成異源核酸分子的雙鏈，這一過程稱（）A變性）B復性C復雜性雜交

探針.寡核苷酸探針的 簡單計算公式為探針.寡核苷酸探針的 簡單計算公式為．點/狹縫雜交可以用于（）快速確定是否存在目的基因不僅可以檢測樣品中是否存在某一特定不僅可以檢測樣品中是否存在某一特定的基因，而且還可以獲得基因片段的大小及酶切位點分布的信息用于基因定位分析陽性菌落的篩選蛋白水平的檢測．放射自顯影時反射光產生的潛影在低溫下較穩定，最適溫度是℃0℃0℃0℃0. 印跡雜交可以用于（）快速確定是否存在目的基因不僅可以檢測 樣品中是否存在某一特定的基因，而且還可以獲得基因片段的大小及酶切位點分布的信息檢測的目標是用于基因定位分析陽性菌落的篩選26.熒光原位雜交可以用于（）. 印跡雜交可以用于（）不僅可以檢測樣品中是否存在某一特定的基因，而且還可以獲得基因片段的大小及酶切位點分布的信息檢測的目標是用于基因定位分析陽性菌落的篩選蛋白水平的檢測A快速確定是否存在目的基因檢測的目標是C 用于基因定位分析D 陽性菌落的篩選E蛋白水平的檢測27.以等位基因特異的寡核苷酸探針雜交法診斷某常染色體隱性遺傳病時，若能與突變探針及正常探針接合，則該樣本為（）正常人利用通過在體外反轉錄可制備雜合體患者大量的探針純合體患者攜帶者純合體患者攜帶者探針不包含內含子探針不包含大量的高度重復序列不能確定由于探針自身所攜帶的），有.在 為下述何種范圍時， 值變化不明顯可能產生非特異性雜交的問題探針合成方便，成為探針的重要來源.一般來說核酸雜交的溫度低于其 值的多少度進行5℃5℃0℃．一般來說，設計的寡核苷酸探針的長度為（）0℃0℃．對于寡核苷酸探針，雜交溫度一般般低于其0℃0℃0．一般來說，設計的寡核苷酸探針的長度為（）0℃0℃．對于寡核苷酸探針，雜交溫度一般般低于其0℃0℃0℃.變性劑可使核酸的 值降低，常用的變性劑5℃甲酰胺．一般情況下，不含變性劑甲酰胺時，雜交反應氫氧化鈉常在多少℃下進行濃鹽酸稀鹽酸甲醇氫氧化鈉常在多少℃下進行濃鹽酸稀鹽酸甲醇．下列有關探針的描述不正確的為（）．下列有關探針的描述不正確的為（）．在含50%甲酰胺時，雜交反應在多少℃進行.隨機引物法標記探針常用的、聚合．雜交時的溫度與錯配率有關，錯配率每增加，則值下降℃5℃5℃5℃5的雜交體的 值一般應增加體的數目是【型題】．下列哪些是影響復性的因素溫度濃度的分子量堿基組成0℃的來源5℃．在含50%甲酰胺時，雜交反應在多少℃進行.隨機引物法標記探針常用的、聚合．雜交時的溫度與錯配率有關，錯配率每增加，則值下降℃5℃5℃5℃5的雜交體的 值一般應增加體的數目是【型題】．下列哪些是影響復性的因素溫度濃度的分子量堿基組成0℃的來源5℃0℃探針的優點有（）5℃制備方法簡單．雜交的時間一般為探針易降解探針的標記方法成熟，有多種方法可以選克隆在質粒載體中，可以無限繁殖，取之不盡0倍以上．為封閉非特異性雜交位點，可在預雜交液中加單鏈，不存在競爭性的自身復性．以下哪些方法可以用于探針的全程標記（ ）加尾法切口平移標記法隨機引物標記法末端標記尾端標記?關于 變性的描述正確的是二級結構破一級結構破壞黏度降低生物活性喪失浮力密度增加.以下哪些因素可以使變性()增加溶液的濃度加熱改變溶液的值有機溶劑冷藏．預雜交中，下列能起封閉作用的是()ssDNABSA小牛胸腺脫脂奶粉DTT.變性的 會發生哪些理化性質的變化(粘度下降B 沉降速度增加C 浮力下降D 紫外光吸收增加E 紫外光吸收減少48下.列物質適于非放射性探針標記的是( )A AKPB ACPC 生物素D 地高辛E 熒光素49．關于人工合成的寡核苷酸探針，下列描述正確的是()A特異性高B 可依賴氨基酸序列推測其序列C 分子量小D可用于相似基因順序差異性分析可用末端轉移酶進行‘端標記50．通過哪些措施可以提高雜交反應的速度()A 采用大片段探針B 少量的反應體積C 高反應溫度D 不斷的振搖E 大量的反應體積51．