形態(tài)學實驗技術河北聯合大學實驗中心李琪佳組織切片制作技術

石蠟切片常規(guī)染色技術石蠟切片特殊染色技術免疫組織（細胞）化學技術

免疫細胞化學的理論基礎免疫熒光細胞化學技術免疫酶細胞化學技術親和免疫細胞化學技術

重點介紹：電子顯微鏡技術（electronmicroscope,EM）1.透射電子顯微鏡2.掃描電子顯微鏡3.電鏡技術與生物醫(yī)學超微結構4.細胞超微結構與超微結構病理激光掃描共聚焦顯微鏡技術（ConfocalLaserScanningMicroscope）集高、精、尖細胞分析及工程技術于一體的新技術。該儀器突破了普通光學顯微鏡不能對細胞或組織內部進行定位檢測的限制，實現了對細胞內部光學斷層掃描成像。可檢測細胞內核酸、細胞骨架、細胞內pH、Ca離子濃度、膜電位、過氧化物、細胞間通訊、細胞篩選及定量等。為活細胞功能研究開辟了新途徑，成為現代細胞生物學研究不可缺少的的工具。流式細胞儀技術（FlowMicrofluorimetry）

是一種單細胞定量分析和分選的新技術。其范圍包括了細胞表面或細胞內的各種抗原、蛋白、酶以及基因表達產物；還有細胞內的核酸定量或DNA倍體、細胞周期分析；尤其是癌基因的檢測、血細胞表型分析、細胞分子和粘附分子的檢查、細胞凋亡分析、腫瘤相關抗原及單種細胞的純化。第一章組織切片制作技術第一節(jié)概述

組織切片的制作技術屬于組織病理學范疇它是指采用包埋劑使組織內滲入某種支持物質，使組織保持一定的硬度，然后利用切片機切成薄片，經染色在顯微鏡下觀察。根據支持物的不同，有石蠟切片、明膠切片、塑料切片、冷凍切片等類別。制成的切片撈置于載物網上，經烘干后可進行染色或備用。

組織切片技術包括組織的取材、固定、脫水、透明、浸蠟、包埋、切片及染色等。組織病理學標本大致可分為：手術標本、內鏡取材標本、穿刺標本、細胞學標本第二節(jié)組織的處理

取材固定脫水透明浸蠟與包埋一、取材（tisssueprocessing）1材料新鮮：活檢組織離體后立即固定，最遲不能高于30分鐘。2取材部位及切面：縱切或橫切往往是顯示組織結構明晰的關鍵。掌握正確的取材部位就必須熟悉機體的組織結構和解剖特點，原則上應在病變與正常組織的交界處取材，避開壞死出血區(qū)。，甚至卷曲變形，特別是神經肌肉組織，可將其兩端扎在木片或小木棍上進行固定。3.勿使組織受擠壓：取材刀剪應鋒利，切開時取材刀嚴禁來回挫動，以避免組織結構變形、細胞破碎。

4.防止變形：固定后的組織或多或少會產生收縮現象5組織塊力求小而薄：切塊的大小、厚度及質地決定了固定的效果，一般情況下，取材大小為2×1cm，厚度為2－4mm。二、固定（fixation）固定是將某些化學試劑（固定液）滲透到需要保存或制作切片的臟器或組織、細胞中，使其所含物質盡量保持在生活狀態(tài)時的形態(tài)結構和位置。固定的目的：1.迅速防止組織細胞的死后變化,防止自溶與腐敗使之盡量保持生前的形態(tài)結構。2.使細胞內的蛋白質、糖、脂肪、酶等成分變?yōu)椴蝗苄晕镔|，以保持其原有形態(tài)及特定位置。3.能將細胞的半液體狀變成半固體狀，使組織變硬以利切片。4.可使組織內的各種成分產生不同的折光率。5.某些固定液可起助染作用而增進染色。固定方法

浸泡固定注射、灌注固定微波固定蒸汽固定常用的固定劑單純性固定劑：甲醛（福爾馬林formalin）乙醇；乙酸。混合固定劑：中性甲醛pH7.0（甲醛、磷酸緩沖液）；A-F液（甲醛、酒精）三、脫水（dehydration）將組織內的水分用某些化學試劑置換出來的過程脫水的目的標本經固定和水洗后，組織內有大量水份，不能與二甲苯混溶，因此必須脫水。常用的脫水劑和脫水方法脫水劑有：乙醇、丙酮等

80％酒精30分鐘

95％酒精1－2小時

95％酒精1－2小時

100％酒精1－2小時

100％酒精1－2小時四、透明（clearing）

為使石蠟能浸入組織塊，組織脫水后必須經過一種既能與酒精相混合，又能溶解石蠟的溶劑，而達到石蠟浸入組織塊的目的。此時因組織塊的水分被二甲苯取代，其折射指數接近于組織蛋白的折光指數，組織塊變得透亮。因此透明是石蠟包埋前的一個特定步驟。透明的目的：便于浸蠟、包埋。透明劑即能與脫水劑相混溶，又能與包埋劑（石蠟）相混溶，起到橋梁作用。

大多數脫水劑不能和包埋劑（石蠟）混溶，故必須通過透明劑置換出脫水劑后才能進行后續(xù)程序。常用的透明劑二甲苯：為最常用的透明劑，有毒、易燃、易揮發(fā)；沸點1380C-1400C,長期接觸對粘膜有刺激作用。氯仿:易揮發(fā)微溶于水，易溶于醇、醚、苯等。它比二甲苯透明力差，但不宜使組織變脆，使大塊組織的良好透明劑常用的透明方法二甲苯透明法（常用）：徹底脫水的組織塊二甲苯1二甲苯2，此二步總的時間不超過40分鐘。氯仿透明法：徹底脫水的組織塊按3：1氯仿、純酒精混合液1小時氯仿1-2小時1：1氯仿石蠟混合液1小時。五、浸蠟與包埋浸蠟(paraffininfiltrating)和包埋(embedding)

是指標本經過前期處理后，再置于支持物中，使支持物透入組織內部，并將組織埋入、包裹的過程。常用的支持物有明膠、石蠟、火棉膠、樹脂、炭蠟等，他們及時浸透劑又是包埋劑。其中最常用的是石蠟。

浸蠟的方法此法應在560C－620C的溫箱內進行，液狀石蠟的量應為標本的25－30倍。方法：透明后的組織520C－540C（軟蠟）1小時540C－560C石蠟1小時580C－600C（硬蠟）1小時540C－560C石蠟進行包埋第三節(jié)組織切片切片（section）1.整修蠟塊：組織四周應留有2－4mm蠟邊，蠟塊的上下兩邊應平行。2.鑲裝：鑲裝平面應盡可能與切片刀刃平行。3.調整：切片機的進度尺常定在4－6μm，切片刀的傾斜角在20度左右。4.修切平面：修切的組織片不能過厚，以免造成組織塊的人為損失，標準為15μm／次。5.切片：要求質量，左手毛筆，右手眼科鑷，轉速均勻。6.展片、撈片：常用水溫為450C左右，組織膜與玻片附著的位置為，右手持片，玻片的左2／3正中。7.烘片：烘烤箱的溫度為630C以下，時間常為12小時。第二章石蠟切片常規(guī)染色技術第一節(jié)概述染色的意義及目的:染色（stainning）是用染液對組織切片進行處理，使組織中的不同成分被染上相應的顏色，產生不同的折射率，以利于光鏡觀察和分析。組織染色屬于生物染色的范疇。染色種類：包括普通染色、特殊染色、單一染色、多色染色等。第二節(jié)蘇木素—伊紅染色（HE染色）蘇木素（haematoxylin）又稱蘇木精，一種天然堿性染料，對細胞核具有優(yōu)良的染色能力。伊紅Y（eosin）又稱曙紅Y,簡稱伊紅，屬酸性染料，是良好的細胞質染色劑。蘇木素(haematoxylin)—伊紅染色法，簡稱HE染色，是醫(yī)學領域中最廣泛應用于細胞和組織的染色方法，也被稱為常規(guī)染色。一、HE染色的基本原理細胞核染色的原理：細胞核主要由DNA構成，帶負電荷，呈酸性，易于帶正電荷的堿性染料結合。

細胞質的染色原理:細胞之內主要成分是蛋白質,為兩性化合物，細胞漿的染色與pH值有密切關系，當pH調到蛋白質等電點時，胞漿對外不顯電性，此時酸或堿性染料不易染色。

必須將pH調至等電點以下時，再染液中加入醋酸使胞漿帶正電（陽離子），就可被帶負電荷（陰離子）的染料染色。

伊紅Y:是一種化學合成的酸性染料，在水中解離成帶負電的陰離子，與蛋白質的帶氨基正電荷（陽離子）結合而使細胞漿染成紅色。

二、染色方法1.自溫箱中取出切片后，立即放入二甲苯①、②中脫蠟各5分鐘。2.入純酒精1、2中各5分鐘以洗去二甲苯。3.入95%酒精和80%酒精中各5分鐘。4.入自來水洗滌（水化）。5.入蘇木素染液5-10分鐘。6.自來水洗。7.0.5-1%鹽酸酒精分化數秒鐘。8.

