兔VX2腎癌模型的建立及其影像學表現【摘要】目的：建立兔VX2腎癌模型，觀察模型動物在螺旋CT，MRI及腎動脈造影的影像學表現.方法：新西蘭大白兔20只，采取VX2瘤塊種植法成瘤，分別在不同時段行螺旋CT，MRI及腎動脈造影檢查.結果：實驗組成瘤率100%.腫瘤在螺旋CT平掃時呈等密度或低密度灶，增強后呈低密度結節，邊緣環形強化.MRI平掃時，腫瘤在T1WI和T2WI上分別為較均勻低信號和稍高信號灶，3wk后腫瘤因壞死、液化而表現為高低密度混合型結節.腎動脈插管造影，VX2腎癌呈豐富血供表現.結論：兔VX2腎癌模型的最佳干預期是植瘤后2～3wk，螺旋CT篩檢精確可靠，可作動態觀測.

【關鍵詞】VX2腎癌；螺旋CT；磁共振成像；腎動脈造影；兔

0引言

裸鼠移植瘤常被用于腎癌的實驗研究，但因動物體型小，抗干預能力差，不適宜進行腫瘤介入研究.我們建立兔VX2腎癌模型，利用螺旋CT，MRI及腎動脈造影動態監測瘤灶變化，總結不同時段移植瘤的生長特征，為制定實驗動物篩檢標準和選擇最佳實驗干預期提供理論依據.

1材料和方法

材料新西蘭大白兔20只，體質量～kg，雌雄不限，由西安交通大學動物實驗中心提供；VX2瘤株由第四軍醫大學提供；PQ6000超高檔螺旋CT，PhilipsNT5型核磁共振，PhilipsAlluramonoplane型數字減影儀；3FSP微導管.

方法取冰凍VX2瘤細胞懸液，培養成1010/L,將2mL注入兔雙側后腿皮下即成為荷瘤種兔.2wk后形成直徑2cm大小包塊，完整切取腫瘤，去除包膜及壞死組織，剪取腫瘤邊緣生長旺盛部分，在Hanks液中盡量剪碎成直徑1mm，制成瘤細胞懸液.30mg/kg戊巴比妥鈉兔耳緣靜脈麻醉，俯臥位固定，取右12肋緣下切口3～4cm，暴露右腎下級后用眼科鑷穿刺cm隧洞，將前述剪碎后瘤組織植入其中，明膠海綿壓迫止血后用生物蛋白膠填塞.全部操作h內完成，術后青霉素40萬U/d,im,3d.造模后7,9,11,13,15,17,19,21,23,25及27d各處死1只兔子.取新鮮瘤組織標本，戊二醛固定，備透射電鏡觀察.取原發瘤灶及淋巴結，肝臟、肺臟可疑轉移灶，40g/L多聚甲醛溶液固定48h,石蠟包埋,連續5μm切片,HE染色,光學顯微鏡觀察.

螺旋CT及MRI檢測瘤細胞種植后7,9,11,13,15,17,19,21,23,25,27d，實驗動物在耳緣靜脈麻醉后行螺旋CT及MRI平掃及增強掃描.增強CT造影劑選用歐乃派克5mL，經耳緣靜脈以mL/s速度［1］注射.掃描條件：電壓120kV，電流200mA，螺距，層距5mm,層厚5mm.MRI采用頭線圈，常規定位后獲取冠狀位、軸位T1WI和T2WI的平掃圖像.

右腎動脈造影腫瘤最大直徑增至約3cm時，行DSA檢查.30mg/kg戊巴比妥兔耳緣靜脈麻醉，仰臥位固定，在右腹股溝區分離并固定股動脈，遠端7號絲線提起后剪口植入3FSP微導管，間斷注入300g/L泛影葡胺，顯示導管頂端，插至雙側腎動脈開口處，行右腎動脈DSA.

A:大體標本；B:光鏡下×40.