關于切口平移法下述正確的是( )可標記線性可標記松散螺旋可標記超螺旋可標記存在缺口的雙鏈可標記隨機引物以下哪些方法可以用于從凝膠上轉移 （）毛細轉移真空轉移負壓轉移電泳轉移冷凍轉移．關于隨機引物法標記探針下述正確的是（ ）可標記單鏈可標記雙鏈可標記單鏈比活性高達 /!!以上常經過 純化才可使用．可以采用哪些方法來標記探針（）雜交標記法切口平移標記法可’-末端的標記3’-末端的標記化學法延長標記．整個雜交反應主要以下哪些步驟組成（）預雜交洗脫固定轉移6．放射自顯影可以被分為（）直接放射自顯影氧化顯影封閉顯影間接放射自顯影固定顯影7．關于電轉移下列描述正確的是（）快速、高效需要特殊設備緩沖液用或可產生高溫常用膜作為支持介質8．預雜交的主要目的是（）平衡濾膜封閉非特異性雜交的位置提高雜交信號的檢測效率便于從濾膜上除去探針清除用于雜交反應檢測的顯色物質9關.于非放射性探針標記，下列描述正確的是對人體危害小雜交 B需要特殊設備C可長時間使用靈敏度不如放射性探針．下列哪些可以作為核酸探針使用（）E重新雜交新探比較容易.對于改變片段長度的突變，可以由于缺失或插入產生，或由于限制性酶切位點改變而導致限制性片段長度改變。可以通過哪些方法檢測（）擴增BRAPD印跡雜交印跡雜交E以上都不是.重組的篩選可用核酸分子雜交的方法，常用于檢測的雜交方法有哪些（）A菌落印跡雜交印跡雜交印跡雜交D原位雜交E斑點雜交.關于探針的描述下列正確的是A可用于隨機引物標記B特異性高C靈敏度高D可用非同位素標記法標記單鏈C寡核苷酸DmRNA雙鏈64．關于核酸探針的描述下列正確的是（）可以是可以是C可用放射性標記D可用非放射性標記E必須是單鏈核酸（三）問答題1．根據哪三種不同的分類標準可以將雜交分為哪幾類？2．簡述反義核酸技術的基本原理及其應用范圍.試述 雜交的操作步驟？4．什么是肽核酸？并簡述其應用？5．請舉例說明雜交技術在臨床檢驗科基因診斷方面的應用。6．請敘述雜交探針標記方法的種類。7．簡述直接放射自顯影的原理。不易降解參考答案聚合酶的’―’外切酶活性和’一聚（一）名詞解釋1．原位雜交：是首先應用核酸探針與組織或細胞中的核酸按堿基互補配對原則進行特異性結合形成雜交體，然后應用組織化學或免疫組織化學方法在顯微鏡下進行細胞內基因定位或基因表達的檢測技術。2．核酸分子雜交技術：單鏈的核酸分子在合適的條件下，與具有堿基互補序列的異源核酸形成雙鏈雜交體的過程稱作核酸分子雜交。利用核酸分子雜交檢測靶序列的一類技術稱核酸分子雜交技術。3．探針：是一段單鏈或雙鏈核苷酸，用放射性核素或非放射性物質標記其末端或全鏈，可依堿基配對規律與具有互補序列的待測核酸進行雜交，以探測它們的同源程度。這一段標記的核苷酸被稱為探針。.反向點雜交：是將多種探針固定在同一膜上，同時參與檢測的樣品 又互不干擾，故能一次性篩查出多種不同的序列，而不是像傳統的雜交法，一次僅能檢測一個未知序列。.缺口平移標記法：該法是利用低濃度在 雙鏈上隨機切開若干個切口，然后利用合酶活性，使鏈上的核苷酸不斷被切除，而帶放射性核素標記的 不斷地被填入缺口位置，從而形成兩條鏈被均勻標記的高放射活性的探針。.隨機引物標記法：隨機引物是各種可能序列的寡核苷酸混合物，可以人工合成，也可以使用小牛胸腺的 降解物。隨機引物在較低的退火溫度下，能與各種單鏈 模板結合。首先使雙鏈 分子變性成為單鏈，然后退火使隨機引物結合于兩條單鏈模板上，當反應液中存在的4種 中有一種帶放射性核素標記時，在聚合酶催化下合成新的帶標記的 鏈。反應結束后經純化即可得到標記的 探針。.末端標記法：寡核苷酸探針由于較其他類型的探針短，需要采用末端標記法。該法需要分子的末端帶有羥基，而人工合成寡核苷酸的5’端本身即為羥基。其原理是利用多核苷酸激酶將y分子上位磷酸基轉移至寡核苷酸鏈的’末端，末端標記也可在3’端進行。. 雜交：是研究 圖譜的基本技術，在遺傳診斷、 圖譜分析及 產物分析等方面有重要價值。