充分水洗藍化30分鐘。9.0.5-1%伊紅1-2分鐘。10.80%、95%、純酒精1、2(脫水)各5分鐘。11.

二甲苯1、2中(透明)各5－10分鐘。12.

中性樹膠封固。HE染色中二甲苯、酒精和水洗作用：1.二甲苯的作用:二甲苯可以洗去石蠟，使染料更易進入到細胞和組織內；染色后的二甲苯起透明切片的作用。以利于光線的透過。2.酒精的作用:酒精用于蘇木素染色前由高濃度向低濃度逐漸下降處理切片,洗脫用于脫蠟的二甲苯。酒精和二甲苯互溶，二甲苯被除去。梯度酒精(95%,80%)使水分逐漸進入切片，以免引起細胞形態(tài)結構的人工改變。伊紅染色后的梯度酒精(80%,90%,95%,100%)是為了逐漸脫去組織中的水分,為二甲苯進入細胞(透明)創(chuàng)造條件。否則切片組織不能顯示清晰的細胞和組織結構。3.水洗:水洗是為了使蘇木精進入細胞核內，使細胞核著色；染色后的水洗是為洗去未與切片結合的染液；分化后的水洗是為了除去分化液和脫下的染料。HE染色中分化和藍化的作用：1.分化作用:蘇木素染色后,水洗去未結合在切片中的染液,但細胞核內結合過多的染液和細胞漿中吸附過多的染料必須用分化液(1%鹽酸酒精）脫去，以保證核與漿的染色分明。將此過程稱為染色的分化作用。但不能過度。2.藍化作用:

當分化以后蘇木精在酸性條件下處于紅色離子狀態(tài)，在堿性條件下則處于蘭色離子狀態(tài)。所以分化后用水洗去酸而中止分化，也可用稀氨水或溫水變藍。此過程稱藍化作用。第三節(jié)組織切片特殊染色(Masson三色染色)

為了顯示組織或細胞中的正常結構或病理過程中出現的異常物質、病變、病原體等，需要選用相應的顯示這些成分的染色方法進行染色，這些是常規(guī)染色所不能的。故稱特殊染色。如細胞中的黑色素或含鐵血黃素的區(qū)別，用特殊染色即可做到。

結締組織含有三種纖維，即膠原纖維、網狀纖維和彈力纖維。這三種纖維廣泛分布于身體各處，常見于器官與器官之間，組織與組織之間以及細胞和細胞之間，這些纖維具有支持、連接、營養(yǎng)、防御、保護和創(chuàng)傷修復等功能，在H.E染色中有時難以區(qū)別，特別是在某些病理改變時，則要借助于特染鑒別。

特殊染色的方法很多，在此僅介紹膠原纖維染色。顯示膠原纖維的方法很多，最常用的是Masson三色染色和V.G染色。應用：判定多種組織、器官的病變程度及修復情況；區(qū)分腫瘤組織中的纖維與平滑肌成分。Masson三色染色技術操作Masson復合染色液：酸性復紅、麗春紅、橘黃G、醋酸亮綠染色液（可用苯胺藍替換）：亮綠、醋酸染色過程：

1.切片脫蠟至水

2.蘇木素染5分鐘,水洗

3.鹽酸酒精分化,水洗

4.染于麗春紅復紅液5分鐘,水洗5.磷鉬酸水溶液分化5分鐘,水洗6.染于亮綠2-5分鐘7.脫水、透明、封固結果判定:膠原纖維呈綠色或藍色，肌纖維、纖維素、紅細胞呈紅色，胞核呈藍黑色。腦尼氏體

星形細胞腎淀粉樣變剛果紅染色肝表面抗原維多利亞藍第三章免疫組織（細胞）化學

(immunohistochemistry,IHC)第一節(jié)免疫組織化學概論免疫組織化學是利用免疫學抗體與抗原結合的原理及組織化學技術對組織、細胞特定抗原或抗體進行定位和定量的技術，是免疫學與細胞化學相結合的一個分支學科。若想學好免疫組織化學，必須先了解與之相關的免疫學基礎。

免疫組織化學主要原理是用熒光素、生物素或地高辛等標記的抗體（或抗原）對細胞或組織內的相應抗原（或抗體）進行定性、定位或定量檢測，經過組織化學的呈色反應之后，用顯微鏡、熒光顯微鏡或電子顯微鏡觀察。

凡是能作抗原、半抗原的物質，如蛋白質、多肽、核酸、酶、激素磷脂、多糖、受體及病原體等都可用相應的特異性抗體在組織、細胞內將其用免疫細胞化學手段檢出和研究。乳腺導管癌ER細支氣管肺泡癌TTF-1免疫細胞化學的突出優(yōu)點是：1.高度的特異性抗原抗體反應是特異性最強的反應之一，細胞化學所用的抗體必須是特異性強的多價或單價抗體，具有高度的認別能力，在抗原識別上可達到單個氨基酸的水平，這是其它組織化學方法難以相比的。2.敏感性高免疫細胞化學采用各種有效方法最大限度保存細胞和組織內待檢物的抗原性，采用多種增敏方法，使用高度敏感的和高親和力的抗體，保證檢出細胞內超微量的抗原分子，用顯微鏡和電子顯微鏡觀察結果，因此它是在細胞、分子水平或基因水平的檢測技術。3.方法步驟統(tǒng)一雖然免疫組化技術的方法很多，但基本程序相同只要掌握了原理和一種方法，其它方法大同小異。4.既可定位、定性又可定量免疫組化技術用于組織或細胞成分定性、定位及定量的研究有關的免疫學理論

一、抗原、抗體的概念及抗原抗體的關系

抗原(Antigen)凡能刺激機體產生抗體，并能與抗體發(fā)生特異性結合的物質稱為抗原。物質所具有的這種特性稱為抗原性。抗原可以是可溶性物質（如病毒和蛋白質）或微粒（細菌或組織細胞）。也可有外源性和內源性之分。

抗體(Antibody)是機體受抗原刺激后，在體液中出現的一種能與相應抗原發(fā)生反應的球蛋白，稱免疫球蛋白(Immunoglobulin,Ig)。含有免疫球蛋白的血清稱免疫血清。人類免疫球蛋白有五類即IgG,IgM,IgA,IgE,IgD。抗體的種類：根據獲得抗體的途徑或來源不同分類免疫抗體，天然抗體，自身抗體，完全抗體，不完全抗體。抗原與抗體的關系抗原是引起機體產生免疫反應的主要外因，決定免疫反應的特異性，機體與抗原物質的斗爭過程中為加速循環(huán)和排除抗原而產生的抗體、致敏淋巴細胞等物質，是機體排除異體物質的保護性反應。沒有抗原的刺激，機體不能產生抗體；利用抗體可以檢測抗原物質。二、免疫細胞化學的分類根據標記物的不同，免疫細胞化學技術可分為免疫熒光細胞化學技術；免疫酶細胞化學技術；免疫鐵蛋白技術；免疫金—銀細胞化學技術；親和免疫細胞化學技術；免疫電子顯微鏡技術等。