圖1兔VX2腎癌病理表現

2結果

實驗動物觀察期內無1例感染或死亡.本組動物全部成瘤，病理分型為鱗癌.植瘤后2～3wk，腫瘤體積持續穩定增長，邊緣完整、未超出腎臟輪廓，無液化、壞死，無遠處轉移，是施加實驗干預措施的最佳時期.3wk后腫瘤體積迅速增大至20～25cm3以上，中央壞死、液化，壓迫周圍組織并出現肝、肺、腎門淋巴結轉移.兔VX2腎癌大體標本為突出于腎臟表面的結節樣包塊，與周圍分界清楚，有完整包膜形成，質地較硬，切面呈魚肉樣，晚期瘤體中央因缺血壞死而成豆渣樣.光鏡下腎小球和腎小管結構清晰，腫瘤細胞呈彌漫性或片灶狀分布，病理分型為鱗癌.

螺旋CT及MRI表現移植瘤螺旋CT平掃呈低密度或等密度結節狀病變，CT值40~50Hu.增強掃描呈低密度，邊緣薄環狀強化，強化環可表現為完整型(圖2A)、線條樣和結節樣(圖2B)，與周圍正常腎臟組織分界清楚.腫瘤液化、壞死區CT表現出明顯低密度灶［２］.2wk時MRI平掃T1WI和T2WI像，腫瘤病灶分別為較均勻的低信號和稍高信號，3wk后因壞死、液化，腫瘤T1WI低信號灶內出現更低信號，而T2WI稍高信號灶內出現高、低信號混雜結節.

A,B:螺旋CT;C:MRI.

圖2兔VX2腎癌的螺旋CT和MRI表現

表現3FSP導管選擇性右腎動脈造影，見腎臟輪廓完整，右腎動脈主干略增粗，下極分支粗細不均，腫瘤周圍有增多、紊亂的血管網包繞呈抱球狀，可見細小分支深入瘤體內.正常腎組織濃染，腫瘤區染色劑淺淡.

圖3兔VX2腎癌的DSA表現

3討論

兔VX2腎癌模型已成功建立，但在造模方式上仍有值得改進之處，有關兔VX2移植瘤的影像學及形態學資料有待進一步完善［３］.本研究實驗動物全部成瘤，首先與采用瘤組織塊整體植入有關，它提高了單位面積的瘤細胞密度，增強了對機體免疫抵抗的屏障作用.其次，瘤塊修剪在冰塊上進行，手術操作無菌、輕柔、熟練，h內完成；植入后明膠海綿壓迫止血并用生物蛋白膠堵塞針道，防止瘤塊逆出或術野種植；術后預防感染，也與提高動物成瘤率有關.VX2瘤株種植成活后依次經歷腫瘤血管形成期、腫瘤血管穩定期和腫瘤血管退化期3個階段［４］.成瘤初期腫瘤均呈指數性生長，推測2～3wk時進入穩定生長期，腫瘤體積增長穩定，無液化壞死和遠處轉移，是施加實驗措施的最佳階段.3～4wk時因瘤體積過大，中央血供不足易發生壞死、液化及遠處肝、肺、腎門淋巴結轉移等.4～5wk后因腫瘤血管退化，腫瘤大片壞死，體積過度倍增而形成廣泛浸潤、粘連，進而影響試驗療效的準確性.螺旋CT對種植1wk后的腫瘤檢出率為70%，2wk后檢出率達100%，分析其中可能的影響因素有：①腫瘤直徑小于掃描層距，造成遺漏；②呼吸動度影響.故動物早期未檢出腫瘤，并不能定性為造模失敗，如果聯合MRI技術則可明顯提高檢出率.MRI圖像清晰，可以發現早期微腫瘤.MRI圖像分辨率與掃描時間成正比，但反復在麻醉狀態下進行檢查，降低荷瘤兔免疫力，并可能促使腫瘤侵襲.我們認為，只要選定適宜的技術、條件和參數，植瘤后2wk時，螺旋CT及MRI檢查的影像密度或信號均勻，腫瘤檢出率為最高.腎動脈插管操作簡便、微創，適宜各類介入研究，螺旋CT用于實驗動物的影像學觀察具有方便、準確、無創、可重復性強的優點，值得動物實驗采用.

【參考文獻】

［1］賈洪順，全顯躍，曾盛，等.兔VX2肝癌CT及MRI動態評估［J］.第一軍醫大學學報，2002,2:41-144.

［2］張琳，丁仕義，黃學全.兔VX2肝移植癌模型傳代的改進和螺旋CT評價［J］.第三軍醫大學學報，2002,24:1125-1127