印跡雜交的方法是將 交后，洗脫未結合的探針，將濾膜暴露于 線膠片等方面有重要價值。進行放射自顯影；⑤將自顯影膠片、濾膜、培養平板相比較，就可以確進行放射自顯影；⑤將自顯影膠片、濾膜、培養平板相比較，就可以確定陽性菌落。（二）選擇題【型題】【型題】9．熒光原位雜交：是一種利用非放射性的熒光信號對原位雜交樣本進行檢測的技術。它將熒光信號的高靈敏度、安全性，熒光信號的直觀性和原位雜交的高準確性結合起來，通過熒光標記的探針與待測樣本的進行原位雜交，在熒光顯微鏡下對熒光信號進行辨別和計數，從而對染色體或基因異常的細胞、組織樣本進行檢測和診斷，為各種基因相關疾病的分型、預前和預后提供準確的依據。【型題】（三）問答題1．根據哪三種不同的分類標準可以將雜交分為哪（三）問答題1．根據哪三種不同的分類標準可以將雜交分為哪，用 標記的探針與菌落進行雜交；④雜幾類？①根據雜交核酸分子的種類，可以分為．什么是肽核酸？并簡述其應用？與雜交，與雜交，與雜交；②根據雜交探針標記的不同，可以分為同位素雜交和非同位素雜交；③根據雜交介質的不同，可以分為液相雜交、固相雜交和原位雜交；其中固相雜交又可以分為菌落雜交、 雜交、雜交、點雜交和狹縫雜交。2．簡述反義核酸技術的基本原理及其應用范圍反義核酸技術是近幾年發展起來的一項新的生物技術。它是根據堿基互補的原理，設計出能特異地同相應靶基因結合的 或 ，從而影響靶基因的轉錄和翻譯，以達到調控靶基因表達的目的。反義核酸技術包括反義 技術，反義技術及核酶技術。.試述 雜交的操作步驟？①的變性瓊脂糖電泳；②將硝酸纖維薄膜放在含有 電泳條帶的凝膠上；③轉印盤中的轉移緩沖液將逐漸為膠和膜上覆蓋的吸水紙吸收，從而利用④毛細作用將膠中的變性分子轉移到硝酸纖維薄膜上；⑤轉印完成后，使分子固定到膜上；⑥膜上的 分子與探針雜交；⑦經放射自顯影或其他檢測技術顯示出雜交區帶。肽核酸是一種全新的 類似物，在世紀90年代由丹麥科學家發明。肽核酸中以中性的肽鏈酰胺氨基乙基苷氨酸鍵取代了 中的戊糖磷酸二酯鍵，其余結構與 相似。 可以通過堿基互補配對的形式識別并結合 或序列，形成穩定的雙螺旋結構。由于 不帶電荷，與和 之間不存在靜電斥力，因而結合的穩定性和特異性都大為提高； 與或的雜交能力遠遠優于 、或A雜交，表現在很高的雜交穩定性、優良的特異性，而且不被蛋白酶和核酸酶水解等方面。鑒于上述諸多優點，近年來， 被廣泛應用在許多高科技領域。如：病原體、遺傳病的檢測，抗癌、抗病毒反義核酸的研究和應用。特別是 可取代核酸用于基因芯片的制備，被認為是基因芯片的升級產品。還可用于定量 分析。隨著對研究的不斷深入， 將顯示出更大的優越性和更為廣闊的應用前景。5．請舉例說明雜交技術在臨床檢驗科基因診斷方面的應用在臨床檢驗科，雜交技術最常用于基因診斷的例子是鐮狀細胞貧血病的基因診斷。主要缺點是容易造成放射性污染，而且放射性核素鐮狀細胞貧血是一種單基因遺傳性疾病，病因是編碼血紅蛋白的基因發生點突變導致編碼B鏈第位的谷氨酸被纈氨酸取代，表示為B谷一纈。在血紅蛋白基因的堿基序列上表現為第6位密碼子突變為，也就是在這一位點發生了到的點突變。由于這一突變導致基因內部一個限制性酶切位點丟失，因而針對這一情況，可以設計與B珠蛋白基因雜交的核酸探針。先擴增靶片斷，并用 消化擴增的片斷，電泳分離消化的片斷。將片斷轉印到硝酸纖維素薄膜上采用 雜交技術檢測片斷。以此將正常人、攜帶者和患者區分開來。此外還可以用凝血因子IX基因探針檢測型血友病，凝血因子XIII基因探針檢測型血友病，用胰島素基因探針檢測糖尿病，用苯丙氨酸羥化酶基因探針檢測苯丙酮尿癥。以上都是雜交技術在臨床檢驗科進行基因診斷的例子。6．請敘述雜交探針標記方法的種類探針的標記方法可分為放射性核素標記法和非放射性核素標記法兩大類。（1放）射性核素標記的探針，靈敏度高、特異性強，的半衰期較短，必須隨用隨標。標記手段主要有：缺口平移法、隨機引物合成法和末端標記法。（2非）放射性核素標記法：非放射性核素標記法無