不同的免疫細胞化學技術，各具有獨特的試劑和方法，但其基本技術方法是相似的，都包括:抗體的制備，組織材料的處理，免疫染色、對照試驗、顯微鏡觀察等步驟。目前國內外市場各種特異性抗體日益增多，可直接應用市售產品。我國自制抗體種類較少。三、免疫染色可在細胞涂片或組織切片上進行免疫染色。一般程序是：①標記抗體與標本中抗原反應結合；②用PBS洗去未結合的成分；③直接觀察結果(免疫熒光直接法)；或顯色后再用顯微鏡觀察(免疫酶直接法)。在此基礎上發(fā)展出間接法，多層法，雙標記法等各種方法。第二節(jié)免疫熒光細胞化學技術免疫熒光細胞化學技術(immunofluorescencecytochemistrytechnique）是將已知的抗原或抗體標記上熒光素，再與組織切片或涂片中相應的抗原或抗體起反應，從而使形成的免疫復合物上帶有一定量的熒光素，在熒光顯微鏡下借助紫外光激發(fā)呈現出黃綠色或橘紅色熒光，由此檢測抗原或抗體并定位。此方法稱熒光抗原（抗體）法。以熒光抗體方法較為常見。直接法:用已知特異性抗體與熒光素結合，制成特異性熒光抗體。直接用于組織抗原的檢查。常用于腎穿和病原體的檢查。間接法：

是直接法的重要改進。先用特異性抗體（一抗）與組織標本反應，再用間接熒光抗體（二抗）與結合在抗原的抗體結合，形成抗原－抗體－熒光抗體的復合體。是熒光亮度增強，靈敏性高，目前應用廣泛。檢測操作流程(直接法）

在制備或購得高質量的熒光抗體的前提下，可按直接法進行如下的操作：1.細胞爬片、涂片經丙酮固定10min后進入PBS充分洗滌；石蠟切片脫蠟入水后，0.1%胰蛋白酶消化40min左右入PBS洗滌。2.適當稀釋的熒光抗體于濕盒內370C環(huán)境下孵育50min。3.PBS洗3×3min。4.0.1%伊文氏蘭襯染3min。5.蒸餾水洗，水溶性封固劑封片。切片的觀察及保存

染色好的標本應立即在熒光顯微鏡下進行觀察異硫氰酸熒光黃（FITC）為黃綠色熒光；四乙基羅達明（BR200)為明亮橙色熒光；四甲基異硫氰基羅丹明（TRITC)為橙紅色熒光；CY3為鮮紅色熒光。隨著時間的推移及觀察次數的增加，熒光逐漸減弱。12小時后衰減25％，一周后衰減60％。壞死和凋亡的比較：綠色細胞為凋亡；紅色細胞為壞死第三節(jié)免疫酶細胞化學技術免疫酶細胞化學技術（immunoenzymecytochemistrytechnique）是在抗原抗體特異性反應的前提下，借助酶細胞化學原理探測細胞內抗原或抗體及其存在部位的一門技術。該方法將抗原抗體的免疫反應與酶的高效催化作用原理有機地結合，通過酶催化底物進而發(fā)生一系列的化學反應，使溶液呈現出顏色反應，從而顯示抗原抗體特異性反應的存在。

方法：按照酶是否預先與抗體結合在一起可分為酶標抗體法和非標記抗體酶法常用的標記酶依次為：辣根過氧化物酶（horseradishperoxidase，HRP）、堿性磷酸酶（alkalinephosphatase，ALP）、葡萄糖氧化酶（glucoseoxidase，GOD）。酶的成色反應取決于產生不同色素的底物（如DAB）及適當的反應條件。免疫酶直接法免疫酶間接法（一）直接法：用酶（如HRP）標記的特異性抗體（一抗）直接與標本中的相應抗原結合，形成抗原—抗體—HRP復合物，最后用酶底物DAB—H2O2（二胺基聯苯胺）呈現棕色或深棕色產物。優(yōu)點：簡單、省時、特異性高、非特異性染色較輕；缺點：敏感性差。（二）間接法：先用未標記的特異性抗體（一抗）與標本中相應的抗原反應，再

用酶標記的“抗抗體”（二抗）與已形成抗原抗體復合物的第一抗體分子反應，然后再進行顯色反應。優(yōu)點：用途廣泛，只要標記一種抗體，就可以檢測多種抗原。一般免疫組化多采用此法。

上述免疫酶直接法和間接法屬酶標抗體法。酶底物顯色劑DABBCIP-NBTAECNewFuchsin卡巴唑（三）過氧化物酶抗過氧化物酶復合物法（peroxidase—antiperoxidase，PAP）此種方法屬非標記抗體酶法（抗酶抗體法）。由于在酶標記過程中，酶與抗體之間的結合損害部分抗體和酶的活性，降低了抗體的效價。另外，血清中非特異性抗體也可被酶標記，增加非特異性背景染色。因此，在酶標記的基礎上，發(fā)展了不標記抗體的免疫酶技術。

此方法先用酶（HRP）制成高效價特異性抗體，再將酶與抗酶抗體形成復合物（PAP復合物）。此復合物穩(wěn)定性好，靈敏度高。可以避免酶標過程中酶和抗體的減弱。基本染色流程：抗原抗體結合后，依次滴加第二抗體和PAP復合物，最終形成抗原—特異性一抗—第二抗體—PAP復合物PAP法原理第四節(jié)親和免疫細胞化學親和免疫細胞化學技術（affinitycytochemistytechnique）是利用兩種物質之間的高度親和能力而互相結合的化學反應。此種具有高度親和能力的物質是卵白素—生物素。生物素（biotin）即維生素H。卵白素（avidin）稱抗生物素，具有4個與維生素H親和力極高的結合點，他們之間的親和力比抗原抗體的親和力高100萬倍，既能牢固結合以又不影響彼此生物活性。稱抗生物素—生物素系統(tǒng)。其技術方法有：①抗生物素—生物素—過氧化物酶復合法(avidin-biotinperoxidasecomplextechnique,ABC法)、②標記生物素—抗生物素法(labelledavidin-biotintechnique,LAB)、③鏈霉抗生物素蛋白-過氧化物酶連接法(streptavidin-peroxidasecomplex,SP)等。

ABC復合物是將過氧化物酶結合在生物素上，再將生物素-過氧化物酶連接物與過量的抗生物素蛋白反應而制備。將抗生物素分別連接生物素標記的第二抗體和生物素標記的酶，第一抗體為非標記抗體，生物素標記的二抗與ABC復合物相連接，最后進行顯色反應定位。

ABC法

一、抗生物素—生物素—過氧化物酶復合法（ABC）原理特點：1.敏感性高:比PAP法高20-40倍,這是由于生物素與抗生物素間有較強的結合力。2.特異性強:背景染色淡。3.方法簡便:節(jié)約時間,PAP法需兩天,而ABC法僅需幾小時。ABC-HRP法操作流程1.石蠟切片脫蠟至PBS。2.0.1％－0.05％胰蛋白酶消化30min。3.PBS洗滌。4.0.3％H2O2甲醇液或3％H2O2室溫孵育20min。5.正常動物血清(5-10%)室溫孵育10min。6.不洗，滴加適當稀釋的一抗370C60min或40C過夜。7.生物素標記的第二抗體室溫30-60min8.PBS洗滌。9.ABC復合物1:100－1:150（A和B液于臨用前等量混合）370C60min或40C過夜。10.PBS洗滌。11.DAB-H2O2顯色（鏡檢控制），水洗、復染、封片。二、標記生物素—抗生物素法（LAB）原理

