ImageLab ?中文操作手冊FastandReliableImageLab 全自動圖像獵取和分析軟件用于MolecularImagerChemiDoc?XRS+ 、MolecularImagerGelDoc?XR+ 和CriterionStainFree TM 成像系統，可應用于凝膠電泳和轉印膜的數字成像和分析，而自動化的工作流程能加速圖像獵取步驟及參數優化，并針對調整好的凝膠或轉印膜影像進展系統性分析，進而得到所需的分析數據結果。一、軟件操作界面主窗口工具列啟動精靈分析工具列程序桌面狀態列主窗口工具列檔案治理 分析數據ResultsData顯示工具列圖放縮全亮改轉圖像大小窗度變換像顯口明圖3D信示 大 暗 像 成 息設 小 度 色 模定 轉 彩 式換 像分析工具列〔1〕圖像工具〔ImageTools〕〔2〕泳道及條帶工具〔LaneandBandTools 〕〔3〕分子量工具〔MWMolecularWeight〕〔4〕自動定量工具〔QuantityTools〕〔5〕注釋工具〔AnnotationTools〕〔6〕手動定量工具〔VolumeTools〕二、使用ImageLab 軟件進展化學發光圖像獵取流程建立圖像獵取程序：在凝膠成像〔GelImaging〕對話框中選擇Chemi〔化學發光〕應用程序在成像區域〔ImagingArea 〕對話框中的下拉式選單中選擇適宜的樣品大小〔非必需，可之后通過PositionGel 選擇〕選擇成像曝光〔ImageExposure 〕方法，可以人為評估曝光時間并以手動設定〔 ManualExposure 〕，或是使用信號累積模式〔SignalAccumulationMode ，SAM〕來進展操作。在建立一個化學發光的程序時最難的任務就是圖像曝光確實定，由于您想獲得一個充分利用了相機大的動態范圍的圖像。過短的圖像曝光時間可能使高于膜背景的微弱信號不能被識別；過長的圖像曝光時間能夠使得某些條帶飽和〔也就是說，超出了相機準確報告信號的力氣〕。假設這是您第一次用 ChemiDoc XRS+分析化學發光樣品，您需要在使用手控或信號累積模式〔SAM〕之前打算一個適宜的成像時間框架。獲得這個信息的最好的方式是取得一個相對短的手工曝光并利用ImageLab 里的工具估量最適的曝光時間。手動曝光選擇手動設定曝光時間〔Manuallysetexposuretime〕10秒。選擇Highlightsaturatedpixels 。把膠置于透射箱的中心位置。在程序窗口中點擊 按鈕。觀看顯示器中樣品的實時圖像，翻開照膠系統的門并移動樣品直到位于視野的中心區域。可利用照相機的變焦滑板小。

調整成像區域的大選擇 按鈕獲得你的第一個圖像。假設所需的圖像消滅在計算機的顯示器上，確認圖像中是否包含紅色的飽和區域。假設有飽和區域存在，請重以較短的曝光時間來獵取圖像。假設無飽和區域存在，則可移動鼠標置于最暗的條帶之上，在較低的右下角ImageLab窗

1994，照相機能記錄的最大值的 32分之一〔最大值為65,535〕。用你的最初的10秒曝光再乘以30就可在照相機的最大動態范圍四周成像你的樣品。假設你只需針對單一圖像的成像時間進展評估，可直接在手動曝光區域中輸300。信號累積模式〔Signal Accumulation Mode，SAM〕假設預估方法缺乏以準確滿足您的目的，請選擇SAM按鈕，然后按Setup按鈕。一個的對話框會跳出來，其包含有可輸入細分的成像時間的領域。在這個例子中，我們已經輸入了小于和大于我們原始的 300秒曝光估量時間，由于我們有理由信任準確的成像時間將會在這些時間之中。我們總共想要

5個成像，推想其中一個將會與最正確成像極為接近。一個您的 SAM設定的圖像顯示消滅在對話框里。而SAM設定的影像顯示對話窗口，在您選擇 按鈕后再點選 窗口會顯示相關進度圖標來說明整體圖像獵取的時間。在 250秒獵取第一個圖像，同時一個小的縮略圖會消滅在窗口的下方，以此類推整個過程將持續到獵取全部的圖像。就像前面做過的那樣，通過移動鼠標在圖像上，您能判定強度值。您也可以通過使用位于程序窗口左邊的圖像轉換窗口〔 ImageTransform 〕中的調整劃片轉變圖像的表觀。在SAM程序中的任何地方您都能通過點擊縮略圖查看圖像。假設確定調整到符合您要求的圖像時，點擊 按鈕舍棄其它不適合的圖像來完成獵取圖像的程序。也可在 SAM獵取圖像的過程中或之后來保存需要的全部圖像，直接點選右鍵單點縮圖窗口內的圖像即可進展存盤保存下來。在打算獵取圖像的數量時，記住增加 SAM圖像會導致背景信號的平均。當較多的圖像被獲得時，在背景強度水平四周的弱的信號將會變得難以識別。假設區分最弱的信號很重要，我們推舉在適宜的時間下獲得單一的成像。三、建立全自動圖像獵取及分析程序 〔Creating Protocols 〕啟動分析精靈窗口 --STEP1.GELIMAGING〔1〕依據應用〔NucleicAcid/Protein/Blots 〔2〕選擇成像區域〔ChoosetheImagingArea 〕〔3〕選擇成像曝光時間〔ChooseImage ExposureTime 〕

