藥理實驗方法學(xué)肝纖維化南京中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院鄭仕中教授、博導(dǎo)2009年AASLD(mnassociationforthestudyofliverdi主席、美國西奈山醫(yī)學(xué)院肝病研究中心主任弗里德曼(Fredman)教授在專題會上介紹了肝纖維化模型的研究歷史和進展。肝纖維化主要的模型包括動物模型和體外模型目前的肝纖維化動物模型可模仿人肝硬化發(fā)生過程,是研究肝硬化發(fā)病機制和藥物療效的重要方法。肝纖維化是肝臟對各種原因所致肝損傷的創(chuàng)傷愈合反應(yīng),表現(xiàn)為肝內(nèi)結(jié)締組織增生與沉積,是慢性肝病重要的病理特征也是進一步向肝硬化發(fā)展的重要環(huán)節(jié)。在體外模型上,肝星狀細胞(HSC)在肝纖維化發(fā)病中的作用得到深入探討。HSC梯度離心分離和體外培養(yǎng)硏究的建立與推廣應(yīng)用始于上世紀八十年代,為研究肝臟基質(zhì)的產(chǎn)生和作用(如硬度、收縮性、組成、比較生物學(xué)等)提供了有力工具,并證實HSC具有產(chǎn)生膠原等細胞外基質(zhì)的能力,在肝損傷和纖維化發(fā)病中起重要作用研究證實,HSC體外激活模型可復(fù)制許多不是全部的體內(nèi)激活特征。因此分離和培養(yǎng)肝臟內(nèi)其他細胞也極為重要。動物模型臨床上肝纖維化的發(fā)病機制較為復(fù)雜,涉及到病毒復(fù)制、炎癥介質(zhì)釋放、免疫功能紊亂、自由基損傷等多個環(huán)節(jié)。因此,在抗肝纖維化藥物研究中可采取在損傷機制不同的多個模型上觀察藥物的保肝作用,綜合判斷藥效和作用機制。以下介紹幾種目前國際上常用的肝纖維化模型,中毒機制的研究也較為深入。肝纖維化造模肝纖維化動物模型的建立方法主要包括:化學(xué)藥物或毒物所致肝纖維化實驗動物模型,如:四氯化碳;膽管阻塞(BCM)、慢性酒精中毒性、實驗性免疫法、致癌物致肝纖維化動物模型等。動物的選擇:主要有小鼠、大鼠、鴨、家兔、家犬、獼猴等,但從造模的成功性、簡便性、穩(wěn)定性及經(jīng)濟性等方面考慮,目前大多選擇大鼠制備模型HF造模CC4法制備HF動物模型致癌物及毒物(化學(xué)性)HF動物模型膽管阻塞法誘導(dǎo)HF模型免疫性HF動物模型高脂造HF模型血吸蟲性HF動物模型的制備金屬離子攝入建立HF模型復(fù)合因素致肝纖維化模型四氯化碳(CCl4)誘導(dǎo)的肝纖維化模型四氯化碳又稱四氯甲烷,主要用于制造二氯二氟甲烷和三氯氟甲烷,還可用于制造氯仿和其它藥物,也可用作溶等。c4法造模的途徑有口服、腹腔注射及皮下注射,依據(jù)藥途徑和劑量的不同,所需時間8周至4個月不等。動物實驗研究證明,四氯化碳除致急性肝損傷外,反復(fù)多次的刺激可導(dǎo)致慢性肝損傷的發(fā)生,主要表現(xiàn)為肝細胞再生和肝纖維化臨床研究表明,四氯化碳是引起人類肝損害的劇毒類化學(xué)藥物原理:是cc4進入機體后在肝內(nèi)活化成自由基(CC和.oo3),后者可直接損傷質(zhì)膜,啟動脂質(zhì)過氧化作用,破壞肝細胞的膜性結(jié)構(gòu)等,造成肝細胞變性壞死方法:一般采用60%σI4橄欖油溶液給雌性SD大鼠以0.3m/1o0g體重皮下注射,每周2次,共12周,肝功能檢查模型組谷丙轉(zhuǎn)氨酶、總膽紅素均較對照組明顯升高,血清白蛋白水平