用生物素標記抗體為一抗體，以酶標記抗生物素為第二抗體，經成色反應而顯示抗原物質。特點:方法簡便，但靈敏度低。LAB法操作流程切片在含有1:100生物素標記的第一抗體孵育1h,室溫。PBS洗2次，每次5min。用1：200過氧化物酶標記的抗生物素液孵育45min，水洗。酶呈色反應。三、SP免疫組化染色原理SP法采用生物素標記的第二抗體與鏈霉菌抗生物素蛋白連接的過氧化物酶及基質素混合液來檢測細胞和組織中的抗原。特點:1.高敏感性;2.低背景;3.簡便快速;4.結果穩(wěn)定SP法原理SP法操作流程1、脫蠟至水2、修復抗原3、0.3%過氧化氫室溫10min4、非免疫血清室溫5—30min5、特異性免疫抗體(一抗)37℃60min或4℃過夜6、Biotin—IgG（二抗）37℃30—40min7、Straptavidin—HRP37℃40—50min8、DAB顯色各步間均以PBS液充分洗滌第二代聚合酶兩步法(Envision)DaKOEnvision顯色系統(tǒng)是2001年投入美國市場的，2002年引入中國，它是將二抗和酶通過一個多聚葡聚糖骨架聯接成一個多聚體(Envision)，把傳統(tǒng)的二抗、三抗分別孵育合成一次孵育，由于不再有二抗三抗通過生物素的結合，故整個系統(tǒng)不受內源性生物素的干擾，是一個高敏感性顯色系統(tǒng)。此方法由于簡單、快速、敏感性強且避免了內源性生物素所造成的背景染色，有逐漸取代其他免疫酶組織化學檢測方法的趨勢。Envision法Envision法操作流程1.石蠟切片脫蠟至PBS。2.0.3％H2O2甲醇液或3％H2O2室溫孵育20min。3.抗原修復。4.滴加適當稀釋的一抗370C60min或40C過夜。5.PBS洗滌。6.EnVision370C孵育30min或室溫60min。7.PBS洗滌。8.DAB(0.04%)顯色（鏡檢控制），水洗、復染、封片。何杰金氏淋巴瘤R-S細胞CD30甲狀腺癌CD44v6甲狀腺乳頭狀癌

E-cadherin乳腺浸潤性導管癌PR乙型肝炎HBsAg腦膠質瘤MAP2a&b免疫組化染色應注意免疫組化染色方法已不是什么很難的問題，操作步驟簡單也易掌握,但要染好免疫組化,其中方法的技巧將是每位操作者在實際工作不斷摸索和探討的事,但最基本的應從以下方面加以注意。提高免疫組化敏感性的方法概述：提高免疫組化敏感性有兩種途徑，一是增加IHC方法的敏感性，如二步法較三步法的敏感性較為顯著提高；另一途徑是通過對石蠟切片酶消化和熱處理是IHC檢測敏感性大為提高。抗原熱修復是甲醛固定組織后會使蛋白質的三級結構發(fā)生改變，尤其是蛋白質分子苯環(huán)結構上的結構位置發(fā)生改變，從而使要檢測的抗原決定簇位點改變方向，通過高溫使抗原決定簇的位點恢復。另外，2/3的商品化的抗體需酶消化以暴露抗原決定簇。

抗原修復(antigenretrieval，AR)

其作用是暴露抗原，增加細胞和組織的通透性，以便抗原抗體最大限度的結合，增加特異性染色，避免非特異性染色。目前常用的修復方法有以下幾種。

蛋白酶消化可以去除覆蓋抗原決定簇表面的雜蛋白，更為重要的是因甲醛固定而引起的交聯被打開而起暴露抗原決定簇的作用。目前常用的酶有：胰蛋白酶（主要用于細胞內抗原的修復）；胃蛋白酶（主要用于細胞間質或基底膜抗原的修復）。

熱誘導的抗原修復對大多數抗原有效，尤其是對核抗原的修復作用更為明顯，最常用的抗原修復液是pH6.0的枸櫞酸緩沖液和pH8.0的EDTA緩沖液，它們的作用原理是通過鈉離子的螯合而實現的。熱誘導的抗原修復包括水浴加熱法、微波加熱法、高壓加熱法。

0.01%mol/L枸櫞酸緩沖液，pH6.0（800-1500ml）于壓力鍋中，大火加至沸騰，將脫蠟水化后的切片置于不銹鋼或耐高溫塑料切片架上，放入已沸騰的緩沖液中，蓋上鍋蓋，扣上壓力閥，繼續(xù)加熱至噴汽，即達到工作溫度和工作壓力（扣閥至噴汽以6min為最佳），開始計時，1-2min后，壓力鍋離開熱源，1min后用自來水沖淋鍋體使之冷卻至室溫，去閥開蓋，取出玻片，蒸餾水沖，后用PBS沖三次。高壓加熱法抗原未修復酶消化的比較合適的抗體稀釋度是免疫染色的關鍵，現市場銷售的一抗多為即用型，對抗體的滴度無需摸索，但對濃縮型一抗，則應篩出最佳的滴度。抗體的過高及過低都可影響結果的準確性。應達到最大的抗原染色強度和最低的背景著色。溫育時間大部分抗體溫育時間為30-60min，必要時可4℃過夜(約18h)。溫育的溫度常37℃，也可在室溫中進行，對抗原抗體反應強的以室溫為佳。37℃可增強抗原抗體反應；適用于多數抗體染色，但應注意在溫箱中進行，防止切片干燥而導致失敗。多層染色法對弱的抗原可用間接法(雙層)、PAP和ABC法（三層）、四或五層PAP法或ABC法，或PAP的ABC聯合染色法等，可以較大程度的提高敏感性，獲得良好結果。組織中非抗原抗體反應出現的陽性染色稱為非特異性背景染色，最常見的原因是蛋白吸附于高電荷的膠元和結締組織成分上。最有效方法是在用第一抗體前加第二抗體動物之非免疫血清(1:5-1:20)封閉組織上帶電荷基團而除去與第一抗體非特異性結合。必要時可加入2%-5%牛血清蛋白，可進一步減少非特異性染色。作用時間為10-20min。也可用除制備第一抗體以外的其它動物血清(非免疫的)。有明顯溶血的血清不能用，以免產生非特異性染色。減少或消除非特異性染色的方法

非特異性著色非特異性著色

根據所用的染色方法，可選用適當的復染方法。如陽性結果呈紅或棕色，則用蘇木素將細胞核染成蘭色，以便定位檢測。也可用1%-2%甲基綠復染。復染蘇木精甲基綠

其目的在于證明和肯定陽性結果的特異性，排除非特異性疑問。主要是針對第一抗體對照，常用的對照方法包括：①陽性對照；②陰性對照；③阻斷試驗；④替代對照；⑤空白對照；⑥自身對照；⑦吸收試驗。對照免疫組化染色對照的設計

自身對照

空白對照陰性對照替代對照抑制對照吸收實驗對照

陽性對照自身對照：

在同一切片上，與檢測的目的物對照比較。如Actin、CD34在正常組織中的血管壁肌層應為陽性，Vimentin可選間質細胞。如果應為陽性的組織是陽性，則技術操作正確，如為陰性，則表明技術或免疫試劑質量有問題。陽性對照用已知抗原陽性的標本與待檢標本同時進行免疫細胞化學染色，對照切片應呈陽性結果，稱為陽性對照。證明全過程均符合要求，尤其當待檢標本呈陰性結果時，陽性對照尤為重要。陰性對照1.用確證不含已知抗原的標本作對照，呈陰性結果。2.空白對照：用緩沖液替代一抗。3.替代對照：用非免疫血清替代一抗。當待檢標本呈陽性結果時，陰性對照就更重要，用以排除假陽性。假陽性：

組織成分與染色試劑及抗血清之間的非特異結合稱假陽性。如細胞漿內存在的內源性過氧化物酶能夠與DAB-H2O2反應，導致假陽性。因此，最好做內源性過氧化物酶阻斷。對免疫細胞化學結果的判斷應持科學的慎重態(tài)度，要準確判斷陽性和陰性，排除假陽性和假陰性結果，必須嚴格對照實驗，對新發(fā)現的陽性結果，除有對照試驗結果外，應進行多次重復實驗，要求用幾種方法進行驗證，如用PAP法陽性，可再用ABC法驗證。必須學會判斷特異性染色和非特異性染色，對初學者更為重要，否則會得出不科學的結論。免疫細胞化學結果的判斷

