大腸桿菌培養基優化第一頁，共十四頁，編輯于2023年，星期日實驗目的1.掌握發酵培養基的配制方法2.熟悉用正交試驗優化發酵培養基的方法3.學習比濁法測定發酵液菌濃的方法第二頁，共十四頁，編輯于2023年，星期日實驗原理一、培養基的配制1.確定培養基的基本組成2.確定所用原材料的種類3.確定所用原材料的濃度配比關系第三頁，共十四頁，編輯于2023年，星期日二、培養基優化1.單因素法2.正交試驗法3.均勻試驗設計第四頁，共十四頁，編輯于2023年，星期日三、正交試驗法1.概念利用已經設計好的表格--正交表--來安排試驗并進行數據分析的一種方法。它是從全面試驗中挑選出部分有代表性的點進行試驗，這些有代表性的點具備了“均勻分散，齊整可比”的特點，是一種高效率、快速、經濟的實驗設計方法。第五頁，共十四頁，編輯于2023年，星期日2.基本工具——正交表記號：Ln（tm）L：正交表的符號n：表的行數（可安排試驗的次數）t：表中的字碼數（水平數）m：表的列數（最多可安排因素個數）L8(27)L9(34)L16(45)第六頁，共十四頁，編輯于2023年，星期日3.正交表的特點試驗點分布均勻、整齊可比任何一列中各字碼（水平）都出現，且出現的次數相等任何兩列中各橫行組成的數字對，包含著所有可能的數字對，且各種數字對出現的次數相等第七頁，共十四頁，編輯于2023年，星期日試驗的基本步驟:1明確任務確定指標2制定因素水平表（1）確定因素（A、B、C……）（2）選擇因素的變化范圍（3）確定因素水平數（4）制定因素水平表第八頁，共十四頁，編輯于2023年，星期日3設計試驗方案（1）選擇正交表（2）表頭設計（不混雜）（3）列出試驗方案（4）進行實驗第九頁，共十四頁，編輯于2023年，星期日4析試驗結果(1）方法一：直接比較(2)方法二:直觀分析直觀分析法是通過對每一因素的平均極差來分析問題。所謂極差就是平均效果中最大值和最小值的差。有了極差，就可以找到影響指標的主要因素，并可以幫助我們找到最佳因素水平組合。極差的大小反應在所選擇的因素水平范圍內該因素對測定結果影響的程度。極差大的因素在所選擇的因素水平范圍內對測定結果的影響最大，在測試過程中必須嚴格控制。第十頁，共十四頁，編輯于2023年，星期日四、比濁法測定發酵液菌濃細菌培養物在生長過程中，由于原生質含量的增加，會引起培養物混濁度的增高。細菌懸液的混濁度和透光度成反比、與光密度成正比，透光度或光密度可借助光電比濁計精確測出，因此可用光電比濁計測定細胞懸液的光密度（OD值），表示該菌在特定實驗條件下的細菌相對數目，進而反映出其相對生長量。第十一頁，共十四頁，編輯于2023年，星期日操作步驟一、培養基的配制1.將酵母浸膏、蛋白胨、氯化鈉作為培養基的主要影響因素，每一因素設定3個水平，進行三因素三水平的正交試驗。2.按表2配制9組培養基入100ml錐形瓶中，每瓶25ml。二、滅菌錐形瓶培養基：標記，加棉塞、報紙包扎。1ml移液管2支121℃，滅菌20min第十二頁，共十四頁，編輯于2023年，星期日三、接種將菌種（教師預先培養好）搖勻后用無菌移液管吸取0.5ml懸液，接到每一組培養基中（接種量要完全一樣）四、發酵將三角瓶置于恒溫搖床中，37℃，120rpm培養12h第十三頁，共十四頁，編輯于2023年，星期日五、比濁法測定各發酵液OD值取下搖瓶，以空白培養