Chooseanapplication 〕〔4〕選擇顯示設定〔ChooseDisplayOptions,HighlightsaturatedpixelsandImageColor〕圖像自動分析〔Analyze Image〕--STEP2.DETECTLANESANDBANDS設定DETECTLANESANDBANDS的參數〔LowBandDetectionSensitivity 〔Lowsensitivity=25 〕、HighBandDetectionSensitivity 〔Highsensitivity=75 設定靈敏度。分子量分析〔Analyze WEIGHT

Weight 〕--STEP3.ANALYZEMOLECULAR設定AnalyzeMolecularWeightSettings 的分子量標準品〔MolecularWeightStandard 〕Bio-Rad的各類標準品〔包括核酸、蛋白〕均已預存。固然，您也可以依據您的試驗設置您自定義的分子量標準品。并同時設定分子量標準品的泳道及回歸方式。報告輸出設定〔Report Settings 〕--STEP4.SPECIFYCONTENT OFREPORTS結果〔Results Overview〕及報告〔Report 〕〔1〕數據顯示信息〔Displaying Data〕〔2〕分析表格設定〔AnalysisTableOptions 〕〔3〕Lane 信息〔LaneProfile 〕〔4〕標準曲線〔StandardCurve 〕四、建立圖像分析程序 〔Creating ImagesAnalyzing Protocols 〕圖像分析〔Analyzing Images 〕〔1〕AnalysisToolBox〔A〕自動分析〔AutoAnalysis 〕點選 進入DetectionSettings 窗口設定Detectlanesandbands 的參數〔LowBandDetection Sensitivity〔Lowsensitivity=25 〕、HighBand DetectionSensitivity 〔Highsensitivity=75 〕或自行設定靈敏度〕，接著再設定Molecular WeightAnalysisSettings 的MolecularWeightStandard 、StandardLanes 及RegressionMethod 參數。圖像工具〔Image Tools〕可進展水平或垂直翻轉、左右旋轉90℃或自由旋轉〔Rotate〕、裁剪〔Crop〕、反轉〔InvertData 〕及迭合〔Merge〕。Lanes 及Bands 工具〔Lane andBand Tools〕LaneTab使用自動〔Automatic〕或手動〔Manual〕Lane功能針對全部的Lanes〔AllLanes〕進展大小調整〔Resize 〕、〔Adjust〕及刪除〔Delete〕等參數調整。針對單一Lane〔SingleLane 進展增加〔Add〕、彎曲〔Bend〕、移動〔Move〕、寬度〔Width〕及刪除〔Delete〕等參數調整。利用LaneBackgroundSubtraction 進展背景值的扣抵，并可點選〔ApplytoselectedLane 〕Lane進展調整。-可以藉由RollingDisk參數設定〔1-99mm〕來去除背景值。〔2〕BandsTab通過DetectBands 進展自動搜尋Bands 功能或手動進展增加〔Add〕、刪除〔Delete〕及〔Adjust〕等參數調整。分子量分析工具〔 Molecular Weight Analysis Tools〕此工具可由的標準品測算相對的分子量或堿基對〔定量工具〔Quantity Tools〕〔1〕相對定量〔RelativeQuantityTab 〕

basepairs 〕。從圖像中選擇的標準品〔referenceband 〕及其標準品濃度〔以綠色R表示〕，其分析結果可從Analysistable 觀看。確定定量〔AbsoluteQuantityTab 〕通過選擇標準品濃度的bands 〔至少兩個以上,以R表示〕，并設定適宜的回歸參數計算所得之標準曲線來推算目標bands 確實定濃度〔回歸參數設定如Linear(較常用)、Point-to-Point 或Cubicspline〕。RegressionMinimumnumberMinimumnumberwithMethodofstandardForceThroughOptionLinearbands21Point-to-Point21CubicSpline54注釋工具〔Annotation Tools〕可以通過AddAnnotations 工具增加文字批注及箭頭批注，并可調整批注相對位置〔Alignment〕、文字屬性、顏色及旋轉方向等參數定量工具〔Volume Tools〕按下 選擇較適合的Ban