陽性細胞的染色特征免疫細胞化學的呈色深淺可反映抗原存在的數量，可作為定性、定位和定量的依據。陽性細胞染色分布有三種類型

①胞漿；②細胞核；③細胞膜表面。大部分位于胞漿；灶性或彌漫性；由于細胞內抗原量不同，染色強度也不一；陽性細胞定位于單個細胞，與陰性細胞交織分布；切片邊緣、刀痕處染色強度加深，不能用于判斷陽性。Rb2/P130

有兩種方法：一是對檢測結果陽性細胞指數來定性。判斷方法是以一個視野中的陽性細胞數與總細胞的百分比，再取10個相同視野算去平均數。另一種方法是以染色陽性強度和陽性檢出率相結合而定，一般陽性細胞數在0—25%為陰性，25—50%為陽性+，50—75%為陽性++，75%以上為陽性+++。第二種方法易出現人為誤差。用圖像分析系統(tǒng)進行結果檢測的定量分析更為準確。

結果統(tǒng)計：實驗設計

根據課題要求，通過查閱文獻選出具有代表意義的較新的抗體，通過合適的聯系方式確定抗體的出處，購買方式及到貨日期。在每次染色或每一批染色前，都應列出實驗計劃，做好免疫組化標記記錄單，拿到的任何一種抗體都應首先進行預實驗，以確定正式實驗中抗原的修復方式、抗體的最佳稀釋度及孵育時間等，然后才能進行大批的實驗。強化節(jié)能減排實現綠色發(fā)展內容覽要節(jié)能減排，世界正在行動為什么要節(jié)能減排什么是節(jié)能減排節(jié)能減排，我們正在行動0502010403目錄CONTENTS一、什么是節(jié)能減排

在《中華人民共和國節(jié)約能源法》中定義的節(jié)能減排，是指加強用能管理，采取技術上可行、經濟上合理以及環(huán)境和社會可以承受的措施，從能源生產到消費的各個環(huán)節(jié)，降低消耗、減少損失和污染物排放、制止浪費，有效、合理地利用能源。從具體意義上說，節(jié)能，就是降低各種類型的能源品消耗；減排，就是減少各種污染物和溫室氣體的排放，以最大限度地避免污染我們賴以生存的環(huán)境。二、為什么要節(jié)能減排1、節(jié)能減排是緩解能源危機的有效手段

當下，能源危機迫在眉睫，國外有關機構的統(tǒng)計結果顯示：2010年中國的能源消耗超過美國，成為全球第一。2011年2月底，中國能源研究會公布最新統(tǒng)計數據顯示，2010年我國一次能源消費量為32.5億噸標準煤，同比增長6%，超過美國成為全球第一能源消費大國。統(tǒng)計數據稱，2010年中國一次能源消費量為24.32億噸油當量，同比增長11.2%，占世界能源消費總量的20.3%。美國一次能源消費量為22.86億噸油當量，同比增長3.7%，占世界能源消費總量的19.0%。

根據全球已探明傳統(tǒng)能源儲量測算，按照當前能源消耗增長速度，傳統(tǒng)的石化燃料（煤、石油、天然氣）已經不夠人類再使用一百年。目前新能源的開發(fā)利用方興未艾，2010年全球有23%的能源需求來自再生能源，其中13%為傳統(tǒng)的生物能，多半用于熱能（例如燒柴），5.2%是來自水力，來自新的可再生能源（小于20MW的水力，現代的生物質能，風能，太陽，地熱等）則只有4.7%。在再生能源發(fā)電方面，全球來自水力的占16%，來自新的再生能源者占5%。如果我們不對現有能源和資源節(jié)約使用，按照目前情況持續(xù)下去，有可能百年之后，人類將會部分進入一個“新石器時代”。2節(jié)能減排是保護自然生態(tài)環(huán)境的強力武器

這就是我們美麗的太陽系概念圖從太空中拍攝到的蔚藍色的精靈——地球如詩如畫的鄉(xiāng)間美景，逸趣橫生的勞動生活！

這幾乎就是我們每個人為之向往的家園！

然而我們目前不得不面對的卻是自然生態(tài)環(huán)境的日益惡化！

“溫室氣體大量排放，發(fā)生溫室效應，造成全球變暖，這已是不爭的事實！”目前，在各種溫室氣體中，二氧化碳對溫室效應的影響約占50%，而大氣中的二氧化碳有70%是燃燒石化燃料排放的。我們可以了解到冰川融化、海平面上升、干旱蔓延、農作物生產力下降、動植物行為發(fā)生變異等氣候變化帶來的影響。我國最近兩年干旱頻發(fā)，有相當部分原因是受到全球氣候變化問題的影響，而這也是我們目前面臨的最復雜、最嚴峻的挑戰(zhàn)之一。長江江西九江段裸露出來的江灘湘江長沙橘子洲以西河床（2009年）江西贛江南昌段裸露的橋墩（2009年）溫室效應導致氣候變化，打破降雨平衡，旱澇頻發(fā)洪水泛濫——當大自然露出鋒利的爪牙，

我們才發(fā)現自己原來是如此脆弱，不堪一擊！溫室效應導致冰川融化

北極熊等極地生命形態(tài)遭遇嚴重的生存危機受世界氣候變化影響，曼谷遭遇洪水

溫室效應導致的冰川融化還將造成海平面升高的后果，它將直接威脅到沿海國家以及30多個海島國家的生存和發(fā)展。美國環(huán)保專家的預測更令人擔憂，再過50年～70年，巴基斯坦國土的1/5、尼羅河三角洲的1/3以及印度洋上的整個馬爾代夫共和國，都將因海平面升高而被淹沒；東京、曼谷、上海、威尼斯、彼得堡和阿姆斯特丹等許多沿海城市也將完全或局部被淹沒。

目前，在溫室氣體排放方面，我們國家正保持領先優(yōu)勢并有繼續(xù)將其擴大的趨勢！！！

馬爾代夫倒計時：預計將于90年內被海水淹沒。原因：全球變暖導致海平面上升.

馬爾代夫是一個群島國家，80%是珊瑚礁島，全國最高的兩座島嶼距離海平面只有2.4米。因此，它也是受到全球變暖影響最嚴重的國家.在過去一個世紀里，該國家海平面上升了約20厘米，根據聯合國政府間氣候變化問題研究小組的報告，2100年全球海平面有可能升高0.18米至0.59米。屆時，馬爾代夫將面臨滅頂之災。太平洋上的一顆美麗的翡翠——馬爾代夫澄澈的碧藍海水上徜徉著白云——這就是人間天堂婆娑的椰樹，潔白的沙灘，舒適的躺椅

圖瓦盧倒計時：預計將于未來50至100年消失。原因：氣候變暖導致海平面上升.

這個由9座環(huán)形珊瑚島群組成、平均海拔1.5米的小國家每逢二三月大潮期間，就會有30%的國土被海水淹沒。近20年來，這些由珊瑚礁形成的海島已被海水侵蝕得千瘡百孔，土壤加速鹽堿化，糧食和蔬菜已很難正常生長。事實上，圖瓦盧人從2001年就已開始陸陸續(xù)續(xù)地告別自己的國家，遷往美國、新西蘭等國。澳大利亞大堡礁倒計時：20年消失原因：全球變暖和人為破壞大堡礁1981年被列入自然類世界遺產，支撐著規(guī)模巨大的旅游業(yè)。然而，自上世紀80年代以來，由于全球變暖導致海洋酸性增加以及人為破壞，珊瑚漸漸在人們的視線中消失。海洋學家查利·沃隆今年7月公布的一份報告指出，全球氣候變暖將在短短20年時間內讓大堡礁蕩然無存。

美麗的澳大利亞大堡礁大堡礁色彩繽紛的美麗珊瑚礁和魚群大堡礁的明星——與海葵共生的小丑魚

南北極倒計時：50年消失原因：全球變暖導致冰帽融化溫室效應造成全球氣溫升高已經使得兩極冰帽開始融化，冰帽融化不僅直接沖擊當地的生態(tài)環(huán)境，使現存的南北極生物面臨滅絕，南北極也漸漸消亡。全球海平面上升，許多低洼地區(qū)的國家甚至會因此而被淹沒。以上幾個現實中正在慢慢被證實的例子，已經為我們敲響了最刺耳的警鐘，如果我們再不及時采取強有力的措施，那么，后果將不堪設想。我們，需要盡可能為子孫后代留下一個相對較好的生存環(huán)境，這是我們每個人義不容辭的責任！【開普勒-22b】科學家用開普勒望遠鏡發(fā)現首顆適合居住星球美國航空航天局（NASA）12月5日宣布，該局通過開普勒太空望遠鏡項目證實了太陽系外第一顆類似地球的、可適合居住的行星。報道稱，NASA表示，科學家們利用開普勒太空望遠鏡在距地球約600光年的一個恒星系統(tǒng)中新發(fā)現了一顆宜居行星。該行星被命名為“開普勒-22b”，半徑約為地球半徑的2.4倍，這是目前被證實的最接近地球形態(tài)的行星。目前，該行星的主要成分尚不清楚，繞恒星運行的周期約為290個地球日。這顆行星圍繞運轉的母恒星比太陽略小、略冷，但和太陽一樣屬于比較穩(wěn)定、壽命比較長的恒星。因此，這也是首次在與太陽系類似的恒星系統(tǒng)中發(fā)現宜居行星。最新發(fā)現的行星“不冷不熱”，溫度大約為22.2℃，正好適合人類居住。此外，這顆行星上還可能有液態(tài)水，而液態(tài)水被科學家視為生命存在的關鍵指標。據悉，相關研究成果將發(fā)表在美國《天體物理學》雜志上。各種水體污染繼續(xù)加劇，“清流”變“濁流”超標排放造成河流的污染，導致大量魚類死去，仍存活的魚類體內也富集了數量不一的各類有害物質酸性氣體超標排放導致酸雨形成酸雨頻降導致嚴重污染

以下是全國酸雨分布示意圖我國三大酸雨區(qū)包括(我國酸雨主要是：硫酸型）1.西南酸雨區(qū)：是僅次于華中酸雨區(qū)的降水污染嚴重區(qū)域。2.華中酸雨區(qū)：目前它已成為全國酸雨污染范圍最大，中心強度最高的酸雨污染區(qū)。3.華東沿海酸雨區(qū)：它的污染強度低于華中、西南酸雨區(qū)。我國酸雨主要分布地區(qū)是長江以南的四川盆地、貴州、湖南、湖北、江西，以及沿海的福建、廣東等省。在華北，很少觀測到酸雨沉降，其原因可能是北方的降水量少，空氣濕度低，土壤酸度低。然而值得注意的是北方如侯馬、京津、丹東、圖們等地區(qū)現在也出現了酸性降水。酸雨危害是多方面的，包括對人體健康、生態(tài)系統(tǒng)和建筑設施都有直接和潛在的危害。酸雨還可使農作物大幅度減產，特別是小麥，在酸雨影響下，可減產13%至34%。大豆、蔬菜也容易受酸雨危害，導致蛋白質含量和產量下降。酸雨對森林和其他植物危害也較大，常使森林和其他植物葉子枯黃、病蟲害加重，最終造成大面積死亡。空氣中的二氧化硫先與空氣中的氧氣反應生成三氧化硫，再與氫離子結合生成濃硫酸，濃硫酸再與水反應生成酸雨。酸雨具有腐蝕性，人體遇到酸雨很容易得皮膚癌。被酸雨毀壞的叢林，其危害超乎想象受到酸雨腐蝕影響的樂山大佛

長明燈、長流水等現象屢見不鮮，這些瑣碎的細節(jié)造成了當今社會能源、資源的大量浪費。3節(jié)能減排是改善日常能源和各種資源浪費嚴重的有力措施長流水現象隨處可見

在此，我想向各位在此通報我們各類資源占有率：我國水資源總量占世界水資源總量的7%，居第6位。但人均占有量僅有2400m3，為世界人均水量的1/4，居世界第119位，是全球13個貧水國之一;我國森林面積為15894．1萬公頃，全國森林覆蓋率達到16．55％，居世界首位，但人均森林蓄積量只有世界人均蓄積量的1／8;當前，我國天然氣產量僅居世界第19位，占世界總產量的1%，消費量排名在世界第20位以后；消費量是世界總量的0.9%。節(jié)能減排對大至國家、小至個人都是很有意義的一件事情！

首先，國家在節(jié)能減排政策方面不斷出臺各種強制性政策，不斷提高對各類企業(yè)節(jié)能減排組織機構與能力建設的要求；其次，中央和地方政府大幅度增加節(jié)能減排方面的財政預算,在稅收、價格等方面有各種激勵機制，激發(fā)企業(yè)節(jié)能減排的熱情；再次，自主節(jié)能減排可以企業(yè)降低生產經營成本，具有非常直觀的經濟效益；最后，節(jié)能減排是衡量一個企業(yè)是不是一個有強烈社會責任意識的優(yōu)秀企業(yè)的重要標準（即你所在的企業(yè)是否受人尊重）。4節(jié)能減排與企業(yè)的發(fā)展休戚相關

總之，種種事實向我們說明了節(jié)能減排工作的必要性和迫切性！！！而節(jié)能減排目標的實現，也涉及生產、生活、建設、流通和消費等各個環(huán)節(jié)，關系各行各業(yè)、社會各界和我們自己的切身利益，所以，在公在私，我們都要充分調動各方面參與這項工作的積極性，全社會動員，全民參與，實施節(jié)水、節(jié)油、節(jié)煤、節(jié)電、節(jié)地等等，使節(jié)能減排成為每個企業(yè)、每個社區(qū)、每個單位、每個學校、每個家庭、每個社會成員的自覺行動，這是非常必要的。三節(jié)能減排世界正在行動世界各國和各相關組織機構的行動計劃1、各國從政策律例上為節(jié)能減排加大支持力度，很多國家都把節(jié)能減排納入企業(yè)管理的一個強力約束指標。2、全球相關組織發(fā)起積極行動“地球1小時”是世界自然基金會向全球發(fā)出的一項倡議，呼吁個人、社區(qū)、企業(yè)和政府在每年3月份的最后一個星期六熄燈1小時，以此來激發(fā)人們對保護地球的責任感，以及對氣候變化等環(huán)境問題的思考，表明對全球共同抵御氣候變暖行動的支持。參加活動的法國巴黎艾菲爾鐵塔燈光對比的圖景英國積極響應“地球一小時”熄燈活動，圖為倫敦的大本鐘燈光明滅對照四節(jié)能減排我們正在行動1

.節(jié)能減排，國家在行動

在政策方面，國家財政十大措施支持新能源與節(jié)能減排：一是大力支持風電規(guī)模化發(fā)展，建立比較完善的風電產業(yè)體系；二是實施“金太陽”工程，加快啟動國內光伏發(fā)電市場；三是開展節(jié)能與新能源汽車示范推廣試點，鼓勵北京、上海等13個城市在公交、出租等領域推廣使用；四是加快實施十大重點節(jié)能工程，鼓勵合同能源管理發(fā)展；五是加快淘汰落后產能，對經濟欠發(fā)達地區(qū)淘汰電力、鋼鐵等13個行業(yè)落后產能給予獎勵；

六是支持城鎮(zhèn)污水管網建設，推進污水處理產業(yè)化發(fā)展；七是支持生態(tài)環(huán)境保護和污染治理，加大重點流域水污染治理，促進企業(yè)加強污染治理，加強農村環(huán)境保護，探索跨流域生態(tài)環(huán)境補償機制；八是實施“節(jié)能產品惠民工程”，擴大節(jié)能環(huán)保產品使用和消費；九是支持發(fā)展循環(huán)經濟，全面推行清潔生產；十是支持節(jié)能減排能力建設，建立完善能效標識制度，節(jié)能統(tǒng)計、報告和審計制度，加強環(huán)境監(jiān)管能力建設。

出臺十二五節(jié)能減排規(guī)劃，作為十二五發(fā)展重要考核指標之一，計劃在“十二五”期間，全國31個省市自治區(qū)被分為5類地區(qū)，每類地區(qū)確定一個節(jié)能指標，其單位GDP能耗降低率分為10%—18%。“十二五”期間和今年我國工業(yè)節(jié)能減排四大約束性指標：單位工業(yè)增加值能耗、二氧化碳排放量和用水量分別要比“十一五”末降低18%、18%以上和30%，工業(yè)固體廢物綜合利用率要提高到72%左右；今年這四項指標同比要分別降低4%、4%以上和7%左右以及提高2.2個百分點。十二五期間，SO2、COD排放總量要比“十一五”末分別減少10%和5%。

我國在節(jié)能減排各項相關體系構建上日益嚴密，約束力和影響力日益凸顯！--節(jié)約型的生產體系、消費體系建設加快；--政策保障體系“三管齊下”，形成比較完善的節(jié)能政策保障體系（法律、行政、經濟）；--技術支撐體系：節(jié)能技術創(chuàng)新的能力不斷提高，節(jié)能產品層出不窮，節(jié)能成為一些企業(yè)“創(chuàng)品牌”的亮點；--監(jiān)督管理體系：管理節(jié)能的部門和機構不斷增多、級別不斷提高，隊伍不斷壯大，能力不斷提高：（首長負責、中央和地方成立新機構、新鮮血液）

為此，我國還專門制定并推廣十大重點節(jié)能工程，它包括：節(jié)約和替代石油、燃煤工業(yè)鍋爐（窯爐）改造、區(qū)域熱電聯產、余熱余壓利用、電機系統(tǒng)節(jié)能、能量系統(tǒng)優(yōu)化、建筑節(jié)能、綠色照明、政府機構節(jié)能以及節(jié)能監(jiān)測和技術服務體系建設工程。綜上所述，我們可以看到國家在節(jié)能減排方面的決心和投入是多么的堅決，這一點是非常可喜的！2節(jié)能減排，我們自己在行動從之前的實例表明，節(jié)能減排與國家、企業(yè)息息相關，同時與我們自身也是密不可分的。因為我們每個人都是節(jié)能減排這項很有意義的工作執(zhí)行者，只有當我們每個人都具備強烈的節(jié)能減排意識和責任心的時候，節(jié)能減排這項工作的開展才算是有了最廣泛、最強大的基礎和平臺，才會達到或者超出預期的效果。事實上，節(jié)能減排對我們的工作現實生活也有非常重要的作用——一方面能提高我們的工作質量和個人素養(yǎng)，另一方面還可以節(jié)約生活成本，暢享低碳生活！

通過對之前幾個節(jié)能減排項目的介紹，我們可以看到，節(jié)能減排其實并不神秘，很多可以實施的項目就在我們身邊以各種形式存在著，它可以是對原有放空蒸汽的回收利用，可以是對冷凝液四處橫流浪費現象的有效解決，可以是工藝操作法方面的改進，可以是對設備自身問題的優(yōu)化解決，等等。然而我們要認識到，盡管我們身邊存在不少需要優(yōu)化改進的問題，但是能否發(fā)現并解決這些問題則取決于我們自身的技術水平、工作思路和責任心是否到位，而這三個方面是直接2.1樹立和增強節(jié)能減排意識有利于我們提高自身的工作質量、個人素養(yǎng)以及未來的發(fā)展

決定我們的工作質量和個人綜合素養(yǎng)的高低的重要因素，并會最終影響到個人未來的發(fā)展。換句話說，節(jié)能減排工作開展質量的高低，可以在某種程度上直接反映個人工作能力的高下！從現在起，如果你是班長或巡檢員，那么，請你保持細致敏感、善于發(fā)現問題的心態(tài)，把自己責任范圍內的所有工藝問題匯總起來，與技術員和廠領導一起去討論、解決，然后你就會發(fā)現這非常有利于你的技術水平和綜合素質的全面提高，如果你又一顆強烈的進取心，那么還有什么理由不用心去做好節(jié)能減排工作呢？2.2節(jié)能減排可以節(jié)約生活成本，暢享低碳生活

我們通過以下方面可以培養(yǎng)良好的節(jié)能習慣：1、合理使用空調如果每臺空調在國家提倡的26℃基礎上調高1℃,每年可節(jié)電22度,相應減排二氧化碳21千克.如果對全國1.5億臺空調都采取這一措施,那么每年可節(jié)電約33億度,減排二氧化碳317萬噸.如果全國每年10%的空調更新為節(jié)能空調,那么可節(jié)電約3.6億度,減排二氧化碳35萬噸.2、節(jié)能裝修如果全國每年2000萬戶左右的家庭裝修能做到減少1千克裝修用鋁材和鋼材，節(jié)約使用0.1立方米裝修用的木材和1平方米建筑陶瓷,那么可節(jié)能約100萬噸標準煤,減排二氧化碳220萬噸.3、采用節(jié)能方式洗衣如果選用節(jié)能洗衣機每月用手洗代替一次機洗，每年少用1千克洗衣粉,那么每年可節(jié)能約50萬噸標準煤,減排二氧化碳120萬噸.4、減少糧食浪費

"誰知盤中餐,粒粒皆辛苦",可是現在浪費糧食的現象仍比較嚴重.而少浪費0.5千克糧食(以水稻為例),可節(jié)能約0.18千克標準煤,相應減排二氧化碳0.47千克.如果全國平均每人每年減少糧食浪費0.5千克,每年可節(jié)能約24.1萬噸標準煤,減排二氧化碳61.2萬噸.

5、節(jié)約用水可以用淘米水去洗碗或者澆花。沖洗衣服時，可以加入少量肥皂粉，因為洗衣粉遇到肥皂會減少很多泡沫，既省水又節(jié)約清洗的時間。洗臉、洗手用小臉盆接住水，然后倒進大桶收集起來。洗手、洗澡、洗衣、洗菜的水和較干凈的洗碗水，都可以收集起來洗抹布、擦地板、沖馬桶。刷牙時要用多少水就盛多少水，不要開著水龍頭讓水一直流個不停。

6.節(jié)約照明用電注意隨手關燈。使用高效節(jié)能燈泡。美國的能源部門估計，單單使用高效節(jié)能燈泡代替?zhèn)鹘y(tǒng)電燈泡，就能避免四億噸二氧化碳被釋放。節(jié)能燈最好不要短時間內開關，節(jié)能燈在開關時是最耗電的，對于保險絲的損傷也是最大的。白天可以干完的事不留著晚上做，洗衣服、寫作業(yè)在天黑之前做完。早睡早起有利于身體健康，又環(huán)保節(jié)能。

7、低碳烹調法盡量節(jié)約廚房里的能源。食用油在加熱時產生致癌物，并造成油煙污染居室環(huán)境。減少烹炸的菜肴。

如果我們的節(jié)能減排工作做到位了，那么，你就會享受到低碳生活帶來的種種好處：居家更溫暖——建筑節(jié)能改造，提高室溫5-7℃交通更便利——地鐵、公共車、城際高速鐵路家庭支出更少——綠色照明、節(jié)能產品惠民政策購買高效節(jié)能產品更便宜——以舊換新、惠民工程我們賴以生存的天更藍、水更綠、空氣更清新！

節(jié)能減排，讓我們用明天的視野設計今天的工程！在此處添加演示文稿標題在此處添加演示文稿正文在此處添加演示文稿正文在此處添加演示文稿正文強化節(jié)能減排謝謝！實現綠色發(fā)展！單擊此處添加副標題內容蛋白質-能量營養(yǎng)障礙了解營養(yǎng)不良和肥胖均是營養(yǎng)平衡紊亂所致綜合征；熟悉營養(yǎng)不良和肥胖癥的病因和病理生理；掌握營養(yǎng)不良和肥胖癥的臨床表現和診斷標準；掌握營養(yǎng)不良和肥胖癥的防治原則。目的和要求

蛋白質-能量營養(yǎng)不良

protein-energymalnutrition,PEM蛋白質-能量營養(yǎng)不良是由于缺乏能量和/或蛋白質所致的一種營養(yǎng)缺乏癥，主要見于3

歲以下嬰幼兒。臨床上以體重明顯減輕，皮下脂肪減少和皮下水腫為特征，常伴有各器官系統(tǒng)的功能紊亂。急性發(fā)病者常伴有水、電解質紊亂，慢性者常有多種營養(yǎng)素缺乏。定義消瘦型：能量供應不足為主浮腫型：蛋白質供應不足為主浮腫-消瘦型：兩者兼有臨床類型長期攝入不足—喂養(yǎng)不當

母乳不足，未及時添加富含蛋白質的食品；人工喂養(yǎng)調配不當；驟然斷奶，輔食添加不及時、不恰當；長期以淀粉類食物喂養(yǎng)；不良的飲食習慣；

病因消化吸收不良

消化系統(tǒng)解剖異常：如唇裂、腭裂、幽門梗阻、腸旋轉不良等；

消化系統(tǒng)功能異常：如遷延性腹瀉、過敏性腸炎、腸吸收不良綜合征等；病因需要量增加

急慢性傳染病恢復期；生長發(fā)育快速階段；疾病使營養(yǎng)素消耗過多；先天不足、營養(yǎng)基礎差（早產、雙胎）病因新陳代謝異常各系統(tǒng)功能低下病理生理

蛋白質低蛋白血癥水腫

攝入不足脂肪膽固醇↓、脂肪肝消瘦、皮下脂肪↓、消失消化吸收不良營養(yǎng)不良碳水化合物血糖偏低昏迷

水、鹽代謝細胞外液↑低滲脫水低鈉、低鉀需要增加體溫調節(jié)體溫偏低系統(tǒng)功能低下

貧血消化系統(tǒng)消化液↓消化吸收功能↓維生素缺乏系消化酶↓腹瀉統(tǒng)循環(huán)系統(tǒng)心臟收縮力↓血壓偏低、脈細弱功能泌尿系統(tǒng)尿重吸收↓多尿、低比重尿低下神經系統(tǒng)腦細胞數↓表情淡漠、反應遲鈍、記成分改變憶力減退、條件反射不易建立、精神抑郁間伴煩躁不安免疫系統(tǒng)胸腺、淋巴結特異性免疫功能↓容易脾臟、扁桃體、非特異性免疫功能↓感染腸、闌尾等淋巴組織萎縮

系統(tǒng)功能低下體重：不增（早期表現）→下降皮下脂肪厚度：是判斷營養(yǎng)不良程度的重要指標之—減少→消失腹部→軀干→臀部→四肢→面部身高：不長→低于正常

臨床表現皮膚干燥、蒼白→彈性差→肌肉萎縮→

老人狀、“皮包骨”精神乏力→萎靡→反應遲鈍；食欲下降→腹瀉與便秘交替；其它：浮腫（凹陷性），體溫低，BP↓

肌張力↓臨床表現營養(yǎng)性貧血：小細胞低色素貧血最常見多種維生素缺乏：維生素A缺乏（角膜渾濁、潰瘍）微量元素缺乏：鋅繼發(fā)各種感染：反復呼吸道感染、反復腹瀉等自發(fā)性低血糖：要警惕，多在凌晨發(fā)生并發(fā)癥血清白蛋白濃度：代謝周期短的蛋白濃度下降有早期診斷價值IGF-I(胰島素樣生長因子1)下降作為診斷蛋白質營養(yǎng)不良指標牛磺酸、必需氨基酸↓，非必需氨基酸無變化實驗室檢查淀粉酶、脂肪酶、轉氨酶、胰酶、嘌呤氧化酶活力均↓膽固醇、電解質、微量元素濃度下降生長激素水平升高

-經治療后以上項目可恢復正常值實驗室檢查診斷依據：年齡：多見于<3歲嬰兒；喂養(yǎng)史；體重不增，反而下降；皮下脂肪少，注意順序規(guī)律；全身相應各系統(tǒng)紊亂；合并癥存在。診斷體重低下(underweight)：慢性或急性營養(yǎng)不良體重低于同年齡、同性別參照人群的均值減2SD以下；中度：體重低于同年齡、同性別參照人群的均值減2SD～3SD；重度：體重低于同年齡、同性別參照人群的均值減3SD以下

分型與分度生長遲緩（stunting）：慢性長期營養(yǎng)不良身長低于同年齡、同性別的參照人群的均值減2SD以下；中度：身長低于同年齡、同性別的參照人群的均值減2SD～3SD；重度：身長低于同年齡、同性別的參照人群的均值減3SD以下分型與分度消瘦（wasting）：近期、急性營養(yǎng)不良體重低于同性別、同身高的參照人群的均值減2SD；中度：體重低于同性別、同身高的參照人群的均值減2SD～3SD；重度：體重低于同性別、同身高的參照人群的均值減3SD以下分型與分度

根據能量缺乏為主、還是蛋白質缺乏為主進行分型：消瘦型：以能量缺乏為主，可進一步分度浮腫型：以蛋白質缺乏為主消瘦-浮腫型臨床類型處理危及生命的并發(fā)癥：脫水、酸中毒、電解質紊亂、休克、低血糖等祛除病因：積極治療原發(fā)病，如糾正畸形、控制感染、改進喂養(yǎng)方式。調整飲食：應由少至多，循序漸進，不可操之過急，否則會引起消化不良。治療輕度：250～330kJ/kg.d（60～80Kcal/kg.d開始；中、重度：165～230kJ/kg.d(40～

55Kcal/kg.d開始->逐步少量增加，漸加至500～727kJ/kg.d(120～170Kcal/kgkg.d；蛋白質從1.5～2g/kg開始逐漸->3.0～4.5g/kg。豐富的維生素和微量元素食物。促進消化,改善消化功能

藥物：B族維生素，胃蛋白酶，胰酶蛋白質同化類固醇制劑（苯丙酸諾龍10～25mg/次，每周1～2

次，連用2～3周）胰島素（2～3U/次/天，1～2周一療程）鋅制劑中醫(yī)治療：其他：成分輸血、靜脈營養(yǎng)等合理喂養(yǎng)：母乳喂養(yǎng)、及時添加輔食、正確選用代乳品、糾正不良飲食習慣合理安排生活作息制度：防治傳染病和先天畸形：推廣應用生長發(fā)育監(jiān)測圖：預防1強化節(jié)能減排實現綠色發(fā)展CONTENTS01什么是節(jié)能減排02為什么要節(jié)能減排03節(jié)能減排，世界正在行動04內容覽要05節(jié)能減排，我們正在行動目錄一、什么是節(jié)能減排

在《中華人民共和國節(jié)約能源法》中定義的節(jié)能減排，是指加強用能管理，采取技術上可行、經濟上合理以及環(huán)境和社會可以承受的措施，從能源生產到消費的各個環(huán)節(jié)，降低消耗、減少損失和污染物排放、制止浪費，有效、合理地利用能源。

從具體意義上說，節(jié)能，就是降低各種類型的能源品消耗；減排，就是減少各種污染物和溫室氣體的排放，以最大限度地避免污染我們賴以生存的環(huán)境。二、為什么要節(jié)能減排1、節(jié)能減排是緩解能源危機的有效手段

當下，能源危機迫在眉睫，國外有關機構的統(tǒng)計結果顯示：2010年中國的能源消耗超過美國，成為全球第一。2011年2月底，中國能源研究會公布最新統(tǒng)計數據顯示，2010年我國一次能源消